1.涉及RNA的一切操作必须戴手套并频繁更换。 2.进口原装离心管和原装移液器头可以直接用于RNA抽提,并不需要进行处理。实验涉及的其他物品,包括移液器杆,电泳槽等,均需做必要的处理。移液器金属退头器是RNA酶的一个重要来源,实验前{zh0}取下它。 3.RNA浓度越高,沉淀越快越xx。RAN浓度低于10μg/ml要加载体核酸才能有效沉淀。 4.RNA的组成: Poly(A)RNA: 2-3% total RNA rRNA: 80-85% total RNA tRNA: 15-20% total RNA 5.A260是测定RNA量的指标: 1 OD(260nm)总RNA=40μg/ml(测定溶液:水) 1 OD(260nm)单链RNA=35μg/ml (测定溶液:水) 6.A260/A280是衡量蛋白质污染程度的指标,2.0是高质量RNA的标志,但受二级结构等的影响,读数可能会有一些变化,高质量的RNA, A260/A280读数(10mMTris,PH7.5)在1.8-2.1之间,有时甚至>2.1。有资料指出:同一个RNA样品,假定在10mM Tris,PH7.5溶液中测出的A260/A280读数1.8-2.1之间,在水溶液中所测读数则可能在1.5-1.9之间,原因是因为A260/A280读数受测定所用溶液的PH值影响。故测定RNA的浓度(量),应该使用水作为溶液及空白对照来测定A260读数;此外,RNA中残留的酚及乙醇等也会影响A260/A280的比值。 7.A260读数要在0.15-0.5之间线性{zh0}。 8.完整性:电泳后应能看到两条非常明显的条带(真核:28S+18S,原核及xx:23S+16S),其中28S(或者23S)RNA应为18S(或者16S)RNA量的1-2倍,否则表示RNA样品的降解。出现弥散片状或条带消失表明样品严重降解。
|