截形十二卷的组织培养与快速繁殖

孙     涛1（天津医科大学基础医学院 , 天津300070）
李 德 森2（南开大学生命科学学院 ,    天津300071）

Tissue Culture and Rapid Propagation of Haworthia truncata
SUN Tao ( College of Preclinical Medicine ,Tianjin Medical University ,Tianjin 300070)
LI De-Sen ( College of Life Sciences, Nankai University ,Tianjin 300071)

1植物名称      截形十二卷（Haworthia truncata），俗称玉扇。
2材料类别    成年玉扇的春生花茎（其中大部分花蕾已出现但尚未开放）。供试植株来源于日本カクタヌ专门家联盟。
3培养条件 （1）启动培养基：M S + 6BA 3 mg•L-1( 单位下同)+ NAA 0.2 ；（2）分化培养基：M S + KT 3 + NAA 0.2 ；（3）增殖培养基： M S + KT 1.5 + NAA 0.1 ；（4）复壮与生根培养基：M S + NAA 0.1 。 以上培养基均加入3%蔗糖,0.7%琼脂，pH6.0。培养的温度为（25±2）℃，光照8 h•d-1,光照度为2000 lx。
4生长与分化情况
4.1无菌材料的获得 将取下的材料经流水冲洗5 min，1%新洁尔灭浸洗10min，无菌水冲洗3次，2%NaOCl溶液8 min，无菌水再冲洗4～5次。将xx的材料置于无菌滤纸上，剪成1 cm左右的小段，即成外植体。
4.2启动培养    将玉扇的外植体接入启动培养基（1），20 d后花子房部形成黄绿色疏松的小球状愈伤组织，增殖速度不快，未见分化。
4.3分化培养     将上述培养物转入分化培养基（2）中，30 d后愈伤组织转绿并开始分化，15 d后能形成大量丛生芽。
4.4芽的增殖    将上述培养物转入增殖培养基(3)。大约20 d后各瓶都可以形成丛生苗。将苗丛分割后增殖速度较适中，芽基部无愈伤组织或有极少愈伤组织形成，植株易分离，同时大约50%的苗有2～3条须根生成。增殖培养在转瓶时切忌将培养物分离得太多，这样会延长继代培养的缓冲期。继代时间以20 d左右一次较好，此时苗的繁殖系数可达到3～4倍，这样得到的苗生长情况较好，出瓶容易。

4.5壮苗与生根 在增殖培养基（3）上得到的苗有些已生根，可剪取有根大苗直接出瓶。但{zh0}先转入生根培养基（4）中 培养
1～2个月左右，可使苗较快的生长。在转入生根培养基后，需要增大光照强度到3000 lx,{zh0}使用散射阳光，生根率90%以上。
4.6移栽 采用蛭石：珍珠岩=2:1的混合基质，经高压xx后装入苗钵，距顶端大约5 cm。将开口炼苗2 d的出瓶苗均匀插入基质中，用家用保鲜膜保湿。用低浓度的多菌灵溶液浇灌，逐渐见光。经试验发现用散射日光代替荧光可提高成活率到98%以上，其中不经生根的苗成活缓冲期很长（4～6周），而经生根的苗缓冲期仅2周，便可见生长。经日光灯照射的生根苗明显不如用散射光培养的苗，无论长势还是缓冲期的长短，前者都逊色于后者。
5 意义与进展
      截形十二卷是百合科蛇尾兰属的小型肉质植物，原产南非开普省。其形态与一般蛇尾兰属种类的差异很大，其变异类型很多，是植物园和园艺植物爱好者喜欢收集的珍贵品种。其外形精巧美观，很适于家庭养护，但由于繁殖率很低，故而难于普及。蛇尾兰属植物大多使用分株和种子繁殖，采用组织培养方法可能是解决截形十二卷繁殖与普及的有效途径之一，同时其组培的成功对该物种及其园艺品种的种质保存也有一定的参考价值。少数蛇尾兰属植物已组培成功，而截形十二卷的组培未见报道。

寿的组织培养与快速繁殖

孙 涛1（天津医科大学基础医学院 , 天津 300070）
金 蕊2    李 德 森3（南开大学生命科学学院 , 天津300071）

Tissue Culture and Rapid Propagation of Haworthia comptoniana
SUN Tao ( College of Preclinical Medicine ,Tianjin Medical University ,Tianjin 300070)
JIN Rui , LI De-Sen ( College of Life Sciences, Nankai University ,Tianjin 300071)

