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山腊梅(Chimonanthus nitens O liv.)为腊梅科腊梅属植物[1]，多年生灌木，一般生长在海拔1000米以上的峭壁岩石上。野生“黄金茶”为山腊梅的幼嫩叶加工而来，具有xx解表、xxxx之功效，临床用于防治感冒、流行性感冒[2]。民间偏方验方认为：黄金茶防暑解暑效果神奇[3]。现代药理研究表明，山腊梅茶对xxxx、抗病毒效果显著[4]。常饮黄金茶，能调节人体机能，增强体质，延缓衰老，提高抗病能力。
中国加入WTO后，xxx进军国际市场主要阻碍是xxx本身的成分及含量的不明确性，这其中重金属的超标问题一直是某些国家卡草药进口的瓶颈。黄金茶作为世界自然遗产三清山的特色产品，面向国际市场，对其重金属的分析迫在眉睫。
目前，有对黄金茶挥发性成分的报道[5]，对黄金茶水提成分及重金属的研究未见文献报道。本实验从黄金茶功效出发研究其有效成分并测定其重金属含量。
一、多糖的测定
1  仪器与材料
1.1  仪器  SY-21型电热恒温水浴箱（北京泰克仪器有限公司），TU-1800SPS紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限公司），FA1004 -53423电子天平（上海天平仪器厂）。
1.2  材料   黄金茶购自江西市场，粉碎备用；分析纯葡萄糖(105 ℃干燥至恒重)。乙醇、苯酚、硫酸及其他试剂均为分析纯。
2  方法与结果
2.1  溶液的制备
2.1.1  蒽酮溶液  称取0.4000g蒽酮，加6ml无水乙醇助溶，再加75%硫酸200ml，摇匀，置棕色瓶中备用（临用前新配) 。
2.1.2  供试品溶液  精密称取已粉碎的茶叶样品约2g置圆底烧瓶中，加50ml蒸馏水加热回流两次，每次45min，过滤，合并提取液，用蒸馏水定容至100ml，取1ml稀释至50ml，即得供试品溶液。
2.1.3  葡萄糖标准溶液  精密称取105℃干燥至恒重的葡萄糖0.0401，至200ml量瓶中加水溶解并稀释至刻度，摇匀，得标准贮备液。
图1：光谱扫描曲线 （1—样品，2—葡萄糖）
2.2  测定波长的选择  分别量取葡萄糖对照品溶液、供试品溶液和蒸馏水各2.0ml，置20ml具塞试管中，各试管分别加蒽酮-硫酸溶液8ml，混匀，置沸水浴中加热10分钟，冷却，于400-800nm波长范围内扫描。结果见图1，葡萄糖对照品溶液和样品溶液在624nm处均有{zd0}吸收，空白对照溶液在此处无吸收，所以选择624nm为测定波长。
2.3  线性关系考察   分别吸取葡萄糖标准溶液0，5，10，15，20，25，30ml至50ml量瓶，蒸馏水定容得对照品溶液。取各对照品溶液2ml按2.2项下方法显色，在624nm处测定吸收度。以吸收度（A）为纵坐标，葡萄糖浓度（C）为横坐标绘制标准曲线，得回归方程 A=0.0099C+0.0022，r=0.9994。结果表明葡萄糖溶液在20.1-120.3μg/ml 范围内线性关系良好。
2.4  稳定性试验   取同一份供试品溶液2. 0 ml，按2.2项下方法显色，于0，10，20，30，40，50，60 min时在624nm处测定吸收度，测得吸收度RSD=0.1%，结果表明供试品溶液在1 h内吸收度稳定。
2.5  精密度试验   取同一份供试品溶液2. 0 ml（6份），按2.2项下方法显色，于624nm处测定吸收度，结果的RDS为1.09%（n=6）。
2.6  重复性试验   精密称取样品6份，各约2g按供试品溶液方法制备，再按2.2项下方法显色，于624nm处测定各样品吸光度的RSD为1.95%，表明该方法的重复性好，结果可靠。
2.7  加样回收率试验   精密称取已知多糖含量的样品6份，各约1g，分别加入葡萄糖13 mg，依法制备供试品溶液并测定多糖含量，计算加样回收率。结果平均加样回收率为101.5 %，RSD为2.45%（n=6）。
2.8  样品含量测定   精密称取样品6份，各约2g，按供试品溶液方法制备并测定多糖含量，多糖含量平均值为12.53%。
 
