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DNA探针 分享修改删除 [原创 2010-03-10 14:29:54]   
DNA是最常用的核酸探针,指 长度在几百碱基对以上的双链DNA或单链DNA探针。现已获得DNA探针数量很多,有xx、病毒、原虫、xx、动物和人类细胞DNA探针。这类探针多为某 一基因的全部或部分序列,或某一非编码序列。这些DNA片段须是特异的,如xx的毒力因子基因探针和人类Alu探针。这些DNA探针的获得有赖于分子克隆 技术的发展和应用。以xx为例,目前分子杂交技术用于xx的分类和菌种鉴定比之G+C百分比值要准确的多,是xx分类学的一个发展方向。加之分子杂交技术 的高敏感性,分子杂交在临床微生物诊断上具有广阔的前景。xx的基因组大小约5×106bp,约含3000个基因。各种xx之间绝大部分DNA是相同的, 要获得某xx特异的核酸探针,通常要采取建立xx基因组DNA文库的办法,即将xxDNA切成小片段后分别克隆得到包含基因组的全信息的克隆库。然后用多 种其它菌种的DNA作探针来筛选,产生杂交信号的克隆被剔除,{zh1}剩下的不与任何其它xx杂交的克隆则可能含有该xx特异性DNA片段。将此重组质粒标记 后作探针进一步鉴定,亦可经DNA序列分析鉴定其基因来源和功能。因此要得到一种特异性DNA探针,常常是比较繁琐的。探针DNA克隆的筛选也可采用血清 学方法,所不同的是所建DNA文库为可表达性,克隆菌落或噬斑经裂解后释放出表达抗原,然后用来源xx的多克隆抗血清筛选阳性克隆,所得到多个阳性克隆再 经其它xx的抗血清筛选,{zh1}只与本xx抗血清反应的表达克隆即含有此xx的特异性基因片段,它所编码的蛋白是该菌种所特有的。用这种表达文库筛选得到的 显然只是特定基因探针。
  对于基因探针的克隆尚有更快捷的途径。这也是许多重要蛋白质的编码基因的克隆方法。该方法的{dy}步是分离纯化蛋白质, 然后测定该蛋白的氨基或羟基末端的部分氨基酸序列,然后根据这一序列合成一套寡核苷酸探针。用此探针在DNA文库中筛选,阳性克隆即是目标蛋白的编码基 因。值得一提的是真核细胞和原核细胞DNA组织有所不同。真核基因中含有非编码的内含子序列,而原核则没有。因此,真核基因组DNA探针用于检测基因表达 时杂交效率要明显低于cDNA探针。 DNA探针(包括cDNA探针)的主要优点有下面三点:①这类探针多克隆在质粒载体中,可以无限繁殖,取之不尽,制备方法简便。②DNA探针不易降解(相 对RNA而言),一般能有效抑制DNA酶活性。③DNA探针的标记方法较成熟,有多种方法可供选择,如缺口平移,随机引物法,PCR标记法等,能用于同位 素和非同位素标记.
  DNA探针可以用来诊断寄生虫病,现场调查及虫种鉴定,可用于病毒性肝炎的诊断,遗传性疾病的诊断,可用于改造变异的 基因,可用于检测饮用水病毒含量。具体方法:用一个特定的DNA片段制成探针,与被测的病毒DNA杂交,从而把病毒检测出来。与传统方法相比具有快速、灵 敏的特点。传统的检测一次,需几天或几个星期的时间,xx度不高,而用DNA探针只需{yt}。据报道,能从1t水中检测出 10个病毒来,xx度大大提高。
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