高效液相色谱法测定小儿惊风七厘散中黄芩苷的含量_zcwipi_新浪博客

【摘要】    目的:建立高效液相色谱法测定小儿惊风七厘散中黄芩苷的含量。方法:采用shimpack CLCODS色谱柱(6 mm×150 mm),流动相:甲醇水冰醋酸(45∶55∶0.5),流速1.0 mL/min,柱温40 ℃,进样量10 μL,检测波长277 nm。结果:黄芩苷在进样量0.01~0.07 mg/mL范围内浓度与峰面积线性关系良好,回归方程为Y=1486379X3748(r=0.9999,n=7),平均加样回收率为103.12%,RSD为1.76%。结论:本方法快速、简便、结果准确,可用于控制该制剂的质量。

 

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【关键词】  高效液相色谱法 小儿惊风七厘散 黄芩苷

  The Determination of Baicalin in Xiaoer Jingfeng Qili San by HPLC

  CUN Shican

  (The Dug Inspection Institute of Baoshan, Yunnan Province, Yunnan Baoshan  678000, China)
   
  [Abstract] Objective:To establish an high performance chromatography (HPLC) method to assay the concentration of baicalin in Xiaoer Jingfeng Qili San. Methods: Shimpack CLCODS (6 mm×150 mm) column and a mobile phase of methanol, water and glacial acetic acid (45∶55∶0.5) was used with the flow rate of 1.0 mL/min and the column temperature of 40 ℃. The detection wavelength was 277 nm. Results: There was a linear relationship within the range of 0.01~0.07 mg/mL and the regression equation was Y=1486379X3748 (r=0.9999, n=7). The recovery rate was 103.12% and RSD was 1.76%. Conclusions: This method is simple and accurate and able to control the quality of the preparation.

  [Key words] High performance liquid chromatography; Xiaoer Jingfeng Qili San; Baicalin
   
  小儿惊风七厘散收载于卫生部药品标准中药成方制剂第十一册,由牛黄、麝香、天麻、黄芩、黄连等33味中药组成,具有xx化痰、解热镇惊的功效。临床上用于小儿外感风邪、惊风抽搐、咳吐痰涎、食滞呕吐、xx泄泻等症。其中黄芩苷是黄芩的有效成分,在现行质量标准中无含量测定指标[1]。目前为止,用高效液相色谱法测定小儿惊风七厘散中黄芩苷含量尚无报道。为了更好地控制该制剂的质量,本实验建立了高效液相色谱法测定小儿惊风七厘散中黄芩苷的含量,并经方法学考察,认为本法简便快速,结果准确,可用于该制剂质量控制。

   仪器与试药
  
  LC10AD 高效液相色谱仪,SPD10A紫外可见光检测器,CTO10A柱温箱,CR6A数据处理机(日本岛津公司);CQ250 超声波清洗器(中船总公司七二六研究所)。黄芩苷对照品(中国药品生物制品检定所提供,批号为110715200514);小儿惊风七厘散(腾冲县东方红制药厂,规格:0.2 g/瓶,批号:20060706、20070703、20071105);甲醇为色谱纯,冰醋酸为分析纯,水为纯化水。

   方法与结果

  2.1   色谱条件
   
  色谱柱:shimpack CLCODS色谱柱(6 mm×150 mm);流动相:甲醇水冰醋酸(45∶55∶0.5)[2],流速1.0 mL/min;检测波长:277 nm;柱温:40 ℃;进样量:10 μL。理论塔板数按黄芩苷峰计算为4 156,拖尾因子为1.03。此条件下主峰与杂质峰达到基线分离。

  2.2  对照品储备液的配制
   
  精密称取真空减压干燥至恒重的黄芩苷对照品10.0 mg,置100 mL容量瓶中,用甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,得浓度为0.1 mg/mL的对照品储备液,备用。

  2.3  供试品溶液的制备
   
  取本品0.1 g,精密称定,置25 mL容量瓶中,加50%的甲醇溶液适量,超声处理30 min,放冷,用50%的甲醇溶液稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液备用。

  2.4  阴性对照溶液的制备
   
  按小儿惊风七厘散xx量和工艺制备方法制成不含黄芩的阴性样品。取阴性样品0.1 g,按供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。

