内毒素简介:
内毒素(endotoxin)原称热原,是革兰氏阴性菌细胞壁外膜及其它微生物细胞壁的主要组成成分,其化学本质为脂多糖,主要由O-特异性链、核心多糖和类脂A三部分组成。脂多糖共价连接到非极性的疏水性类脂A(Lipid A)形成带负电荷的大分子,同时还具有一个亲水性的寡糖核,因而具有疏水和亲水双重性质。制备质粒DNA和重组蛋白时,xx破壁之后将释放大量脂多糖。无论是普通制备纯化程序,还是离子交换、凝胶排阻过滤,甚至是氯化铯超速离心等高级制备程序,脂多糖不可避免地与DNA或蛋白质牢固结合而被共同纯化。脂多糖具有强烈的免疫活性和细胞毒性,并能产生多种复杂的细胞生物学效应,大多数情况下会明显干扰并产生不可预测的实验结果。例如在DNA转染实验中,内毒素竞争性干扰转染试剂与DNA的结合,显著降低转染效率,并产生明显细胞毒性,降低外源基因表达水平。
内毒素xx剂主要用于xxDNA、蛋白质或其他液体样品中的内毒素。在特定的pH值、盐浓度和温度条件
下,内毒素xx剂能与DNA、重组蛋白以及液体样品中的内毒素特异性结合,经过室温高速离心后,DNA或蛋白质等保留在水相,而内毒素则被浓缩到极小体积的下层相而被xx。经过3次以上重复抽提后可将活性为5000~50000 EU/ml的内毒素水平降低到5~0.5 EU/ml以下,即降低1000~10000倍。本试剂4℃可储存半年,-20℃长期储存。
注意事项:
1、DNA浓度>1mg/ml时xx内毒素效率降低。由于DNA和蛋白质本身的性质,xx程序可导致10-20%DNA丢 失,所幸的是与xx内毒素的艰难相比DNA更容易提取制备。
2、所有溶液应用无内毒素的高纯水配制,所有器械材料均应不含内毒素,玻璃器皿可高温烘烤,非挥发性水溶液可高压120℃高温处理。
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