贵阳医学院免疫学教研室
{dy}节 抗原抗体的测定一、抗原抗体反应的相关理论 抗原具有抗原性(免疫反应性),可与相应的抗体在体外发生特异性结合,并在一定条件下出现可见反应现象.故可用已知的抗原(或抗体)检测未知的抗体(或抗原).因抗体主要存在与血清中,故又称为血清学反应.
(一)抗原抗体反应的特点1.特异性2.可逆性3.比例性和结合物的可见性4.阶段性(1)特异性结合阶段 (2)可见反应阶段
(二)抗原抗体反应的主要影响因素 1.抗原、抗体反应的浓度、比例 2.电解质 3.温度 4.酸碱度
三、血清学反应的种类(一)凝集反应(agglutination) 1.直接凝集反应(direct agglutination) 是指颗粒性抗原(凝集原)与相应的抗体(凝集素)直接结合所呈现的凝集现象.如红细胞ABO血型的测定,xx凝集试验.
2.间接凝集反应 (indirect passive agglutination) 是可溶性抗原或抗体吸附于与免疫无关的微球载体上,形成致敏颗粒,与相应的抗体或抗原在电解质存在的条件下进行反应,出现凝集.
(二)沉淀反应(precipetation) 是指可溶性抗原与相应抗体在合适的电解质存在下,出现肉眼可见的沉淀现象. 1.单向琼脂扩散试验 2.火箭电泳 3.双向琼脂扩散试验 4.对流免疫电泳
(三)补体结合试验 (complement fixation test,CFT)是在补体参与下,以绵羊红细胞和溶血素作为指示系统,来检测未知抗原或抗体的试验.
(四)中和反应(nertralization)毒素、酶、xx或病毒等与其相应的抗体结合后,导致生物活性的丧失. 1.病毒中和反应 2.毒素中和反应
(五)免疫标记技术 1.免疫酶技术 2.免疫荧光技术 3.放射免疫测定 4.免疫胶体金标记技术
第二节 免疫细胞的检测一、免疫细胞的分离(一)外周血单个核细胞的分离(二)T、B及其它免疫细胞的纯化(三)免疫磁珠分离法(四)荧光xx细胞分离仪分离法二、免疫细胞的计数(一)花环形成试验(二)荧光抗体染色
三、免疫细胞功能的检测(一)T细胞功能的测定 淋巴细胞转化试验:T细胞在体外受特异性抗原或有丝分裂原(PHA、ConA等)刺激后,能转化为淋巴母细胞.试验时取外周血,分离淋巴细胞,加入有丝分裂原或特异性抗原,在培养液中培养72小时,经涂片染色后镜检计算转化百分率.
(二)B细胞功能的检测1.空斑形成细胞检测(plaque formingcell,PFC) 是动物体外检测B细胞功能的方法.2.定量溶血分光光度法(QHS) 又称B细胞介导的红细胞定量溶血分光光度法,反映机体的体液免疫功能.3.酶联免疫斑点试验
(三)其他淋巴细胞功能的检测 1.NK 细胞活性测定 (1)NK细胞xxx伤功能的检测 (2)ADCC试验 2.LAK细胞活性测定(四)吞噬细胞功能检测 1.中性粒细胞吞噬功能的测定 2.大吞噬细胞的检测
第三节 细胞因子的检测一、细胞生物学活性检测法二、免疫学标记技术法三、分子生物学方法 人类干扰素的检测 白细胞介素-1(IL-1)的检测 肿瘤坏死因子(TNF)的检测
第四节 分子生物技术在免疫检测中的应用一、分子杂交技术二、转基因技术三、多聚酶链反应