np-hplc 与 rp-hplc 两种方法测定制马钱子中士的宁含量
2010-06-09 23:28:17 阅读9 评论0 字号：大中小
【摘要】 目的 比较np-hplc 与 rp-hplc 两种测定制马钱子中士的宁含量的方法。方法 按照2000版和2005版《中国药典》，采用np-hplc 与 rp-hplc 两种方法。结果 加样回收率考察中np-hplc法平均回收率为97.16％，rsd=0.71％（n＝6）；rp-hplc法平均回收率为98.13％，rsd=0.45％（n＝6）。结论 此二种方法都准确可靠，rp-hplc法更为合适。
【关键词】 正相；反相；高效液相；士的宁；马钱子
determination of strychnine in nux vomica with methods of np-hplc and rp-hplc
cai xichao gong youming
(guangdong hospital of traditional chinese medicine, guangzhou510180, china)
abstract: objective to compare two methods to determine the strychnine in nux vomica b. methods the determination used two methods of np-hplc and rp-hplc according to ch p. of 2000 and 2005. results the average recovery rate of np-hplc was 97.16%, rsd=0.71% (n= 6), and the average recovery rate of rp-hplc was 98.13%, rsd=0.45%（n= 6）. conclusion these two methods were accurate and reliable, but the rp-hplc method was more appropriate.
key words: np-hplc; rp-hplc; hplc; strychnine; nux vomica
马钱子为剧毒中药材，苦、温、有大毒。功能通络止痛，散结消肿。用于风湿顽痹，麻木瘫痪，跌扑损伤，痈疽肿痛；小儿麻痹后遗症，类风湿性xxx。评价马钱子质量的主要指标成分分别是马钱子碱和士的宁。在《中国药典》2000版[1]中，马钱子含量测定项目下，是采用正相高效液相色谱法，只要求测定士的宁含量。但在《中国药典》2005版[2]中，采用了反向高效液相色谱法，同时测定士的宁和马钱子碱含量。为了检验本院使用的制马钱子药材质量，同时对二版药典中不同的测定方法进行粗略比较，我们分别采用此两种方法测定本院制马钱子药材中士的宁含量。
1 仪器与试药
1.1 仪器
agilent 1100 高效液相色谱系统（包括四元梯度泵g1311a、在线真空脱气机g1379a、自动进样器g1313a、柱温箱g1316a，紫外－可见检测器，agilent 1100色谱工作站）。
1.2 试药
士的宁对照品(中国药品生物制品检定所，批号0715-200211)；士的宁含量为1.89％的制马钱粉末（广东省中医院中心实验室提供）。二氯甲烷、正己烷、无水甲醇、乙腈、双蒸水(色谱级，merk公司)；0.01mol/l庚烷磺酸钠，0.02mol/l磷酸二氢钾，10%磷酸，三氯甲烷等。
2.1 色谱条件
2.1.1 np-hplc法
色谱柱：welch公司, ult5 si425 (5m，4.6× 250mm) ；流动相：正已烷-二氯甲烷-甲醇-浓氨试液(47.5:47.5:5:0.35)为流动相；检测波长为254nm；流速：1.0 ml/min；柱温：30℃；理论板数按士的宁峰计算不低于2000。
色谱柱：agilent公司, tc-c18 (5m，4.6× 250mm) ；流动相：乙腈－0.01mol/l庚烷磺酸钠与0.02mol/l磷酸二氢钾等量混合溶液（10%磷酸调节ph值2.8）(21:79)为流动相；检测波长为260nm；流速：1.0 ml/min；柱温：30℃；理论板数按士的宁峰计算不低于5000。
2.2 对照品溶液制备
2.2.1 np-hplc法
精密称取士的宁对照品适量，加醋酸乙酯制成每1ml含0.4mg的溶液，即得。
2.2.2 rp-hplc法
精密称取士的宁对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.12mg的溶液，即得。
2.3 供试品溶液制备
