一、           试剂盒的保存

1.        保存条件：

1.1      试剂盒应放置于2～8℃冰箱中存放。

1.2      试剂盒在取用过程中禁止颠倒，以避免试剂被污染。

1.3      有特殊要求的试剂应严格按照操作说明书要求的保存条件保存。

2.        保存时间：

2.1   未开封试剂盒于2～8℃保存时，可在有效期之内正常使用。

2.2   已开封试剂盒每次使用后需及时放回2～8℃冰箱内保存，应尽可能在开封后1个月内使用。（按说明指示的开封的半成品有效期计算，尽量在半成品最短的有效期内用完）

一、           标本的处理和保存

1.        标本采集

1.1.    要注意避免出现严重溶血。血红蛋白中含有血红素基团，其有类似过氧化物的活性，因此，在以HRP为标记酶的酶促化学发光测定中，如血清标本中血红蛋白浓度较高，则其就很容易在温育过程中吸附于固相，从而使后面加入的HRP底物反应值偏高。

1.2.    样本的采集及血清分离中要注意尽量避免xx污染，一则xx的生长，其所分泌的一些酶可能会对抗原抗体等蛋白产生分解作用；二则一些xx的内源性酶如大肠杆菌的β-半乳糖苷酶本身会对用相应酶作标记的测定方法产生非特异性干扰。

1.3.    常规项目对标本采集的要求：晨起空腹、安静状态下、或者休息半小时后采集。

1.4.    如无特殊说明，源德公司试剂盒适用的标本类型均为血清；故采血时应选用非抗凝采血管。采血后应尽早离心，将血清分离后单独保存。

1.5.    建议采用真空采血管及蝶形针具，以免直接接触血液。采集容器{zh0}为一次性无菌密闭容器。采血后将真空采血管颠倒、轻轻混匀3～4次，不宜过猛，以避免溶血。

1.6.    标本采集时间及患者准备根据检测项目不同对标本的采集要求也不相同，具体内容参见试剂盒说明书。

1.6.1    xx：可的松峰值在早晨4～6点之间；生长xx、促黄体xx（ LH ） 和促卵泡xx（ FSH ） 均以阵发性方式释放，须在密切相连的时间间隔内采取数份血样本，以其中间值为测定值。又如当从卧位变为站立位时，血清中肾素活性将出现明显增高。

1.6.2    再如xxxx的检测，应根据药代动力学选择服药后的最适时间xx检测。

1.6.3    用于传染性病原体的抗原和抗体、肿瘤标志物和特种蛋白等的检测的血清标本的收集则没有时间和体位方面的影响。

1.7.    可能影响测定结果的标本因素

1.7.1    内源性干扰因素：类风湿因子、补体、异嗜性抗体、xx性抗体、自身抗体、溶菌酶、磷脂、xx小分子、总蛋白浓度等。

1.7.2    外源性干扰因素：溶血、xx污染、标本贮存时间过长、凝固不全、反复冻融。

2.        标本保存

2.1 新鲜标本的检测结果更能准确反映机体的真实情况，建议用户在采血后24小时内完成检测。

2.2 如24小时内不能进行检测，需将血清分离后于-20℃保存，同时避免反复冻融。

2.3 特殊项目的要求：部分小分子xx由于受与结合蛋白的结合状态等影响，需采取特殊保存方式，具体要去参加说明书。（例如：INS释放性试验，空腹血样保存）（E2,应检测冻存血样）

