本文主要研究日本产灵芝对小鼠脾细胞产生IL-2的影响。结果表明在试管内氢化考的松（HC）和环胞霉素（CsA）可抑制脾细胞产生IL-2，灵芝10～100μg/ml可对抗其抑制作用，使IL-2产生增加。整体研究表明灵芝300mg/kg?po.促进脾细胞产生IL-2，即使在有氢化考的松或环胞霉素A存在条件下，灵芝的作用依然明显。?
关键词??灵芝；白介素-2（IL-2）?
白介素-2（IL-2）是最重要的淋巴因子之一，具有多种生物学功能，不仅可以在试管内使T细胞持续生存，而且在免疫调节网络中也占重要地位。IL-2主要由T辅助细胞产生，所以IL-2的水平亦间接地反映了T细胞的功能[1]。已知灵芝可以作用于免疫系统影响多种免疫功能，本文旨在研究灵芝对脾细胞产生IL-2的作用，进而分析其对免疫系统的影响。?
????材料与方法?
????动物?
C57BL/6小鼠，8～12周龄；昆明种小鼠，16～20g。均由上海医科大学实验动物部供应。?
????试剂?
????灵芝热水提取物由日本和汉生药研究所提供，按前述方法制备。?
????RPMI-1640培养基为GIBCO产品，含青霉素100μ/ml,链霉素100μg/ml,Hepes?15mmol及10%小牛血清（NCS）。刀豆蛋白（Con?A）,Sigma产品。2-甲基-D-甘露糖苷（2-MM），上海试剂二厂产品。环胞霉素为瑞士三道士药厂产品。静脉注射用制剂每毫升含Cyclosporin?A?50mg,?Polyoxyethylated?Castcr?Oil?650mg及33%乙醇。?
????3H-胸腺嘧啶核苷（3H-TdR），中国科学院原子核研究所生产，比活性为1110GBq/mmol。?
在试管内诱导IL-2产生?
????小鼠脾细胞，调节细胞浓度为５×106/ml，加入24孔培养板，与不同浓度灵芝及3μg/ml的Con?A混合，37℃?5%?CO2中培养24h，取上清，离心，贮于-30℃，待测。?
????灵芝预处理脾细胞的作用?
????为xx在测定IL-2活性的培养上清中所含xx的影响，部分实验作以下设计：脾细胞与灵芝或其他xx共同培养10h，离心，弃上清液，细胞洗2次，重新加入Con?A?3μg/ml，培养24h，收集各组上清液，离心，贮于-30℃，待测。?
????灵芝在整体对IL-2产生的影响?
????小鼠随机分组。对照组口服0.2%CMCqd.×6。灵芝组分别口服灵芝150及300mg/kg,qd.×6,部分组灵芝合并应用氢化考的松（HCip.qd.×6）或环磷酰胺（CYA）ip.qd.×3(d4～d6)。第7天小鼠处死取脾脏，调节脾细胞数如前，加ConA?3μg/ml,培养24h。取上清，贮于-30℃，待测。?
????IL-1活力测定?
????利用活化的脾细胞测定IL-2[2]。C57BL/b小鼠颈椎脱位处死，取脾，脾细胞经溶红细胞后洗3次，调节细胞浓度至2×106/ml，加入Con?A?3μg/ml,37℃?5%?CO2中培养48h，收集此活化的脾细胞，以含20mg/2ml?α-mm的RPML-1640洗2次以xx残存Con?A。台盼蓝染色计数，调节细胞浓度至2×106/ml。将细胞滤液加入96孔板，每孔100μl。同时放入经对倍稀释的待测上清100μl，37℃?5%?CO2中培养24h。培养结束前6h每孔加入3H-TdR?9.25kBq。以多头细胞收集仪将细胞收集至醋酸纤维薄膜。测定结合的3H-TdR量。?
????结????果?
????氢化考的松的抑制作用?
????氢化考的松可以在试管内抑制脾细胞产生IL-2，经用不同稀释度的上清测定，证明在适当稀释度可以显示其抑制效应。
????灵芝在试管内对氢化考的松抑制作用的影响?
????表7-1，7-2表明HC?0.025～1μg/ml在试管内明显抑制脾细胞产生IL-2。灵芝可以对抗HC的抑制作用而恢复IL-2的产生。但灵芝本身在试管内对脾细胞产生IL-2并无明显影响。?
????表7-1??灵芝合并应用氢化考的松在试管内对小鼠脾细胞产生IL-2的影响?

??????????灵芝??????????????????Con?A??????????????HC?????????????cpm/1×106细胞