李玉武

（榆林学院  生命科学院，陕西 榆林 719000） 

一：实验目的

  1.学习并掌握平菇原种和栽培种的制作和培养方法

  2.学习并掌握平菇原种和栽培种的培养基的制作方法

  3.学习并掌握平菇原种和栽培种的分离接种技术

二：实验仪器和原料

   高压xx锅、菌种瓶（容量750ml或500ml）、小刀、酒精灯、接种针、大镊子、剪子、接种铲、棉花、牛皮纸、高锰酸钾、试管、玻璃棒、纱布等各种xx药品

   马铃薯、琼脂、葡萄糖、蛋白胨、磷酸二氢钾、甲醛、苯酚、硫酸镁、维生素B1、麸皮、棉籽皮、木屑

三：实验原理

   食用菌的菌种，通常分三级。即母钟（也叫试管种或一级种），原种（又叫二级种，是由试管种扩大繁殖而成的），栽培种（又叫生产种或三级种，由二级种的菌丝体扩接繁殖而来，是直接用于生产的瓶种或者袋装菌种）。原种和栽培种培养基的配方，制作方法基本相同。

四：实验方法

1.    母种培养基的配方

　1.母种的培养基配方及制备方法

(1) PDA基本培养基：马铃薯200克、琼脂20克、葡萄糖20克、水1，000毫升、pH值自然。

（2）PDA综合培养基：马铃薯200克、琼脂20克、葡萄糖20克、蛋白胨5克、磷酸二氢钾3克、硫酸镁1.5克,维生素B12―4斤、水1,000毫升，pH自然。

　　这两种培养基制备首先将马铃署去皮，洗净，切成小块，放入锅中加水1,000毫升煮沸20分钟，然后用纱布过滤取其汁液，将其它称好的原料连同研碎的维生素B1放入滤液中，用清水补足1，000毫升，然后加热使其溶化，用玻璃棒将培养基搅均，然后分装试管。

　　（3）棉籽皮综合培养基：棉籽皮200克、麸皮50克、琼脂20克、葡萄糖20克、蛋白胨3克、磷酸二氢钾3克、硫酸镁1.5克、维生素B12－4片，水1，000毫升、pH值自然。

　　（4）木屑、麸皮培养基：木屑（阔叶树）100克，麸皮50克、蛋白胨5克、磷酸二氢钾3克、硫酸镁2克、琼脂20克、葡萄糖20克、水1，000毫升、pH值自然。

　　（5）麸皮培养基：麸皮100克，琼脂20克，葡萄糖20克，蛋白胨3克，磷酸二氢钾3克，硫酸镁2克、水1，000毫升，pH值自然。

　　以上三种培养基的制备方法基本相同，首先将棉子皮，木屑或麸皮放入锅中，加水1，000毫升水，加热煮沸30分钟，然后用四层纱布过滤，取出过滤液，加入其它原料，补足1，000毫升液体，再加热使各材料溶化后即可。

　　将配好的培养基加入搪瓷漏斗中，分装试管，试管要清洗干净，每支试管其入量为试管的1/5。注意装试管时不要将培养基粘到试管口处，如出现此问题一定要用干布擦干净，防止污染杂菌。一般1，000毫升培养基分装18×180mm试管70支左右。分装好的试管用棉花做棉塞，塞入试管口，棉塞长度4公分，塞进试管内2/3，松紧要适宜，太松容易使杂菌进入试管，太紧接种操作不方便。

　　2.xx：将做好的试管，5、7或10支为一把加牛皮纸捆成一把,放进加好水的手提式高压锅内，然后盖好锅盖，，对角拧紧螺丝，开始加热，当压力表压力达0.5kg/cm2时，排冷空气，必须将冷空气排净，然后继续上升，压力达1.3－1.4kg/cm2保持30分钟，停止加热，高压锅内压力为零时，打开排气阀，打开锅盖，将灭好菌的试管，放在桌子上摆成斜面。使培养基前端在试管1/3处,培养基凝固后，用于接种。接种工作在无菌箱中进行，将无菌的试管和购买的母种、接种工具、酒精灯、酒精棉球放入接种箱中，用甲醛和高锰酸钾混合xx30分钟，然后再接种。