二、           试剂准备

1、实验前，先将实验中所需的所有试剂及待测样品从冰箱中取出，待温度与室温（25℃）平衡1小时以上后使用。加样前应将所用试剂和待测样本分别充分混匀。

2、酶结合物和抗体混匀时，切忌产生大量气泡。

3、实验中用于冻干品复溶和稀释浓缩洗涤液所用的蒸馏水或去离子水应保证质量。

4、冻干品加入蒸馏水或去离子水后，应盖上胶塞后静置，待固体物质xx溶解后，再将试剂瓶反扣在实验台上，让附着在瓶盖上的固体物质溶解，然后充分混匀后待用。

三、           加样器的使用及维护

1、加样器的规格：用户需配备以下三种规格加样器20μl、50μl、100μl各一支。

2、加样器的质量：

2.1加样器的质量将对实验结果的造成严重影响。

2.2由于可调量程加样器使用一段时间后，会造成吸液量不准，影响实验结果，故建议用户选择固定量程的加样器。

3、加样器的使用

见《加样器的使用规范及维护》

4、手工加样注意事项

4.1为保证加样的准确性，请经常校正加样器。

4.2加试剂时，先吸打1～2次后再取样。吸液速度宜慢，以保证正确的加样量。吸液后，将加样枪尖接触容器壁，去掉可能形成的液体滴后再加入孔中。

4.3加样时，严禁带有气泡。加样头中若已经产生气泡，应先将气泡打净后，再行加样。

4.4加样本时，样本应加入液面以下，防止样本吸附在孔壁上不能与试剂反应。而在加底物时，加样器（加样枪）的枪尖应避免接触酶标板、校准品和样品，以防止引起污染或交叉污染（假阳性）。

4.5当使用单通道加样器手工加样时，使用一次性洁净枪头，每次加完一种试剂应该更换加样枪头，加待测样本的加样头必需每加完一个样本更换一次加样头。

5、加样头的质量

5.1 应尽量选用加样器厂家指定加样头。

5.2 应注意观察，加样头套在加样器上，应与加样器壁xx吸附，避免漏气。

5.3 加样头{zh0}一次性使用。加过血清标本的加样头严禁重复使用。

5.4 加样头的清洗：需重复使用的加样头，应先用自来水冲洗干净，甩干。然后放入0.2%的NaOH溶液中浸泡2小时以上，取出用自来水冲洗5遍，再用蒸馏水或去离子水冲洗20遍，取出，用洁净的纱布包裹用力甩掉残留水分，放入烘箱60℃以下烘干或置于干燥洁净处自然风干，以备下次使用。

四、           孵育

1、水浴

1.1水浴箱温度应严格控制在37±1℃范围内。

1.2水浴时，微孔板应置于水浴（浮于水面）或湿盒中，避免水浴时板下有气泡，以使反应溶液的温度迅速与水育箱的水温平衡。

1.3  “边缘效应”的排除: 使用水浴或在将反应溶液加入至板孔中时，将板和溶液均加热至温育温度（如 37℃ ），就可以很容易地排除“边缘效应”，并且可提高测定的重复性。

2、室温振荡

2.1实验室室温应控制在25℃（实验室应加装空调机以确保室内温度在不同季节保持相对稳定）。

2.2 振荡器振荡频率，各实验室应相对固定振荡器的振荡频率，以保持实验条件的相对稳定。

1、每次温育后洗板是否彻底，与非特异背景发光有很大关系。

2、洗板液为源德化学发光试剂专用洗涤液，必须用新配置的双蒸水稀释。

3、洗涤作用机理，借助其疏水基团与固相上蛋白的疏水基团形成疏水键，从而削弱蛋白与固相的吸附，同时在其亲水基团与液相中水分子的结合作用下，促使蛋白质脱离固相而进入液相。

4、手工洗板：每次反应孵育后，将反应液吸出或甩干，在无荧光吸水纸上拍干，然后轻挤洗液瓶，在板孔中加满洗涤液（切记：不要使劲捏挤洗液瓶，避免使洗涤液冲进微孔，产生很多气泡，在加下次洗涤液前，一定要将有气泡的微孔拍净或吹掉汽泡），放置20～30秒后，将洗液吸出或甩干，再在无荧光吸水纸上拍干。重复上述洗涤步骤5次，{zh1}在无荧光吸水纸上拍干，即可进行下一步测定操作。

5、洗板机洗板：

5.1使用洗板机洗板的一个特点是，每次洗板后不能拍干，故有较多的液体残留，液体残留量小的洗板机洗板至彻底所需的次数要少于残留量大的洗板机。

5.2每次反应孵育后，将反应液吸出或甩干，在无荧光吸水纸上拍干，然后将微孔板放在洗板孔中洗板，洗涤5次，液量为280μl，每次洗涤时间30 秒，{zh1}在无荧光吸水纸上拍干，即可进行下一步测定操作。

