HPLC故障及排除方法

（一）保留时间变化
1。柱温变化：柱恒温；
2。等度与梯度间未能充分平衡：至少用10倍柱体积的流动相平衡柱
3。缓冲液容量不够：用25mmol/L的缓冲液
4。柱污染：每天冲洗柱
5。柱内条件变化：稳定进样条件，调节流动相
6。柱快达到寿命：采用保护柱

（二）保留时间缩短
1。流速增加：检查泵，重新设定流速
2。样品超载：降低样品量
3。键合相流失：流动相PH值保持在3~7。5检查柱的方向
4。流动相组成变化：防止流动相蒸发或沉淀
5。温度增加：柱恒温

（三）保留时间延长
1。流速下降：管路泄漏，更换泵密封圈，排除泵内气泡
2。硅胶柱上活性点变化：用流动相改性剂，如加三乙胺，或采用碱至钝化柱
3。键合相流失：同前（二）3
4。流动相组成变化：同前（二）4
5。温度降低：同前（二）5

（四）出现肩峰或分叉
1。样品体积过大：用流动相配样，总的样品体积小于{dy}峰的15%
2。样品溶剂过强：采用较弱的样品溶剂
3。柱塌陷或形成短路通道：更换色谱柱，采用较弱腐蚀性条件
4。柱内烧结不锈钢失效：更换烧结不锈钢，加在线过滤器，过滤样品
5。进样器损坏：更换进样器转子

（五）鬼峰
1。进样阀残余峰：每次用后用强溶剂清洗阀，改进阀和样品的清洗
2。样品中未知物：处理样品
3。柱未平衡：重新平衡柱，用流动相作样品溶剂（尤其是离子对色谱）
4。三氟乙酸（TFA）氧化（肽谱）：每天新配，用抗氧化剂
5。水污染（反相）：通过变化平衡时间检查水质量，用HPLC级的水

（六）基线噪声
1。气泡（尖锐峰）：流动相脱气，加柱后背压
2。污染（随机噪声）：清洗柱，净化样品，用HPLC级试剂
3。检测器灯连续噪声：更换氘灯
4。电干扰（偶然噪声）：采用稳压电源，检查干扰的来源（如水浴等）
5。检测器中有气泡：流动相脱气，加柱后背压

（七）峰拖尾
1。柱超载：降低样品量，增加柱直径采用较高容量的固定相
2。峰干扰：清洁样品，调整流动相
3。硅羟基作用：加三乙胺，用碱致钝化柱增加缓冲液或盐的浓度降低流动相PH值，钝化样品
4。同前（四）4：同前（四）4
5。同前（四）3：同前（四）3
6。死体积或柱外体积过大：连接点降至{zd1}，对所有连接点作合适调整，尽可能采用细内径的连接管
7。柱效下降：用较低腐蚀条件，更换柱，采用保护柱

（八）峰展宽
1。进样体积过大：同（四）1
2。在进样阀中造成峰扩展：进样前后排出气泡以降低扩散
3。数据系统采样速率太慢：设定速率应是每峰大于10点
4。检测器时间常数过大：设定时间常数为感兴趣{dy}峰半宽的10%
5。流动相粘度过高：增加柱温，采用低粘度流动相
6。检测池体积过大：用小体积池，卸下热交换器
7。保留时间过长：等度洗脱时增加溶剂含量也可用梯度洗脱
8。柱外体积过大：将连接管径和连接管长度降至最小
9。样品过载：进小浓度小体积样品

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