  2.5  阴性对照试验
   
  按照上述色谱条件,吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各10 μL,分别注入液相色谱仪,结果见图1。阴性对照溶液中的组分不干扰供试品溶液中黄芩苷的测定。黄芩苷的保留时间为15.8 min。

  图1  高效液相色谱图(1黄芩苷)(略)

  2.6  标准曲线
   
  分别精密量取0.1 mg/mL的对照品储备液1、2、3、4、5、6、7 mL,置10 mL容量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀,滤过,分别精密吸取上述溶液10 μL进样,测定峰面积,以色谱峰面积(Y)为纵坐标,对照品溶液浓度(X)为横坐标,外标法得黄芩苷标准溶液的线性回归方程为:Y=1486379X3748(r=0.9999,n=7),结果表明黄芩苷浓度在0.01~0.07 mg/mL范围内与峰面积线性关系良好。

  2.7  精密度试验
   
  精密量取浓度为0.1 mg/mL的对照品储备液3 mL置10 mL容量瓶中,用甲醇稀释至刻度,得浓度为0.03 mg/mL对照品溶液,取上述溶液10 μL,{yt}内重复进样5次,测得各次峰面积分别为40410、40437、40504、40892、40632,以峰面积计算精密度,结果日内RSD为0.49%。

  2.8  加样回收率试验
   
  精密称取已知含量的样品(批号为20060706)6份,每份0.1 g,分别置25 mL容量瓶中,精密加入0.1 mg/mL黄芩苷对照品储备液3 mL,黄芩苷加入量为0.30 mg,按“2.3”项下方法制成供试品溶液,取10 μL进样测定并计算回收率,结果见表1。

  表1  黄芩苷加样回收率试验(略)

  2.9  稳定性试验
   
  取同一样品(批号为20060706),按“2.3”项下方法进行操作,分别在制备后0、2、4、6、8、10、12 h进样测定黄芩苷的含量,结果黄芩苷的含量分别为2.906、2.915、2.924、2.881、2.863、2.841、2.873 mg/g,RSD为1.0%。表明样品溶液在12 h内稳定性良好。

  2.10  样品测定
   
  取3批不同批号的样品,按“2.3”项下方法制成供试品溶液。另取0.1 mg/mL的对照品储备液2 mL,置10 mL容量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,滤过,制成对照品溶液。分别取供试品和对照品溶液各10 μL,按上述色谱条件测定并按外标法计算黄芩苷的含量,结果见表2。

  表2  样品含量测定结果(略)

  3  讨论
   
  本文曾以不同比例甲醇水冰醋酸、乙腈水冰醋酸为流动相进行实验,结果表明采用甲醇水冰醋酸(45∶55∶0.5)为流动相,供试品溶液黄芩苷峰与其他杂质成分峰分离较好。
   
  黄芩苷易溶于稀醇溶液中[3],在甲醇、水中溶解较少[4]。笔者曾用甲醇、50%甲醇溶液、甲醇∶盐酸(100∶1)溶液超声提取,另外对提取时间进行考察,选择20、30、40 min不同时间提取,结果表明用50%甲醇溶液超声处理30 min,能保证较高的提取率,且含量和回收率较理想。本试验在黄芩苷含量测定方法文献[5,6]的基础上,以文中色谱条件测定黄芩苷含量,供试品溶液中其他杂质峰不影响主成分峰的含量测定,结果准确,方法快速、简便,可用于该制剂的质量控制。

【参考文献】
    [1] 中华人民共和国药典委员会. 卫生部药品标准中药成方制剂[S]. 第十一册. 1996: 23.

  [2] 中华人民共和国药典委员会. 中华人民共和国药典(一部) [S]. 2005年版. 北京: 化学工业出版社, 2005: 579.

  [3] 孙 芳, 汪晓军, 党宏万. 复方黄芩颗粒质量标准研究[J]. 中国药师, 2005, 8(9): 724725.

  [4] 粱生旺. 中药制剂定量分析[M]. 北京: 中国中医药出版社, 1997: 204205.

  [5] 李延雪, 苏玉娟, 宋宝鹏. HPLC法测定牛黄上清片中黄芩苷的含量[J]. 中国药品标准, 2006, 7(3): 6162.

  [6] 刘 刚, 邹 军, 陈志明. 高效液相色谱法测定鼻渊灵颗粒中黄芩苷含量[J]. 医药导报, 2005, 24(10): 952953.

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