试验单位：安徽省农业科学院蚕桑研究所

二○○七年十一月

一、 概况

       减少家蚕疾病的发生是确保蚕桑生产安全高产的重要条件之一，目前主要依靠xx的方法来实现这一目的。在我国的蚕桑生产中，常用的消毒剂为四类：一是以漂白芬为代表的氯制剂类，二是以福尔马林为代表的甲醛制剂类，三是表面活性剂类，四是以盐酸、石灰为代表的酸碱类。国内在蚕药研制方面，相继研制出用于蚕体、蚕座xx的聚甲醛散、防病1号、防病2号、蚕座净等；用于蚕室蚕具xx的漂白芬、甲醛溶液、各种氯、醛制剂等。其特点为：以化学药剂为主，不注重生态环保型，对环境污染严重，使用不便。未来蚕用消毒剂的发展趋势是必须具备使用简易安全、xx广谱、无腐蚀性、高效低毒、生态环保型等优点。因此，开展新的蚕用消毒剂的开发对我国蚕业的可持续发展具有相当的创新价值。

稳定二氧化氯是一种多功能工业与民用化工产品，1985年由美国百合兴公司首先研制成功，经美国农业部（EPU）和美国环保局（EPA）确认为食品消毒剂，美国食品与xx管理局（FDA）批准为食品添加剂。日本、澳大利亚及西欧各国相继立法，将其确定为替代氯系消毒剂的第四代安全消毒剂和食品添加剂。它不仅是一种广谱、高效、xx的消毒剂。而且还是优良的水处理剂、食品保鲜、漂白剂、防腐剂和除臭剂。于是迅速在水处理行业、食品行业、医疗保健行业、造纸行业、畜牧养殖行业、日化行业得到广泛的应用，但是在蚕桑生产上的应用还不多见。

二、 试验报告

（一） 试验目的

       研究二氧化氯消毒剂在蚕桑业上的应用，包括该药剂对家蚕病原微生物的xx效果、对家蚕的生理影响以及对桑叶的影响等。

（二） 试验药剂

       二氧化氯消毒剂

（三） 试验内容

       本试验共分四部分的内容，分别为:二氧化氯消毒剂对家蚕病原微生物xx作用试验；二氧化氯对家蚕饲养的影响试验；二氧化氯叶面xx对桑叶的药害试验；二氧化氯添食对预防家蚕病毒病的试验。

1.二氧化氯消毒剂对家蚕病原微生物xx作用

1.1 供试病原菌

       xx和xx：白僵菌、绿僵菌、曲霉菌、黑胸败血菌、Bt 取新鲜菌用无菌水加少量吐温－80分别配成浓度为2×107、2×107、1×107、4×108、5×108个分生孢子或菌/mL的菌悬液。

       病毒：核型多角体（NPV）和质型多角体（CPV）稀释成2.5×107、2×107个多角体/ml的悬液。

       家蚕微粒子（N.b）：将新继代的N.b配成1.5×108个/mL的悬液。

1.2 试验方法

1.2.1 对病原xx、xx的杀灭效果

       将二氧化氯液作用于白僵菌、绿僵菌、曲霉菌、黑胸败血菌及Bt的菌悬液30min后，取0.1mL均匀涂抹于培养基上，每个处理重复3次，26℃条件下培养24d，观察菌落生长情况。每处理设3个重复。

1.2.2 对病毒的杀灭效果

       将配好浓度的NPV和CPV均匀涂于2cm×4cm载玻片上，每片0.1mL，阴干后用不同浓度的消毒剂浸渍xx30min，xx结束后，将玻片用清水轻轻漂洗2次，除去药液，然后每玻片加0.1mL无菌水，用玻棒刮下载玻片上的病毒给蚕添食。设毒对照和空白对照，空白对照区用无菌水代替消毒剂同等处理。每处理设3个重复，每个重复20头蚕。

1.2.3 对微粒子的杀灭效果

       取0.1mLN.b加不同浓度的消毒剂0.9ml处理10min后，3000r/min离心，弃清液，加蒸馏水再离心一次，最终取N.b沉淀加蒸馏水0.1mL，摇匀后涂抹再一定面积的桑叶上，让二龄蚕全部食下，设毒对照和空白对照，空白对照区以无菌水代替消毒剂进行同样处理。每处理设3个重复，每个重复20头蚕。

1.3 xx效果的判断

       xx和xx经xx处理后，接种培养基，以菌落生长情况作为判断标准。微粒子和多角体病毒经过xx处理后，均匀涂抹在桑叶上，供一定数量的蚕食下，饲养一段时间后，调查发病率，并以发病率计算xx效果，以xx效果作为判断依据。

