常用鉴定试剂的配制和应用

常用鉴定试剂的配制和应用

2010-06-08 12:55:40 阅读21 评论0 字号:

(一)通用试剂
1.碘试剂
检查一般有机化合物。
(1)碘蒸气  预先将盛有碘结晶的小杯置于密闭的玻璃容器内,使容器空间被碘蒸气饱和,将薄层置于容器内数分钟即显棕色斑点。有时,于容器中加放一小杯水,增加容器内的湿度,可提高显色的灵敏度。
(2)0.5%碘的氯仿溶液  喷洒试剂,置空气中待过量的碘挥发后,喷1%淀粉溶液,斑点由棕色转为蓝色。
2.硫酸试剂
检查一般有机化合物。
5%硫酸乙醇溶液作为色谱显色剂用。喷洒后,置空气中干燥15min,100℃烤至斑点呈色(不同化合物呈不同颜色)。
3.重铬酸钾-硫酸试剂
检查一般有机化合物。
5 g重铬酸钾溶于100 ml 40%硫酸中。喷该试剂后,150℃加热至斑点出现(不同化合物呈不同颜色)。
4.磷钼酸试剂
检查还原性成分。
5%磷钼酸乙醇溶液。喷洒后,120℃加热至呈蓝色斑点。
5.磷钨酸试剂
检查还原性成分。
20%磷钨酸乙醇溶液。喷洒后,120℃加热,还原性物质呈蓝色斑点。
6.中性高锰酸钾试剂
    检查易还原性成分。
    0.05%高锰酸钾溶液。喷洒后粉红色背景上显黄色斑点。
7.碱性高锰酸钾试剂
检查还原性成分。
溶液I: 1%高锰酸钾溶液。
溶液II:5%碳酸钠溶液。溶液I和II等量混合使用,喷洒后,粉红背景上显黄色斑点。

(二)苷类鉴定试剂
1.糖鉴定试剂
(1)α-萘酚-硫酸试剂
检查还原糖。
溶液I:10%α-萘酚乙醇溶液。
    溶液II:硫酸。   
(2)斐林试剂
    检查还原糖。
    溶液I:6.93 g结晶硫酸铜溶于100 ml水中。 
    溶液II:34.6 g酒石酸钾钠、10 g氢氧化钠溶于100 ml水中。
    用时将配制的溶液1、II等量混合液,在沸水浴中加热数分钟,产生砖红色沉淀为阳性反应。
 (3)茴香醛-硫酸试剂
    检查糖类化合物。
    硫酸1 ml加到含茴香醛0.5 ml的乙酸溶液50 ml,中,需临用前配制。喷洒于薄层板上,105℃加热至显示色斑,不同糖显不同颜色。
 (4)苯胺-邻苯二甲酸试剂
    检查糖类化合物。
    苯胺0.93 g和邻苯二甲酸1.66 g溶于l00 ml水饱和的正丁醇中。作色谱显色剂用。喷后105℃加热5 min,显红棕色斑点。
(5)1,3-二羟基萘酚-磷酸试剂
    检查酮糖、醛糖。   
    0.2%1,3-二羟基萘酚乙醇溶液50 ml与85%磷酸50 ml混合均匀后使用。喷后105℃加热5~10 min,酮糖呈红色,醛糖显淡蓝色。
 (6)苯胺-二苯胺-磷酸试剂   
    检查糖类化合物。   
    苯胺4 ml,二苯胺4 g及85%磷酸20 ml溶于丙酮200 ml中。喷洒于薄层板上,85℃加热10 min,不同糖显不同颜色。
 (7)三氯化铁-冰醋酸(KK)试剂
    检查α-去氧糖,常用于强心苷。   
    溶液I:1%三氯化铁溶液0.5 ml,加冰醋酸至100 ml。
    溶液II:硫酸。   
(8)Gregg-Gisvold试剂
    检查2,6-去氧糖。
    溶液I:10%三氯化铁溶液。   
    溶液II:1%盐酸甲醇溶液(97.2 ml甲醇中含2.8 ml盐酸)。
