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科学网-唐凌峰的博客-由实验中遇到的一个问题所想到的

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正文

由实验中遇到的一个问题所想到的

开始认为可能是显色前用的碱性磷酸酶缓冲液有问题。在抗体孵育后、显色前，标本需要用PBS清洗三次去除未结合的抗体，再用碱性磷酸酶缓冲液洗三次，为碱性磷酸酶提供一个适合的离子环境和PH值。为了抑制RNA酶，我在许多缓冲液例如PBS中都加入了EDTA，但是，是在做了{dy}次原位杂交之后才加入的。缓冲液保存于500毫升的玻璃瓶，用的时候，先转移50毫升到大的塑料离心管中。也就是说，{dy}管50毫升的碱性磷酸酶缓冲液是肯定没加EDTA的，而后面的可能加了。前面几次用的是{dy}管，上一次用的从500毫升的瓶子里面重新转移到大离心管中的。但是，当我检查装碱性磷酸酶的瓶子的时候，发现上面并没有注明加了EDTA。由于我有时候会忘记做标记，我还是认为，可能是加了EDTA但是没有标记。而EDTA可以抑制碱性磷酸酶的活性的。

首先，一定要非常清楚试剂的保质期。实验失败，试剂过期是一个常见原因。如果不清楚试剂保质期有多久，就可能用过期的试剂，导致实验失败，浪费时间。不同的试剂保质期是不一样的，酶、抗体等蛋白质制品保质期较短，而且稀释后有效期维持更短。很多实验室，为了节约经费，往往会用已经过了保质期的试剂。很多情况下，这些试剂虽然过期，但是还是有效的。如果实验室有人最近用过而且有效，则可以放心使用。但是，如果不清楚这些试剂是否有效，则使用之前需要设计一个简单的实验来检测。

此外，对于每一次失败，每一个实验中遇到的问题，应该提出至少三种可能的原因。我之所以{dy}次分析原因的时候没有找到正确的原因，还在于我只提出了一个可能的原因。事实上，引起问题的可能性是多种多样的，只提出一个解释，对的几率较小，如果同时提出多个假设，其中有一个正确的可能性就会大大增加。一开始就提出多个可能，可以在做实验检验的时候同时检测多个因素，这样，就容易通过一次实验找到症结。如果一开始提出一个可能，做实验去检验，发现不对，又提出另外一个可能，再做一次实验，发现还是不对，然后提出第三种可能，做第三次实验才发现原因，效率就会大大降低。

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