5.3 应留意洗板机吸液针的高度，严禁吸液针戳底。

七、加发光液，检测发光值

7.1 洗板后，建议将等量的发光液A、B液混匀后，每孔加100μl混合后的发光液。

7.2 从理论上说，室温10分钟才可以使 HRP 的底物催化反应xx，尽管在最初的5～10分钟内，绝大部份催化反应即可完成。因此，建议在室温下反应5分钟后检测。

7.3 检测前，应严格按照加样的空位设置，在电脑程序中设置空位信息。软件的操作步骤详见北京源德源德医学生物工程有限公司《MPC-1型发光免疫分析系统操作手册》。

八、结果判断

1、按照试剂盒确定的正常参考值或Cut-off 值判断结果。

2、发光测定的“灰区”（可以结果的含义）

九、结果报告及解释

临床测定结果的报告较为简单。定性测定报阴性或阳性即可；定量测定则报出具体的数值。结果解释比较起来要复杂的多，它要求实验室技术人员对所测定的项目有较为全面的知识基础。例如，对乙肝“两对半”结果的解释，不但要求检验者要知道不同的结果模式的临床意义，而且必须对乙肝病毒的分子生物学、分子的变异及其对表型的影响有更深层次的了解。现在，检验不再是单纯的实验室测定，而已成为一门临床医学学科，即检验医学，这就要求从事医学检验工作的检验医师，对所做的测定项目除了知其然，还要知其所以然，否则就难免为时代所淘汰。

十、酶促化学发光测定的主要问题

1、 酶促化学发光一步法的“ HOOK EFFECT” 问题

2、 酶促化学发光测定出现假阳性的原因

2.1操作及仪器因素：加样、洗板、自动化加样系统的标本间“交叉污染”；

2.2标本因素： RF、补体、异嗜性抗体、动物抗原、动物抗体、高浓度Ig、溶血、xx污染、标本贮存时间过长、标本凝固不全。

3、酶促化学发光测定出现假阳性的原因

3.1操作、试剂及仪器因素：标本未加、试剂过期或变质、仪器针孔堵塞、标本“交叉污染”；

3.2标本因素：补体、自身抗体、反复冻融

4、 综上所述，尽管源德化学发光免疫分析的操作步骤非常简单，但有可能会影响测定结果的因素却较多，分布在测定操作的各步之中，尤以加样、温育和洗板为甚。为帮助大家分析查找测定中出现问题的可能原因，特对常见问题及原因归纳总结于下表

临床化学发光免疫分析中可能会出现的问题及可能的原因（非试剂盒本身的原因）：

4.1弱阳性质控样本检测不出 温育的时间或温度不够；发光反应时间太短；所用配制缓冲液的蒸馏水有问题。

4.2测定的重复性差 （相同样本两次测定结果不一致） 这是典型的由测定操作引起的问题，包括

4.2.1加样本及试剂量不准；孔间不一致；

4.2.2加样过快，孔间发生污染；

4.2.3加错样本；

4.2.4加样本及试剂时，加在孔壁上部非包被区；

4.2.5不同批号试剂盒中组分混用；

4.2.6温育时间、洗板、发光时间不一致；

4.2.7孔内污染杂物；

4.2.8血清标本未xx凝固即加入，反应孔内出现纤维蛋白凝固或残留血细胞，易出现假阳性反应等。

4.3白板

4.3.1漏加酶结合物；

4.3.2洗板液配制中出现问题，如量筒不干净，含酶抑制物（如迭氮钠）等；

4.3.3漏加发光液A或B。

4.4全部板孔均有偏高

4.4.1洗板不干净；

4.4.2发光液变质；

4.4.3加底物的吸头受酶污染；

4.4.4洗板液受酶等污染；

十一、临床免疫检验的室内质控问题

1、临床免疫检验室内质控不太受重视的原因有三: 一方面可能是质控品来源有限或价格因素；其次是尚没有意识到；再有就是不知从何做起。

2、使用统一合格的校准品开展室内质控才是解决各实验室结果可比性差同时也是保证检验质量的{wy}有效的途径 。

3、室内质控的内涵并不仅仅是使用质控物进行统计学质控，它包括分析前、分析中和分析后的质量控制三个方面。

4、免疫检验室内质控既有与临床生化室内质控共性的一面，也有其特性的地方。