1植物名称    正康平寿（Haworthia comptoniana）,简称寿。

2材料类别    成年寿的春生花茎（其中大部分花蕾已出现但尚未开放）。供试植株来源于日本カクタヌ专门家联盟。

3培养条件 （1）启动培养基：M S + 6BA2mg•L-1( 单位下同)+ KT 1+NAA 0.2 ；（2）分化培养基：M S + 6BA 1+KT 1 ；（3）增殖培养基： M S + 6BA0.5+KT0.5+ NAA 0.1 ；（4）复壮与生根培养基：1/2MS + NAA 0.1 。 以上培养基均加入3% 蔗糖,0.7% 琼脂，pH 5.8 , 培养的温度为（25±2）℃，光照8 h•d-1,光照度为2000 lx。

4生长与分化情况

4.1无菌材料的获得 将取下的材料经流水冲洗15 min，1%新洁尔灭浸洗10min，无菌水冲洗3次，0.1%HgCl2溶液(加入Tween20 1ml)8 min，无菌水再冲洗7-8次。将xx的材料置于无菌滤纸上，剪成1 cm左右的小段，即成外植体。

4.2启动培养    将寿的外植体接入启动培养基（1），20-30 d后花子房部或花茎截面膨大，形成黄绿色疏松的小球状愈伤组织，增殖速度较快，可见愈伤组织表面出现绿色小点并有分化迹象。将此时形成的愈伤组织转于相同的培养基，可大量增殖，15d后形成整瓶愈伤组织，这对该植物的快繁和种质保存有一定意义。

4.3分化培养     将上述培养物转入分化培养基（2）中，30 d后愈伤组织上形成无数浓绿色小点,继而形成绿色球状小体（GCB），而后开始分化，再经过15 d后能形成大量丛生芽。

4.4芽的增殖    将上述培养物转入增殖培养基(3)。大约20 d后各瓶都可以形成丛生苗。将苗丛分割后增殖速度较适中，芽基部无愈伤组织或有极少愈伤组织形成，植株易分离，同时大约10%的苗有2～3条很细的须根生成,且有壮苗效果。继代时间以20 d左右一次较好，此时苗的繁殖系数可达到3～4倍，这样得到的苗生长情况较好，出瓶容易。

4.5壮苗与生根 在增殖培养基（3）上得到的苗有些已生根，可剪取有根大苗直接出瓶。但{zh0}先转入生根培养基（4）中 培养
1～2个月左右，可使苗较快的生长。在转入生根培养基后，需要增大光照强度到3000 lx,{zh0}使用散射阳光，生根率90%以上。

4.6移栽 采用蛭石：珍珠岩=2:1的混合基质，经高压xx后装入苗钵，距顶端大约5 cm。将开口炼苗2 d的出瓶苗取出风干1-2d（此时新生的须根部分干枯但是根原基仍保留，新根会很快萌发），然后均匀插入基质中，适当保湿。用低浓度的多菌灵溶液浇灌，逐渐见光。经试验发现用散射日光代替荧光可提高成活率到98%以上，其中不经生根的苗成活缓冲期很长（4～6周），而经生根的苗缓冲期仅2周，便可见生长。经日光灯照射的生根苗明显不如用散射光培养的苗，无论长势还是缓冲期的长短，前者都逊色于后者。另外出瓶苗适当风干对该种肉质植物的新根萌发有一定的促进作用。

5 意义与进展

     寿是百合科蛇尾兰属(旧称十二卷属)的小型肉质植物，原产南非开普省。其植株矮，叶呈莲座状排列，叶顶端透明并有花纹，形成美丽的“窗”。其类似种或变异种很多，如正康平寿、寿宝殿、毛蟹、克里克特等等，它们是植物园和园艺植物爱好者喜欢收集的珍贵品种。其外形精巧美观，很适于家庭养护，但由于繁殖率很低，故而难于普及。蛇尾兰属植物大多使用分株、叶插和种子繁殖，采用组织培养方法可能是解决寿等蛇尾兰属植物繁殖与普及的有效途径之一，同时其组培的成功对该物种及其园艺品种的种质保存也有一定的参考价值。部分蛇尾兰属植物国际上已组培成功，而寿的组培在国内未见报道。
卧牛的组织培养与快速繁殖

夏 时 云1，汪 远2，孙    涛3*（1.天津农业科学院生物技术中心，天津300192，2.北京景山学校，北京100006，3.天津医科大学基础医学院，天津300070）

Tissue Culture and Rapid Propagation of Gasteria armstrongii
XIA Shi-Yun1, WANG Yuan2 ，SUN Tao3* (The Center of Biotechnology, Tianjin Academy of Agricultural Sciences, Tianjin300192; Beijing Jingshan School , Beijing 100006; College of Preclinical Medicine ,Tianjin Medical University ,Tianjin 300070 )