1.3 结果与分析

1.3.1 对xx、xx的杀灭效果

       从表1可以看出，二氧化氯对白僵、绿僵、曲霉、黑胸败血菌以及Bt作用30min后，随着二氧化氯含量的升高xx效果在提高，在二氧化氯含量为100mg/L时，除曲霉菌外，几种病原菌均没有生长。由此实验结果可知，“益康”二氧化氯对家蚕病原xx和xx有很好的杀灭效果。

    表1 对病原xx、xx的杀灭效果

注：“-”表示无菌生长；“+”表示菌极少量生长；“++”表示菌少量生长；“+++”表示菌大量生长。

1.3.2 对多角体病毒及微粒子的杀灭效果

表2 对多角体病毒及微粒子的杀灭效果

       从表2可以看出，二氧化氯对家蚕多角体病毒和微粒子作用30min后，xx效果随二氧化氯含量的升高而提高，对微粒子的杀灭作用最强，在50mg/L时，xx效果就达到100％，在二氧化氯含量为75mg/L时，对家蚕核型多角体病毒的杀灭效果达到100％。对家蚕质型多角体病毒要达到100％杀灭效果，需二氧化氯含量100mg/L。

2 二氧化氯对家蚕饲养的影响

2.1 供试蚕品种

菁松、皓月

2.2 试验方法

       取1龄起蚕，按含二氧化氯有效含量为25mg/L，50 mg/L，75 mg/L，100 mg/L，125 mg/L5个梯度分别对桑叶喷洒喂食处理，共5个处理，每处理3组重复，每组100头蚕。饲育至上簇采茧。以喷清水饲养家蚕为对照。处理技术标准一致。调查眠蚕体重、龄期经过、熟蚕体重及茧质。对75mg/L的浓度处理区制种，制种时分别以菁松和皓月对交制普通杂交种。制种结束后，每区随机抽取200粒茧进行单蛾制种，调查制种成绩。蚕种经浸酸处理打破滞育后，调查孵化率。

2.3 结果与分析

2.3.1 蚕期结果

表1  二氧化氯喷洒桑叶添食对菁松的生长发育、茧质的影响（2007.10 合肥）

       从表1数据可以看出，二氧化氯喷洒桑叶添食对家蚕的生长发育及茧质均无不良影响。说明二氧化氯消毒剂是一种对家蚕安全的药剂。

2.3.2 制种结果

       由表3可知，2个原种正反交的杂种1代，其各项指标均为试验区的略优于对照区。平均化蛾率、产卵数、良卵率和实用孵化率等试验区的与对照区均无显著差异。试验结果表明使用二氧化氯xx对蚕种种质无不良的影响。

表3 对蚕种种质的影响

3 二氧化氯叶面xx对桑叶的药害试验

3.1 试验方法

3.1.1 桑园喷洒试验　

       在安徽农业科学院蚕桑研究所桑园进行。喷药时间10月8～15日进行，试验在无风的傍晚和中午12: 00实施。中午桑园平均温度为35℃，傍晚平均温度为28 ℃。喷药后定时观察桑树枝条和叶片变化情况。

       试验药液浓度：配制二氧化氯浓度为50、75、100、150、200、400、600、800、1 000 mg/L，以清水作对照。

设区：在桑园内选择长势良好、树型、枝条数和叶片相对一致的植株用作试验，每个浓度作为1个处理，每处理设2个重复，以清水对照。

       药剂喷洒方法：将配制好的二氧化氯溶液注入喷壶内，对桑叶底、面进行均匀、充分的喷洒。

3.1.2　桑叶离体浸渍试验　

       样品采集:上午9: 00前在桑园选取长势旺盛、生长一致的植株，采摘浅绿色桑叶即顶芽下的第4～5片叶，装入保鲜袋备用。

       药剂：配制方法同“1. 2. 1”，以原液进行0、25、50、100 mg/L的梯度稀释。

       处理方法：把配制好的二氧化氯溶液置于烧杯中，分别放入待测桑叶，使其xx浸湿2min，取出沥去多余药液，置于瓷盘中定时观察叶片变化情况。试验时室内温度为25℃。

3.1.3　二氧化氯对桑叶营养成分的影响试验

       选取长势、叶片一致的多分枝桑树2株作为2个重复，分别在同一植株上选取长势相近的6根枝条，将6根枝条随机分作3个处理，分别用50、100 mg/L二氧化氯药液和清水按要求小心均匀喷洒。待药液干后，采摘相同叶位(从顶芽往下第4～7片叶)的叶片作检测，测定桑叶的蛋白质、糖、脂肪等含量。