二、重金属的测定
1  仪器与材料
1.1  仪器   AFS-3100原子荧光分光光度计（北京科创海光仪器），EH35B型电热板（北京莱伯泰科仪有限公司）；空心阴极灯（北京有色金属研究总院）； FA1004 -53423电子天平（上海天平仪器厂）。
1.2  材料   黄金茶购自江西市场，粉碎后过40目筛备用；Pb国家标准溶液；Cd国家标准溶液；As国家标准溶液；Hg国家标准溶液（国家环境保护总局标准样品研究院）。硝酸、盐酸、高氯酸及其他试剂均为优级纯。
1.3  原子荧光分光光度计工作条件    见表1。
2  方法与结果
2.1  供试品溶液的制备
2.1.1样品的预处理
砷（As）、汞（Hg）：平行称取2g左右的样品于250ml 烧杯中（烧杯经10%硝酸溶液侵泡24小时，取出后用高纯水冲洗干净并干燥），加入15ml（1+4）高氯酸+硝酸的混合液，盖上表面皿，至于250-300℃电热板上消化。直至烧杯中黄烟冒尽（在消化过程中，若烧杯中有黑色颗粒，则可加入少许混合酸继续消化），溶液清亮，则可加入少量高纯水赶酸，至白烟冒尽，烧杯中溶液剩余2-3ml。同法做两份试剂空白。
铅（Pb）、铬（Cd）：平行称取2g左右的样品于250ml 烧杯中（烧杯经10%硝酸溶液侵泡24小时，取出后用高纯水冲洗干净并干燥），加入15ml（1+4）高氯酸+硝酸的混合液，盖上表面皿，至于250-300℃电热板上消化。直至烧杯中黄烟冒尽（在消化过程中，若烧杯中有黑色颗粒，则可加入少许混合酸继续消化），溶液清亮，则可加入少量高纯水赶酸，至白烟冒尽，烧杯中溶液xx蒸干。同法做两份试剂空白。
2.1.2 样品的转移 
As：用少量4mol/L的HCl溶液将烧杯中的溶液转移至25ml比色管中，尽可能xx转移，在比色管中加入10ml（5%抗坏血酸+5%硫脲）的混合液（作为还原剂），而后用4mol/L的溶液定容至25ml，摇匀放置30min。用2%KBH4+KOH溶液作还原剂，5%HCl作载流液测荧光强度。
Hg：用少量高纯水对烧杯中的液体进行转移，尽可能xx转移至25ml比色管中，在比色管中加入2.5 ml（1+1）硝酸，用高纯水定容，摇匀放置30min。以3%KBH4+KOH溶液作还原剂，5%HCl作载流液测荧光强度。
Pb：在烧杯中加入少量高纯水，充分溶解后将溶液转移至25ml比色管中，反复多次润洗烧杯尽可能转移xx，在比色管中加入2.5ml20%的HCl溶液，5ml(10%Fe(CN)6+2%草酸)混合液，用高纯水定容，摇匀即可。以2%KBH4+KOH溶液作还原剂，2%HCl作载流液测荧光强度。
Cd：在烧瓶中加入少量0.25mol/L的HCl溶液充分溶解后将溶液转移至25ml比色管中，反复多次润洗烧杯尽可能转移xx，在比色管中加入0.25mol/L的HCl溶液定容，摇匀放置30min。以2%KBH4+KOH溶液作还原剂，5%HCl作载流液测荧光强度。
2.2  标准曲线的绘制
2.2.1  As标准曲线   取标准As溶液（1.000g/L）0.1ml，用4mol/LHCl溶液定容至100ml，制成1.000mg/L的As标准溶液。分别取0.00，0.50，1.00，2.00，5.00ml的标准液于50ml量瓶中，分别加入10ml（5%抗坏血酸+5%硫脲）的混合液，而后用4mol/L的HCl定容，摇匀放置30分钟测定。以荧光强度（A）为纵坐标，浓度（C）为横坐标绘制标准曲线，得回归方程 A=16.950C+33.767，r=0.9993。结果表明标准As溶液在0-0.1 mg/ml范围内线性关系良好。
2.2.2  Hg标准曲线   取标准Hg溶液（1.000g/L）0.1ml，用0.05% 的K2Cr2O7溶液定容至100ml，制成1.000mg/L的Hg标准溶液。分别取0.00，0.20，0.40，0.80，1.20 ml的标准液于50ml量瓶中，分别加入5.0ml（1+1）硝酸溶液，用高纯水定容，摇匀放置30分钟测定。以荧光强度（A）为纵坐标，浓度（C）为横坐标绘制标准曲线，得回归方程 A=81.195C-12.662，r=0.9999。结果表明标准Hg溶液在0-0.24 mg/ml范围内线性关系良好。
2.2.3  Pb标准曲线   取标准Pb溶液（1.000g/L）0.1ml，用高纯水定容至100ml，制成1.000mg/L的Pb标准溶液。取0.00，2.00，4.00，10.00，20.00ml的标准液于50ml容量瓶中，分别加入5.0ml 20%HCl溶液，10ml(10%Fe(CN)6+2%草酸)混合液，用高纯水定容，摇匀放置30分钟测定。以荧光强度（A）为纵坐标，浓度（C）为横坐标绘制标准曲线，得回归方程 A=310.419C+14.261，r=0.9994。结果表明标准Pb溶液在0~0.4 mg/ml范围内线性关系良好。
2.2.4  Cd标准曲线   取标准Cd溶液（1.000g/L）0.1ml，用0.25mol/L的HCl溶液定容至100ml，制成1.000mg/L的Cd标准溶液。取0.00，0.05，0.10，0.20，0.25ml的标准液，0.25mol/L的HCl溶液定容，摇匀放置30分钟测定。以荧光强度（A）为纵坐标，浓度（C）为横坐标绘制标准曲线，得回归方程A=1.023C+13.869，r=0.9994。结果表明标准Cd溶液在0-0.005 mg/ml范围内线性关系良好。
2.3  精密度试验   取各元素同一标准溶液，按各元素方法重复进样6次，结果见表2。
2.4  重复性试验   精密称取样品各6份，按各供试品溶液方法制备，再按各元素方法测定，结果见表3。
2.5  加标回收率  在一定量的样品液中加入标准液，定容，进行加标回收率实验，根据定值计算回收率。结果见表4。
2.6  样品的测定 
以2%KBH4+KOH溶液作还原剂5%HCl作载流液测定As和Cd的荧光强度；以2%KBH4+KOH溶液作还原剂，2%HCl作载流液测Pb荧光强度；以3%KBH4+KOH溶液作还原剂，5%HCl作载流液测Hg荧光强度。根据荧光吸收计算金属元素含量，检测结果见表5。3  讨论 
3.1  多糖的xx提取是样品准确测定的关键，茶多糖易溶于水[6]，大量实验证明水提法有简单易行的优点，这也是多糖提取的通用方法[7]。本实验采用热水提取法，不考虑多糖变性。
3.2  蒽酮-硫酸溶液的稳定性对实验结果有影响，临用前新配。蒽酮-硫酸溶液的加入量要与供试品溶液成一定比例才有较好的显色效果，加热时间要足够。本法较硫酸-苯酚法更易于操作，且腐蚀性较低。
3.3  茶多糖具有提高机体xxx，降血糖，降血脂等多重活性[8]，是一种很有前景的xxxx[9]，本文测定的黄金茶（嫩叶）中多糖含量达12.53%，黄金茶中多糖含量远远高于其他茶叶品种这可能与它的科属有关系。作为饮用茶，黄金茶化学组成还有待进一步研究。
3.4  重金属As，Hg，Cd，Pb是对人体有害的微量元素，当其在人体内蓄积到一定量的时候对人体一些系统、器官产生不良影响。根据《药用植物及制剂进出口绿色行业标准》（2001）对重金属的限量指标（mg/kg）Pb≤5.0，Cd≤0.3，Hg≤0.2，As≤2.0[10]，检测结果表明本品的As，Hg，Cd，Pb都没有超标，符合我国无公害的环保茶叶标准。黄金茶中重金属的来源可能是植物生长时从土壤、空气中吸收。黄金茶作为三清山的特色产品，产品的质量要求尤为重要，本文的实验结果为黄金茶的质量控制提供了参考。
 