1植物名称    卧牛（Gasteria armstrongii）
2材料类别    侧芽。供试植株来源于日本
カクタヌ专门家联盟。
3培养条件 （1）启动培养基：M S + 6-BA 2.0 mg•L-1 (单位下同)+ NAA 0.2 ；（2）分化培养基：M S + 6-BA 2.0 + KT 1.0 + PVP 2g•L-1 ；（3）增殖培养基： M S + 6-BA 1.0 + KT 0.5 + PVP 1 g•L-1 ；（4）复壮与生根培养基：1/2M S + NAA 0.2 。 以上培养基均加入3%蔗糖,0.7%琼脂，pH6.0。培养的温度为（25±2）℃，光照8 h•d-1,光照度为2 000 lx。
4生长与分化情况
4.1无菌材料的获得 除去侧芽外周叶片，保留生长点附近2~3片嫩叶。经流水冲洗10 min，1%新洁尔灭浸洗5min，无菌水冲洗3次，0.1%HgCl2溶液8 min，无菌水再冲洗6次。将xx的材料置于无菌滤纸上，吸取残留液体，切去叶片{jd0}，将侧芽纵切分开，即成外植体。
4.2启动培养    将卧牛的外植体接入启动培养基（1），20d后依次从生长点、茎截面及叶截面等处陆续产生黄绿色愈伤组织，并伴有褐变现象，此时需将材料转入新鲜培养基中，否则愈伤组织会出现衰退。转移后的愈伤组织生长迅速，再经过30d左右生长点愈伤组织{zx0}形成绿色球状小体 (GCB)，大约40~60d后叶截面和茎截面愈伤组织才开始形成GCB。
4.3分化培养     切取绿色的GCB团块转入分化培养基（2）中，约30 d后GCB开始向芽分化，从表面可以很直观地看到每个球状体都可以形成一个芽点，且绿色加深。继续培养20d，愈伤组织团块顶部的GCB首先形成芽，继而整个团块形成丛生芽，底部GCB分化较差，仍然保持GCB状态。分化形成的芽可以在5d内伸展出{dy}对叶片。
4.4芽的增殖    将上述丛生芽分割成4~5丛，每丛含有5~8个芽，并弃去底部未分化组织后转入增殖培养基(3)。经过7d左右的静止期，增殖开始并加速，大约30 d后各瓶都可以形成整瓶丛生芽。继代3代之后或者继代间隔过长，极易发生褐变，PVP的使用可以适当减缓褐变加重，但不能避免，故转瓶周期应控制在25d以内，同时切去基部的愈伤组织也可以减轻褐变。增殖倍数为4~6倍。
4.5壮苗与生根 将（3）中的丛生芽分割个单个芽，转入（4）中，每瓶6~8个。加强光照至3000lx或者采用散射阳光代替日光灯。大约10d，即可见50%左右的芽开始生根，20d后80%的芽生根，根短粗，2~3条。30d后芽的叶片增厚，第3~4片叶生出，根系变化不明显，有轻微褐变现象。
4.6移栽 采用蛭石：珍珠岩：泥炭=2：1：1的混合基质，经高压xx后装入苗钵，距顶端大约5 cm。打开瓶口炼苗2~3 d，依照孙涛等的“多肉植物干处理出瓶法” [1]进行出瓶：取出植株，仅保留1~2条粗根，去掉其余根系，遮荫风干2~3d，扦插于基质中，用青霉素（80万u•L-1）、链霉素（0.5 g•L-1）、甲硝唑（0.1 g•L-1）、制霉菌素（100u•L-1）配成的“四抗”溶液浇灌，逐渐见光。采用“四抗”和日光辅助照射的瓶苗成活率可达90%以上。
5 意义与进展
    卧牛是百合科脂麻掌属的多肉植物，原产于非洲开普省。此种植物是叶多肉的多肉植物之一和百合科多肉植物的代表种之一，各国植物园和园艺单位对其作了广泛收集和研究。卧牛主要通过播种、侧芽或叶插繁殖，繁殖系数很低，生长十分缓慢，不利于园艺品种的筛选和保存。组织培养技术可能是解决此问题的有效手段之一。国内曾有园艺种“白云卧牛”组织培养的报道，但本文所用的方法与之有明显区别。本文中的卧牛快速繁殖技术正在逐步应用于园艺生产。



参考文献
1.孙涛，金蕊，李德森等. 康平寿的组织培养与快速繁殖 .植物生理学通讯，2003，39（3）：233
2.孙涛，李德森.　截形十二卷的组织培养与快速繁殖. 植物生理学通讯，2002，38（6）：586