PCR生物实验室、 标准的PCR实验室、

PCR实验室可以是分散形式，也可以是组合形式。完成一组PCR实验，通常应经过试剂配制、样品处理、核酸扩增及产物分析四个实验过程，若实验工艺需要，还应增加样品粉碎过程。

PCR生物实验室、1、      主体结构：

主体为彩钢板、铝合金型材。

PCR生物实验室、2、      标准的三区分隔和气压调节：

将PCR过程分成试剂准备、标本制备和PCR扩增检测三个独立的实验区。整个区域有一个整体缓冲走廊。每个独立实验区设置有缓冲区， 同时各区通过气压调节，使整个PCR实验过程中试剂和标本免受气溶胶的污染并降低扩增产物对人员和环境的污染。可打开缓冲区Ⅰ，缓冲区Ⅱ和 PCR 扩增区的排风扇往外排气，在实验区的外墙上和各扇门上都安装有风量可调的回风口，空气通过回风口向室内换气。

PCR生物实验室、3、 xx：

在三个实验区和三个缓冲区顶部以及传送窗内部安装有紫外灯，供xx用。

在试剂准备区和标本制备区 还设置移动紫外线灯，对实验桌进行局部xx。

PCR生物实验室、4、 机械连锁不锈钢传递窗：

试剂和标本通过机械连锁不锈钢（不建议使用电子连锁方式）传递窗传递，保证试剂和标本在传递过程中不受污染（人物分流）。

PCR生物实验室、5、 地面

地面建议使用PVC卷材地面或自流坪地面，整体性好。便于进行清扫，耐腐蚀。没有条件的也可采用水磨石地面，或大块的瓷砖（至少800mm×800mm）接缝需要小于2mm。

PCR生物实验室、6、 照明

灯具要选用净化灯具，能达到便于清洗、不积尘的特点。

标准的PCR实验室在建设的过程中应注意：

●规范的安装流程和全面的服务流程。

●严格按照规范科学设计的安装流程。

●安装前需要确定以下安装条件，如：电源电压，电源进线位置，电话网络线进线位置，进水水压，最小安装空间，地面平整度，通风孔、进水管和下水管的位置等，理想状态的空间尺寸和通风口尺寸。

1、几个区域的大小设置情况，应该是试剂准备区、产物扩增区、扩增分析区，要小一些。标本制备区应大一些。因为，标本制备室要放置一个生物安全柜为一个低温冰箱。

2、试剂准备区、标本制备区就设立紧急洗眼器，以备不时之需。

3、PCR实验室的洁净度可以根据用户的实际使用情况和资金的投入来设计

PCR 实验室依据所使用的方法可分为试剂准备、标本制备、扩增、产物分析等三或四个区域。只是使用实时荧光PCR仪、HIV病毒载量测定仪的PCR实验室，有上述前面三个区域即可。各区域应xx独立分隔，不应有任何的空气直通。

产物分析区或三个区域的{zh1}一个区域（即扩增及产物分析区），空气流向应由室外向室内，可通过在室内设置通风橱、排风扇或其他排风系统达到空气流由室外向室内流动的要求。

标准的PCR实验室 试剂准备区:

仪器设备主要应有加样器、冰箱、天平、低速离心机、混匀器、可移动紫外灯等。可使用超净工作台作为试剂配制操作台面。

2.3.2

           标准的PCR实验室 标本制备区

仪器设备主要应有生物安全柜（{zh0}为B2, 可避免提取核酸在柜内反复循环，造成标本间交叉“污染”，出现假阳性结果。此外还应配备加样器、台式高速离心机（冷冻及常温）、台式低速离心机、恒温设备（水浴和/或干浴仪）、冰箱、混匀器和可移动紫外灯等。

2.3.3

           标准的PCR实验室 扩增区

主要仪器就是核酸扩增热循环仪（PCR仪，实时荧光或普通的）。热循环仪的电源应专用，并配备一个稳压电源或UPS，以防止由于电压的波动对扩增测定的影响。此外，根据工作需要，还可配备加样器、超净台等。

2.3.4

           标准的PCR实验室 产物分析区：

本区所使用的仪器设备可能有加样器、电泳仪（槽）、电转印仪、杂交炉或杂交箱、水浴箱、DNA测序仪、酶标仪和洗板机等。

实验室区正压（扩增分析区因为没有缓冲，所以为负压），缓冲间负压的作法可以更好的防止气体的外泄及防止试剂准备区、标本制备区、产物扩增区、扩增分析区四区之间的气体相互渗漏。PCR实验室也可以分为三个区，即第三、四区合为一区，必须设立缓冲间。有条件建设实验室采用三十万级的标准来建设。空调系统采用制冷剂各区独立循环，可以防止气流交叉。