3.接种操作：先用酒精棉球擦示接种工具，点燃酒精灯烧接种工具，然后左手将试管和母种拿起，右手将两试管棉塞拔下，用接种钩从母种试管内取一小块带菌丝的培养基放入另一试管中,然后将棉塞塞好，进入下一个试管转接，操作要求一样。接好的试管放在25℃培养室或培养箱内培养，10天左右就可长好，用于原种生产

2.原种（二级种）培养基的配方

         1.培养料的配方及制备

　　①棉子皮78％、麸皮18％、糖1％、石膏1％、石灰2％，料水比为：1:1.2－1.4。

　　配制：将称好的棉籽皮和麸皮充分混合均匀，将糖、石灰、石膏、溶于水中，用此水来拌培养料，使其含水量达60－65％，用手取一把拌好的培养料用力握，手指间有水滴出现，但不滴下就可，这时料含水量达60％，料堆30分钟后准备装瓶。

　　②木屑78％、麸皮20％、糖1％、石灰1％、料水比1:1.2。

　　配制：将木屑和麸皮充分混匀。将糖和石灰放入盆中用水将其溶解，用此水拌料，使拌好的培养料含水量达55－60％，注意木屑一定要用阔叶树木屑。料堆至30分钟备用。

　　上述两种原料堆制30分钟后，开始装500lm（罐头瓶要清洗干净）。用手指将料尽量向下压实，料要装到瓶肩部，以便接种后观察，要用干净布将罐头瓶口内外擦干净，以保证生产的原种质量，然后用一层牛皮纸一层丙烯膜封口。装好的罐头瓶放入高压锅内进行消毒灭菌，方法同母种，但xx压力为1.4kg/cm2并保持2个小时。

　　2.接种及培养

xx后的罐头瓶，待冷却后，装入接种箱内进行xx，方法同上。然后两手进入接种箱内，用酒精棉球擦两手和接种钩，点燃酒精灯，将接种钩在火焰上烧，进行xx，等接种钩冷却后，打开母种棉塞，试管口在酒精灯火焰上方10厘米，用接种钩取1/5菌种，迅速接入打开口的原种瓶内，然后盖好瓶口，捆好封口膜，进入下一个原种瓶转接。一般一支母种接4－5瓶原种。接好菌的原种放在25℃左右的培养室内培养。培养室在使用前要经过甲醛、高锰酸钾混合后xx，以防止杂菌污染。正在培养的菌种要经常检查，感染杂菌的瓶子，要及时xx，在适宜的温度下，原种20－25天长满瓶。

3.栽培种的配方：

　　①棉籽皮88％、麸皮10％、糖1％、石灰1－2％、料水比为1:1.2－1.3，pH自然。

　　②木屑78％、麸皮20％、糖1％、石灰1－2％、料水比为1:1.2，pH自然。

　　③棉籽皮47％、玉米芯40％、糖1％、石灰1－2％、麸皮10％、料水比为1:1.2，pH自然

　　④棉籽皮47％、木屑40％、糖1％、麸皮10％、石灰1－2％，料水比为1:1.2，pH自然

　　在上述配方中，玉米芯需要粉碎成玉米粒大小，拌料测水分，测pH值,同原种配料一样。

　　栽培种培养料拌好后，就可以装袋了，栽培种菌袋，一般选择17×33厘米，厚度4－5丝米，聚丙烯耐高温的菌袋，菌袋两端开口。装袋前一端先用绳子捆死，料从开口处装入，装入的料要压实，料中间用木棒打一孔，然后用绳捆好，栽培种装好后，装入高压锅或常压灶内xx，菌袋装锅要袋之间有空隙，每层架子放二层菌袋，这样有利于蒸气接触到菌袋，有利于蒸气畅通。高压xx1.3－1.4kg/cm2保持2小时。

　　常压xx，当常压灶内温度达100℃后，保持8－12小时，然后菌袋在锅内焖24小时，打开锅，将菌袋取出放入消过毒的接种室内冷却，当菌袋温度降至室温后，才可以接种，接种方法同原种操作方法一样，1瓶原种可转接两头开口菌袋20袋。接种后的菌袋，需放入培养室进行培养，培养温度在24－25℃{zh0}，经常通风，保持培养室内空气新鲜，培养室内湿度不能能超过65％，避光培养。一般在适宜温度条件下30－35天可长满菌袋。