    0.5 ml溶液I与100 ml溶液Ⅱ混合。将样品的乙醇溶液点于滤纸片上,晾干后,喷洒上述混合试剂,110℃加热5 min,显蓝色为阳性反应。
 (9)3,5-二氨基苯甲酸-磷酸试剂
    检查2-去氧糖。
3,5-二氨基苯甲酸二盐酸盐1 g溶于80%磷酸25 ml,加水稀释至60 ml。喷洒后,100℃加热15 min,2-去氧糖在日光下显棕色,在紫外光下显黄绿色荧光。
2.酚类鉴定试剂
(1)三氯化铁试剂
    检查酚类化合物、鞣质。
    1~5%三氯化铁水溶液或乙醇溶液,加盐酸酸化。取l ml样品的乙醇溶液,加入试剂1~2滴,显绿、蓝绿或暗紫色为阳性反应。作色谱显色剂用,喷洒后,显绿或蓝色斑点为阳性反应。   
(2)4-氨基安替匹林-铁氰化钾(Emerson)试剂
    检查酚羟基对位无取代基的化合物。
    溶液I:2%4-氨基安替匹林乙醇溶液。
    溶液II:8%铁氰化钾溶液。作色谱显色剂用,先喷洒溶液I,再喷洒溶液II,用氨气熏,显橙红或深红色斑点为阳性反应。
(3)Gibbs试剂
    检查酚羟基对位无取代基的化合物。
    溶液I:0.5% 2,6-二溴(氯)苯醌氯亚胺的乙醇溶液。
    溶液II:1%氢氧化钾乙醇溶液。取1 ml样品的乙醇溶液,滴加溶液II,使pH 9-10;再加入1~2滴溶液I,显深蓝色为阳性反应。
(4)铁氰化钾-三氯化铁试剂
    检查酚类、芳香胺类及还原性物质。
    溶液I:1%铁氰化钾溶液。
    溶液II:2%三氯化铁溶液。   
    临用前等体积混合。喷洒后酚性成分呈蓝色斑点,再喷20%盐酸,能使颜色加深。纸色谱可用稀盐酸洗去喷洒液。
3.黄酮类鉴定试剂
(1)盐酸-镁粉试剂
    显红-紫色为阳性反应。
(2)Shinoda试剂 
    采用含2%锌粉(W/W)—硅胶薄层板,展层后喷20%盐酸溶液,黄酮(醇)类呈红紫色。
(3)三氯化铝试剂  
    1%三氯化铝乙醇溶液或5%三氯化铝乙醇溶液。喷洒前、后将薄层板置日光下和紫外光灯下观察,呈黄色或黄绿色荧光为阳性反应。也可在滤纸上和试管中进行。
(4)中性醋酸铅或碱式醋酸铅试剂
    检查具邻二酚羟基或酚羟基的黄酮化合物。   
    饱和中性醋酸铅或碱式醋酸铅溶液。取l ml样品的乙醇溶液,加1滴试剂,产生黄色沉淀。
(5)锆-柠檬酸试剂  
    检查具3-羟基或5-羟基的黄酮类化合物。   
    溶液I:2%二氯氧锆甲醇溶液。 
    溶液II:2%柠檬酸甲醇溶液。取l mg样品,用甲醇溶解,加入溶液I l ml,呈鲜黄色示有3-羟基或5-羟基;再加入溶液II l ml,黄色不褪,示有3-羟基;黄色褪去,加水稀释后变为无色,示无3-羟基,但有5-羟基。也可在滤纸上进行,得到的锆盐络合物多呈黄绿色,并具荧光。
(6)醋酸镁试剂   
    检查黄酮类、二氢黄酮类化合物,及羟基蒽醌类衍生物。
    1%醋酸镁甲醇溶液。紫外灯下观察,黄酮类显黄色荧光,二氢黄酮类呈天蓝色荧光。显橙红色为大黄素型蒽醌,显紫色为茜草型蒽醌。
(7)硼氢化钾试剂
    检查二氢黄酮类化合物。
    2%四氢硼钾的甲醇溶液。取样品1~2 mg溶于甲醇中,加等量试剂l min后,加数滴盐酸,呈红-紫红色为阳性反应。
4.醌类化合物鉴定试剂
