材料
1.96孔110-120°V型医用血凝板
2.10-100微升可调量移液器
3.塑料嘴
4.O型口蹄疫血凝抗原(口蹄疫O型正向血凝诊断液),每瓶5ml,可检测血清25-30头份
5.阳性对照血清,每瓶2ml,阴性对照血清,每瓶2ml
6.稀释液,每瓶10ml
7.待检库存血清0.2-0.5ml于56℃水浴灭活30分钟
操作步骤
1.检测样品前,应将冻干的血凝抗原,每瓶加稀释液5ml,摇匀后置4℃冰箱内静置7-10天。
2.稀释待血清样品:在血凝板上的{dy}排1-9孔各加稀释液50ul。
3.取待检库存血清50ul,加入第1孔混匀,吸取50ul加入第2孔,混匀后并从中取出50ul加入第3孔……直至第9孔,并从中取出50ul丢弃,使第1排的第2-7孔,每孔的血清量保持50ul,此时第1排第1孔的稀释度为1:2、第2孔为1:4,第3孔1:8,第4孔为1:16,第5孔为1:32,第6孔为1:64,第7孔为1:128,第8孔为1:156,第9孔为1:512。
4.滴加对照血清:在血凝板上第1排第10孔,加1:16倍稀释的阴性血清50ul;第11孔加阳性对照血清(1:512倍稀释)50ul,第12孔加稀释液50ul。
5.滴加血凝抗原:在第1排的第1-12孔,各加口蹄疫O型血凝抗原25ul,立即将血凝板置于微量振荡器上,振荡1分钟或用手摇匀。将血凝板放置在白纸上,观察每孔内的红细胞是否充分混匀,若血球均匀无沉积孔底,便可在室温下静置1.5-2小时判定检查结果。
判定方法和标准
先观察阴性血清孔和稀释液孔,无凝集现象,红细胞全部沉于孔底或呈“+”凝集为合格。阳性血清孔应出现“++”或“+++”凝集为合格。{zh1}观察待检血清各孔,以呈现“++”凝集的血清{zd0}稀释度为该份样品的血凝价。
猪O型口蹄油佐剂灭活苗接种猪的抗体水平达到1:128以上为免疫合格。
“-”表示红细胞{bfb}沉于底,xx不凝集
“+”表示约有25%的红细胞发生凝集
“++”表示50%红细胞出现凝集
“+++”表示75%红细胞凝集
“++++”表示90-{bfb}红细胞凝集