2.3.1 np-hplc法
取本品粉末（过三号筛）约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入氯仿25ml与浓氨试液1ml，密塞，轻轻振摇，称定重量，放置24小时，再称定重量，用氯仿补足减失的重量，充分振摇，滤过，精密量取滤液10ml，置分液漏斗中，用硫酸溶液(3→100)提取5次，每次15ml，合并硫酸液，加浓氨试液调节ph值至9～10，用氯仿提取5次，每次20ml，合并氯仿液，蒸干，残渣加醋酸乙酯溶解，转移至10ml量瓶中,并稀释至刻度，摇匀，即得。
2.3.2 rp-hplc法
取本品粉末（过三号筛）约0.6克，精密称定，置具塞锥形瓶中，加氢氧化钠试液3ml，混匀，放置30分钟，精密加三氯甲烷20ml，密塞，称定重量，置水浴中回流提取2小时，放冷，再称定重量，用三氯甲烷补足减失的重量，摇匀，分取三氯甲烷提取液，用铺有少量无水硫酸钠的滤纸滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液3ml，置10ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
2.4 线性关系考察
2. 4. 1 np-hplc法
取2.2.1项下制备的对照品溶液，分别进样2、4、6、8、10?滋l，以峰面积与进样量（ng）进行线性回归，得标准曲线为：area = 547.538168 amt(ng) +7.954789, r=0.9999,士的宁在0.8－4.0ng范围内呈良好线性。
2. 4. 2 rp-hplc法
取2.2.2项下制备的对照品溶液，分别进样2、6、10、14、18?滋l，以峰面积与进样量（ng）进行线性回归，得标准曲线为：area = 1959.8 amt(ng) - 621.48, r=0.9999，士的宁在0.24－2.16ng范围内呈良好线性。
2.5 精密度考察
2. 5. 1 np-hplc法
取样品溶液重复进样6次，每次4 ?滋l，测得6次峰面积的rsd=1.3％。
2. 5. 2 rp-hplc法
取样品溶液重复进样6次，每次10 ?滋l，测得6次峰面积的rsd=0.76％。
2.6 稳定性考察
2. 6. 1 np-hplc法
取样品溶液于配制后1、2、4、8、16、24h时进行测定，6次峰面积的rsd=1.5％，说明牛蒡苷在24h内稳定。
2. 6. 2 rp-hplc法
取样品溶液于配制后1、2、4、8、16、24h时进行测定，6次峰面积的rsd=1.0％，说明牛蒡苷在24h内稳定。
2.7 加样回收率考察
2. 7. 1 np-hplc法
精密称取已知士的宁含量为1.89％的制马钱粉末（广东省中医院中心实验室提供）6份，每份0.5g，按2.3. 1项制备样品溶液方法处理，至“转移至10ml量瓶中”，然后按表1向量瓶中加入一定量的士的宁标准品，进样量4?滋l，并测定含量。
2. 7. 2 rp-hplc法
精密称取已知士的宁含量为1.89％的制马钱粉末（广东省中医院中心实验室提供）6份，每份0.6g，按2．3. 2项制备样品溶液方法处理，至“转移至10ml量瓶中”，然后按表2向量瓶中加入一定量的士的宁标准品，进样量10?滋l，并测定含量。
表1 np-hplc法回收率考查
平均加样回收率为97.16％，rsd＝0.71％
表2 rp-hplc法回收率考查
平均加样回收率为98.13％，rsd＝0.45％
2. 8 样品含量测定
2. 8. 1 np-hplc法
取2.3.1中供试品溶液，按照上述方法，进样4?滋l，测得本院制马钱中士的宁含量为1.93％（n＝3）。
2. 8. 2 rp-hplc法
取2.3.2中供试品溶液，按照上述方法，进样10?滋l，测得本院制马钱中士的宁含量为1.95％（n＝3）。
3 讨论
3. 1 此二种方法准确度和精密度都比较高，能够较好的测定士的宁含量。
3. 2 比较二种方法的加样回收率，np-hplc法加样回收率较低，rsd值较大，有可能说明np-hplc法较rp-hplc法的准确度和精密度为低，但具体结果还需要进一步验证。
3. 3 目前rp-hplc 分析仪器应用比较普遍，在《中国药典》2005版中rp-hplc法不但可以检测士的宁含量，而且同时可以检测马钱子碱含量，因此，总体上2005版药典记载的马钱子含量测定项方法较2000版药典更加合适。
3. 4 二版药典中所记载的供试品溶液制备方法都比较复杂，在以后工作中我们拟研究更加简便的方法。
【参考文献】
[1] ch p (中国药典)［s］.volⅰ. 2000.
[2] ch p (中国药典)［s］.volⅰ. 2005.