表1  工作条件参数
　 As Hg Cd Pb
光电倍增管负高压（V） 230 220 280 230
原子化器高度（mm） 8 8 8 8
灯电流（mA） 45 20 60 40
载气流量（ml/min） 400 400 450 500
屏蔽气流量（ml/min） 800 800 800 1000
读数时间（s） 15 15 14 10
延迟时间（s） 0 0 1 0
读数方式 Peak Area Peak Area Peak Area Peak Area
测量方法 Std.Curve Std.Curve Std.Curve Std.Curve
测量重复次数 1 1 1 1

表2  精密度试验结果
元素 As Hg Cd Pb
RSD(%)(n=6) 0.25 0.3 0.18 0.11
 

表3  重复性试验结果
元素 As Hg Cd Pb
RSD(%)(n=6) 1.83 2.39 0.23 0.18
 

表4    回收率实验结果
元素 本底值（μg/L） 加入量（μg/L） 测得量(μg/ml) 回收率（%） RSD(n=6)（%）
As 22.29 10 32.28 99.93 0.35
Hg 0.27 0.5 0.77 99.85 0.72
Cd 1.41 1 2.41 99.97 0.11
Pb 80.42 100 180.33 99.91 0.19

 
表5    黄金茶中重金属检测结果
 
元素 As Hg Cd Pb
平均含量（mg/kg） 0.2784 0.0033 0.0176 2.0042
 
注：样品中重金属含量计算公式为：X=( C1-C0) /M*25/1000式中：x—样品中重金属含量 mg/kg；C1—从标准曲线计算得出的样液浓度μg/L；C0 —从标准曲线计算出的空白液浓度μg/L；m—样品质量g。