新型老鼠药配方工艺技术 - 阿喜的日志 - 网易博客
2010-03-01 22:51:45 阅读10 评论0 字号：大中小
实用技术2 2009-09-06 08:33:42
新型老鼠药配方工艺技术
1：100倍（0.8％）的毒鼠磷毒饵饲养褐家鼠和小家鼠，投饵后24小时观察，死亡率皆达100％，但是由于毒鼠磷的气味较浓，在实际运用于灭鼠时，毒饵易被害鼠察觉而拒食，灭鼠仅29.88％，只及鼠钠盐32.26％，不能达到预期的效果，于是，首先从探求{zd1}有效使用浓度入手，试图以此解决适口性的问题。当浓度降低到0.06％[1：120倍]时，适口性虽然有了明显改善，但仍不够理想。浓度稀释到0.53％[1：150倍]，与0.66仍然相仿，灭鼠效果徘徊在70％左右。浓度再降低时，灭效也逐渐下降。
1、改进配方。
将醇化毒鼠的乙醇，由原来的毒鼠磷重量的15倍减少到6倍（加入2％的保险系数），所减少的9倍于配制毒饵时兑水补足，降低乙醇消耗量60％，保证了原来的灭效。
2、改进投饵方法。
通过用常规浓度（0.53％的毒饵在室内对家鼠进行饲养试验观察，逐步将大田灭鼠投饵量由开始的每洞10克（250-400）减少到1克左右（30-40粒）；每堆投饵量由开始的5-10克（180-360粒）减少到0.5-0.8克（20-30粒），而适当的增中投饵堆数。实践证明，这样并不]影响防效。使每亩平均饵料消耗量由开始的250克减少至150-200克，节省了20-40倍。
通过以上技术改革，使灭鼠投资使用0.05％敌鼠钠盐毒饵降低了53.14％，较开始试用0.08％毒鼠磷降低了41.62％。
２、提取方法
(１)收集红细胞：鲜牛血１００升，加入３. ８％柠檬酸三钠抗凝剂搅拌均匀，静置，使红细胞自然沉降，除去上层大部分血浆，下层液再离心除尽其余血浆，再加入３倍量０.９％氯化钠(精制食盐)洗涤两次， 离心可收集到压积红细胞(４０升)。
(２)热变性１：收集的红细胞再加入４公斤氯化钠，４０克氯化铜，蒸馏水１００升搅匀，水浴加热到６８度恒温３０分钟，迅速冷却加至室温，过滤除沉淀，收集滤液。
(３)热变性２：滤液在６５度恒温水浴下，向滤液中慢慢中入４０克氯化铜，至滤液清澈变为淡蓝色为止，保温２０分钟，迅速冷却至室温，离心去沉淀得上清液。
(４)SOD粗品：超滤心清液加入０.７５倍全积的丙酮沉淀， 离心收集沉淀于离于水，离心除去不溶物得清液，清液加入０.７５倍体积的丙酮沉淀， 离心收集沉淀，沉淀经无水丙酮洗涤脱水两次，真空干燥得淡蓝色粉末状SOD粗品
(５)SOD粗品提纯：SOD粗品溶于２.５mmol/L，ＰＨ值７.６磷酸钾缓冲液，将该混合液上在７.５＊３０cm的层柱上，离子换剂为ＤＥＡＥ-ＳphadexＡ-５０(该柱事先用缓冲平衡)，以１００～２００ml/小时速度上样，完毕后用同一缓冲Ａ２８０mm值，低于０.０２然后用２５～２００mmol/L，ＰＨ值７.６磷酸钾缓冲液进行直线梯度分段洗脱，流速为１００ml/小时。用部分收集器收集， 洗脱液经透析除盐后，得浓缩的透析液，经冷冻干燥，得SOD成品，(呈浅绿色)。
三、SOD活性测定：
SOD的测定方法很多，常见的有化学法，免疫法等电点聚焦法等，化学法测定的原理主要是利用有些化合物如邻苯三酚，在自氧化过程中会产生有色中间物降超氧游离基(Ｏ２)这样就可以利用SOD分例(Ｏ２)。阻止中间物的积累而测定其酶活性。
１、试剂及仪器
(１)邻苯本酚分析纯，用１０mmol/LECL配成５０mmol/L溶液。
(２)ＵＶ－７５４紫外分光光度计。
２、测定方法：
(１)邻苯三酚自氧化速度的测定。
在２５度、４５ml`５０mmol/L、ＰＨ值８.３、Ｋ２ＨＰＯ４－ＫＨ２ＰＯ４缓冲液中加入１０mmol/L的邻苯三酚，迅速摇匀，倒入光径１cm的比色杯内，在３２５mm波长下每隔３０秒测Ａ值一次，要求自氧化速度控制在０.０７００d/mm 左右。
(２)SOD或粗酶抽提液活性测定：
测定方法同测邻苯三酚自氧化速度，在加入邻苯三酚前加入待测SOD样液，测得数据按以下公式计算酶活性。
０.０７００－Ａ３２５mm/min
----------------------------------------＊１００％度
０.７０
样液稀释倍数 样液稀释倍数
酶活性(u/m1)＝------------＊反应液总体积＊----------------
５０％ 样液体积
３、蛋白浓度(mg/ml)和蛋白的计算：
SOD或粗酶抽提液，经２８０mm紫外比色测定后，查牛轿清白蛋的标准曲线，由此算出每ml含ug蛋白的量。
蛋白浓度＝ug蛋白/ml＊样液稀释倍数＊１０负３次方＝mg蛋白/ml总蛋白＝mg蛋白/ml＊原液总体积＝mg蛋白。
４、比活(u/mg蛋白)的计算：
单位活力(u/ml) 总活力
比活＝-----------------------＝-----------------＝u/mg蛋白
蛋白的浓度(mg蛋白/ml) 总蛋白
四、Ｃu、Ｚn－SOD性质：
１、Ｃu、Ｚ n－SOD呈蓝绿色，分子量在３２００左右，由两个中一个Ｃu和一个Ｚn。
２、对热稳定，xx牛血SOD，７５度下加热数分钟其酶活丧失很小。
３、ＰＨ值对SOD的影响，SOD在ＰＨ５.３～１０.５范围内，其催化速度不受影响，ＰＨ３.６时SODＺn脱落９５％，ＰＨ１２SOD构象发生不可递的构象，导致酶活性丧失。
４、SOD的紫外线吸收特征：SOD在２８０mm处没有吸收高峰。
５、金属辅其与酶活性。SOD属金属酶Ｚn仅于分子结构有关，而Ｃu与催化活性有关。
６、SOD是其具有还有和失活作用的。
