摘要］ 目的：研究雪莲注射液的HPLC指纹图谱测定方法。方法：以紫丁香苷为对照品，应用HPLC，色谱柱Diamonsil TMC18（4.6mm×250mm,5um），流动相甲醇-1%冰醋酸（线性梯度洗脱），柱温30℃，检测波长270nm,分析时间60min，流速1.0ml/min:。结果：标示出雪莲注射液的11个特征指纹峰。结论：该方法准确、重复性好，为雪莲注射液的指纹图谱质量控制提供了依据。
［关键词］ 雪莲注射液；指纹图谱；HPLC

     雪莲注射液由天山雪莲花Saussuera inxolucrata Lar. Et Kir.经提取、精制而成的注射液，属《卫生部药品标准》收载的制剂。具有xx镇痛、消肿，xx化瘀的作用，临床上用于急慢性风湿关节炎、类风湿关节炎，疗效肯定。，关于其质量控制和分析方法的报道主要是定性鉴别和比色法测定总黄酮的含量，对其指纹图谱的研究未见报道。本实验采用HPLC研究了雪莲注射液的指纹图谱质控技术。
1 仪器与试药
1.1 仪器
    仪L-7000型，包括L-7100双泵，L-7400紫外可见检测器，L-7300柱温箱（日本日立公司）；HW-2000色谱工作站（南京千谱公司）；TDL-4型离心机（上海安亭科学仪器厂）；CSF-250-3超声波清洗器（济宁超声电子仪器厂）。
1.2 试药
     甲醇（美国TEDIA，色谱纯），其余为分析纯。紫丁香苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号111574-200201），雪莲花对照药材（中国药品生物制品检定所，批号121205-0101），雪莲注射液（新疆中药厂提供，11批次，批号020101，020102，020103，020201，020301，020302，020303，020304，020401，020501，020901）。
2方法与结果
2.1 试验条件
     色谱柱：Diamonsil TMC18（4.6mm×250mm,5um），北京迪马科技公司）；检测波长270nm；柱温30℃；甲醇-1%冰醋酸线性梯度洗脱，程序为0～60min，甲醇0%～70%；分析时间60min；流速1ml/min，进样量20ul。
2.2雪莲花对照药材供试品溶液的制备
     精密称取雪莲花对照药材细粉0.5g，置具塞锥形瓶中，加75 %乙醇50ml，放置24h，滤过，精密吸取续滤液10ml，水浴浓缩至干，加水5ml，超声60min使其溶解，离心（4000r/min），取上清液0.45um微孔滤膜过滤，摇匀，作为供试品溶液。
2.3 雪莲注射液供试品溶液的制备
     精密量取雪莲注射液2ml置10ml量瓶中，加水至刻度，摇匀。取上清液0.45um微孔滤膜过滤，作为供试品溶液。
2.4对照品溶液制备
     精密称取紫丁香苷对照品适量，以甲醇定容为25ug/ml。
2.5 流动相的选择
     经试验比较，以甲醇-1%冰醋酸为流动相，梯度洗脱能较好地使样品中各成分分离且出峰最多；分析时间60min，理论板数以紫丁香苷峰计算不低于120000。
2.6 方法学考察
2.6.1 稳定性试验:取雪莲注射液供试品溶液，于0，2，4，8，16，24h进样测定，记录各共有峰保留时间和面积，以紫丁香苷的保留时间为1，计算出各共有峰的相对保留时间，以相对保留时间0.279的4 号色谱峰的面积值为1，计算出各共有的面积比值。结果：各共有峰的相对保留时间和单峰面积大于或等于5%总峰面积的峰面积比值基本一致，相对标准偏差均小于3%。表明稳定性良好。
2.6.2 精密度试验:取上述同一供试品溶液，连续进样6次，记录各共有峰保留时间和面积，以紫丁香苷的保留时间为1，计算出各共有峰的相对保留时间，以相对保留时间0.279的4 号峰的面积值为1，计算出各共有峰的面积比值。结果：各共有峰的相对保留时间和单峰面积大于或等于5%总峰面积的峰面积比值基本一致，相对标准偏差均小于3.0%。表明精密度良好。
2.6.3 重复性试验:取上述同一供试品6份，同法制备供试品液进样测定，记录各共有峰保留时间和面积，以紫丁香苷色谱峰（S峰）的保留时间为)，计算各共有峰的相对保留时间，以相对保留时间0.279的4 号峰的面积值为)，计算各共有峰的面积比值。结果：各共有峰的相对保留时间和单峰面积大于或等于5%总峰面积的峰面积比值基本一致，其相对标准偏差均小于3.0%。表明有较好的重现性。
2.7样品测定
2.7.1 测定了11批次的雪莲注射液。以紫丁香苷为对照品，其相对保留时间为1.0，标示了雪莲注射液指纹图谱中11个特征峰，其相对保留时间稳定RSD值均小于1%。
2.7.2 以相对保留时间0.279的4 号峰的面积值为1，计算各主要特征峰的相对面积，各批差异较大，各峰相对面积的RSD值在8% ～54%。
2.8 结论
     根据研究结果，制定了雪莲注射液标准指纹图谱技术参数，特征峰的相对保留时间（峰号）：0.090(1)，0.118（2），0.148（3），0.279（4），0.682（5），0.851（6），1.000（S），1.037（7）1.078（8），1.141（9），1.389（10）。
     该方法精密度、重复性好，可用于雪莲注射液的指纹图谱质量控制。
3 讨论
3.1 雪莲注射液中含有多种化学成分，如黄酮类、生物碱、内酯、甾醇、多糖等多种活性物质，成分较为复杂，很难找到较为理想的等度洗脱条件。研究中也分别采用了乙腈’磷酸、乙腈’水、乙腈’冰醋酸、甲醇’磷酸、甲醇’水、甲醇’冰醋酸等的不同浓度、比例的等度和梯度洗脱条件进行了试验，并记录了220，254，270，300，340，360nm等不同波长条件下的色谱图。结果发现采用甲醇-1%冰醋酸进行线性梯度洗脱，流速为1ml/min，测定波长270nm的条件为佳。在此条件下，雪莲注射液中的各组分可以得到较好的分离。雪莲注射液可直接取样配制、中间环节少，操作过程引入的误差较小。
3.2 比较了注射液指纹图谱与雪莲花药材的相关性，结果表明，注射剂中各主要特征峰均可在药材指纹图谱中得到追踪，但相对峰面积有所不同，可能与生产工艺过程有关。
3.3 雪莲注射液指纹图谱的建立有利于更全面的控制该制剂的质量。制订中药指纹图谱的目的在于更有效地控制中药成品的质量。由于雪莲注射液的材雪莲花目前还未能实现人工种植（有关此方面的研究工作已得到国家的重点扶持，目前已获得了可喜的进展），野生雪莲花药材批间质量的不同，造成了雪莲注射液指纹图谱中色谱峰面积的相对比值还存在一定的差异。因此，就目前而言，雪莲注射液指纹图谱的建立，其作用和意义应当更多的体现在定性鉴别方面。本研究也是在此方面进行的有益尝试和探索，为下一步的更深入研究奠定了基础。