3.2 结果与分析

3.2.1 桑园喷洒不同浓度药液后对桑叶的药害观察

       多数常用的消毒剂在一定浓度下对桑叶会产生药害作用，其程度取决于药液的浓度。本试验结果显示，二氧化氯溶液在0～150mg/L范围内对桑叶表征无明显影响，叶片未出现卷缩、变黄或叶肉变薄、硬化等现象，并且药液喷到叶面后，并不会立即风干或挥发。

       经过24h后观察，喷过药液的桑叶表征与清水对照区亦无明显差异。中午12: 00与傍晚进行的试验结果基本一致。表明50～150mg/L二氧化氯溶液在不同时间用作桑园叶面xx，对桑叶无明显药害影响。进一步提高药液浓度进行测试的结果如表1所示：用200 mg/L以下质量浓度的二氧化氯溶液喷布桑树,不会对桑叶产生不良影响；400mg/L二氧化氯溶液对桑叶有轻度药害，但可以恢复；而800、1 000mg/L以上药液对桑叶的药害显著，且是不可复性的，其表现主要为叶片被氧化而褪绿。

表1　二氧化氯溶液处理对桑叶的影响

“ - ”示叶片正常,无异常表征;“ + ”示枝条顶端嫩叶出现萎缩,叶面从边缘向中间卷褶;“ + + ”示卷曲比“ + ”严重,叶缘变褐色;“ + + + ”示全部嫩叶褪绿变褐色。

3.2.2　桑叶浸渍药液后的药害观察

       用浸渍法xx桑叶的结果表明，用100 mg/L二氧化氯溶液浸泡离体桑叶，桑叶没有类似所出现的失水、发蔫、发黑等外观异常。但同桑园喷洒药液比较，有一定程度的失水，对照也有一定程度的失水，可能与桑叶离体后在室温下放置的自然失水有关。

3.2.3　不同浓度药液对桑叶营养成分的影响

       水分、碳水化合物、蛋白质和脂肪是桑叶的主要营养成分。根据测定结果，对各营养成分含量的分析，本试验表明50、100mg/L二氧化氯溶液没有产生负面影响。

表2　不同处理桑叶的营养成分含量

4 二氧化氯添食对预防家蚕病毒病的试验报告

4.1 供试蚕品种

       菁松×皓月

4.2 试验方法

       1~2龄为常规育，三龄饷食后第2次给叶前分蚕，分两个添食处理组，一个对照组，每个处理内分三个重复小区，每区300头蚕。

       xx添食方法：三、四、五龄饷食后第二次给叶时开始添食。对照区全龄不添食。

       药品的配制方法：二氧化氯配制成50、75、100mg/L的浓度，喷于桑叶上添食。

4.3 结果与分析

       家蚕在添食处理后，蚕期死蚕数、上蔟死蚕数、死笼率均明显低于对照区。

表1生命力调查

三、 试验结果

       通过对二氧化氯的各项试验结果，可以得出：

1）经过100mg/L浓度的“益康”二氧化氯xx30min后对家蚕常见病原菌（曲霉菌除外）的杀灭作用可以达到100％的效果，尤其对微粒子的杀灭效果最为突出，在50mg/L就可以达到100％的杀灭效果。

2）用低浓度的“益康”二氧化氯对家蚕体喷和对桑叶叶面进行xx然后添食家蚕, 对家蚕生理发育无不良影响。

3）当药剂质量浓度在200mg/L以下时，对桑叶叶质没有不良影响；以100mg/L以下质量浓度药液对桑叶作浸渍xx时未发现叶片外观出现异常。表明100mg/L以下浓度的“益康”二氧化氯用作桑树叶面消毒剂，对桑叶叶质没有不良影响，可以用于桑园和桑叶xx。

4）二氧化氯添食处理后，明显降低了家蚕病毒病的发生，对家蚕病毒病的预防具有一定的作用。

       因此，二氧化氯对家蚕主要病原菌有强杀灭作用，但对家蚕安全、xx，同时，该药剂对桑叶也无不良影响，可以用于叶面、养蚕环境以及蚕体、蚕座xx，生产上应用浓度为100mg/L，杀灭时间30min，xx符合生产要求。二氧化氯药剂具有无刺激、广谱、高效、xx、安全等优点，是一种理想的养蚕消毒剂。