将原种再次扩接在同样的木屑培养基上，在适温条件下培养30--35天即为栽培种（又叫生产种），可用于生产栽培。栽培种可用750毫升菌种专用瓶，由于使用量大，所以通常多采用聚丙烯菌种袋。袋的规格有12厘米x24厘米、15厘米x28厘米、17厘米x33厘米等，可根据各种菇耳特性和当地习惯选择使用。培养基xx采用常压xx灶xx，要求xx温度达100℃，保持8--10小时，达标后趁热卸袋冷却。待料温降至25℃以下时，在无菌条件下接入选定品种的原种。每瓶原种可扩接成50--60瓶栽培种。菌种培育室要求干净，防强光，室温掌握在23--25℃，并经常检查，发现杂菌污染应及时淘汰，不断选优去劣。当菌丝长满袋，{jd0}菌丝反转上爬1--3厘米时，为适龄的栽培种。
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