 一、 临床基因扩增检验实验室区域设置原则

    （一） 临床基因扩增检验实验室区域设置原则

    1、 试剂储存和准备区

    2、 标本制备区

    3、 扩增反应混合物配制和扩增区

    4、 扩增产物分析区

    如使用全自动分析仪，区域可适当合并。

    （二）各工作区域必须有明确的标记，避免不同工作区域内的设备、物品混用。

    （三）进入各工作区域必须严格按照单一方向进行，即试剂储存和准备区 —>标本制备区—>扩增反应混合物配制和扩增区—>扩增产物分析区。

 （四）不同的工作区域使用不同的工作服（例如不同的颜色）。工作人员离开各工作区域时，不得将工作服带出。

   二、 工作区域仪器设备配置标准

    （一） 试剂储存和准备区

    1、2-8C和-15C冰箱

    2、混匀器

    3、微量加样器（覆盖1-1000ul）

    4、移动紫外灯（近工作台面）

    5、消耗品：一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处理的离心管和加样器吸头（带滤心）

    6、专用工作服和工作鞋

    7、专用办公用品

    （二） 标本制备区

    1、2-8C冰箱、-20C或-80C冰箱

    2、高速台式冷冻离心机

    3、混允器

    4、水浴箱或加热模块

    5、微量加样器（覆盖1-1000ul

    6、可移动紫外灯（近工作台面）

    7、超净工作台

    8、消耗品：一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处理的离心管和加样器吸头（带滤心）

   9、专用工作服和工作鞋

    10、专用办公用品

    如需处理大分子DNA，应具有超声波水浴仪。

    （三） 扩增反应混合物配制和扩增区

    1、 核酸扩增仪

    2、 微量加样器（覆盖1-1000ul）

    3、 可移动紫外灯（近工作台面）

    4、消耗品：一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处理的离心管和加样器吸头（带滤心）

    5、 专用工作服和工作鞋

    6、 专用办公用品

    (四)扩增产物分析区

    视检验方法不同而定。基本仪器设备如下：  1、 微量加样器（覆盖1-1000ul）

    2、 可移动紫外灯（近工作台面）

    3、消耗品：一次性手套、一次性吸水纸、加样器吸头（带滤心）

    4、 专用工作服和工作鞋

    5、 专用办公用品

    为了对以个特定序列进行PCR做重复检测,需要三个不同的区域,每一个区域的具体技术操作和试剂在下面详细列出.

    1、样品准备区

    这个区域专门用作样品的准备，在制备和操作用于核酸提取的试剂时应该采

    取预防措施：

    1）PCR产物和带有要扩增序列的DNA克隆不能在这个房间操作。

    2）组织培养物、组织标本和血清样品都带进样品准备间处理，以根据应用的需要提取DNA或RNA。

    3）用于样品处理的工具不能被用作普通分子克隆的工具，也不能用作操作靶序列。

    4）DNA样品应该用有专门的防护或正压活塞式移液管操作，以防止在吸取样品时有气溶胶遗留。

    5）大体积样品应该用单独包装的无菌一次性移液管吸取。

    6）管子打开前都要简短离心以减少气溶胶的产生，而且管子不能用力崩开，这样会产生气溶胶。

    7）任何时候都应该穿实验服和带手套，手套要经常更换，尤其在抽提过程中每一步之间都要更换。实验服要专门用于样品准备间，经常清洗。

    2、样品准备和RNA-PCR

    RNA-PCR的额外步骤需要额外的样品操作，这样增加了样品之间污染的机会。为了避免这一问题，反转录一步可以在样品准备区进行。在RNA-PCR中应用UNG以防止污染的方法也有报道。

    3、前PCR区

    必须有专门用于准备各种反应的区域，这个区域必须保持干净，而且没有来自克隆和样品准备的污染。前PCR区必须要有试剂和准备，特别是专门用于前PCR区的正压活塞式移液管。

    4、PCR实验室试剂的操作

    1）所用的所有溶液都应该没有核酸和（或）核酸酶（DNase和RNase）污染。

    2）所有PCR试剂中使用的水都应该是高质量的－新鲜蒸馏的去离子水，用0.22μm过滤的，并且是高压xx。

    3）在20℃到25℃贮存的试剂建议加点像叠氮钠一类的抗微生物剂，在扩增试剂或样品制备试剂中加入0.025%的叠氮钠不抑制扩增反应。

    4）所用试剂都应该以大体积配制，实验一下看试剂是否满意，然后分装成仅够一次使用的量进行贮存。

   5）所有试剂和样品准备过程中都要使用一次性xx的瓶子和管子。

    6）新配制的试剂在用于准备新的标本之前应该加以检验。

    7）样品准备和前PCR区所使用的移液管在不使用时都应该小心保存。

    5、在前PCR区建立PCR混合物

   可以把即刻可用的“主混合物”溶液配好、分装并保存在-20℃或4℃，在实验室只涉及到扩增一种或少数几种特异序列时这样做很有用。

    6、控制污染的方法

    已设计出很有力的酶学方法用来xx一种形式的污染—使用UNG，这一技术能有效地xx由PCR产物引起的污染。另一种控制污染的方法是使用紫外线，这种方法不能xxxx污染问题，但可以将污染降低几个数量级。

    7、PCR仪的位置

    8、后PCR区

    PCR完成以后，需要分析样品并解释数据，应该留出一个专门用于反应后处理样品的地方。后PCR活动中使用的所用试剂、一次性耗材和仪器都必须是专门用于这一目的，决不能把实验室这一区域的试剂或仪器用于任何前PCR活动。

 北票宝信光电设备有限公  市场营销部 欧伟杰部长  15184218658