(1)Borntrager试剂  
    检查羟基蒽醌衍生物。   
    2%氢氧化钠或2%碳酸钠溶液(或甲醇溶液)。取1 ml样品的乙醇溶液,加1 ml试剂,至红色为阳性反应;在薄层色谱上喷洒试剂,显橙黄或红色斑点。黄酮类化合物遇碱也能反应生成黄、橙、红色等。
(2)菲格尔(Feigl)试剂
    检查醌类衍生物。   
    溶液I:25%碳酸钠溶液。
    溶液II:4%甲醛的苯溶液。
    溶液III:5%邻二硝基苯的苯溶液,取1滴样品的苯溶液,加入上述3种试液各1滴,混匀,置水浴上加热l~4 min,呈显著的紫色为阳性反应。
(3)硼酸试剂
    检查羟基蒽醌类化合物。
    1%硼酸溶液。作色谱显色剂用,喷洒后,置紫外光灯下观察,呈黄、橙、红色荧光为阳性反应。
(4)对亚硝基二甲基苯胺试剂
检查蒽酮类衍生物。
    0.1%对亚硝基二甲基苯胺的吡啶溶液。取1 ml样品的乙醇溶液,置水浴上蒸干,残渣用吡啶溶解,再滴试剂数滴,显紫色或绿色为阳性反应。
5.内酯、香豆素类鉴定试剂
(1)开环-闭环试剂
   检查内酯环。
   溶液I:1%氢氧化钠溶液。
   溶液II:2%盐酸溶液。取1 ml样品的乙醇溶液,加2 ml溶液I,置沸水浴上加热3~4 min,溶液比未加热时澄清。再加溶液Ⅱ酸化(pH2),放置,溶液又变为混浊。酚性化合物和有机酸有干扰,但可用下法予以区别。
   取样品乙醇溶液数毫升,置水浴上蒸干溶剂,用乙酸乙酯溶解后置分液漏斗内,用5%氢氧化钠溶液萃取酚性及有机酸成分,乙酸乙酯溶液用水洗至中性后按上法检测。
(2)异羟肟酸铁试剂
   检查内酯环。
   溶液I:7%盐酸羟胺甲醇溶液(新鲜配制)。
   溶液II:10%氢氧化钾甲醇溶液。
   溶液III:1%三氯化铁甲醇溶液。取1 ml样品的甲醇溶液,加入溶液I、Ⅱ各5滴,置沸水浴上加热3~4 min,冷却后,用稀盐酸调至pH3~4,再加入溶液Ⅲ1~2滴,显橙红或紫红色为阳性反应。作色谱显色用,将溶液I、II等量混合,喷洒后空气中干燥10 min,再喷1%三氯化铁盐酸溶液,显橙红或紫红色斑点。
(3)稀氢氧化钠溶液
    将检样点于滤纸片或薄层上,试样边缘点上碱液,晾干,置紫外灯光下观察,多数羟基香豆素有强的荧光。配合酚类鉴定试剂的检查,以确定游离酚羟基的存在及取代位置。   
6.强心苷鉴定试剂   
(1)碱性3,5-二硝基苯甲酸(Kedde)试剂
    检查强心苷的α,β-不饱和内酯环。
    2%3,5-二硝基苯甲酸甲醇溶液与5%氢氧化钾溶液,用前按1:1混合。取1 ml样品的甲醇溶液,加入3~4滴试剂,显紫红色为阳性反应,几分钟后褪色。也适用于薄层色谱。   
(2)碱性苦味酸(Baljet)试剂
    检查强心苷的α,β-不饱和内酯环。
9 m1 1%苦味酸乙醇溶液与lml 10%氢氧化钠溶液用前配制混合。用1 ml样品的乙醇溶液,加入1滴试剂,放置15 min左右,显橙红色或红色为阳性反应。
(3)碱性亚硝酰铁氰化钠(Legal)试剂
    检查不饱和内酯、甲基酮或活性亚甲基(常用于强心苷)。
    溶液I:0.5%亚硝酸铁氰化钠乙醇溶液。
    溶液II:10%氢氧化钠溶液。取l ml样品的甲醇溶液,置水浴上蒸干,冷却后加l ml吡啶溶解残渣,加入4~5滴溶液I和1~2滴溶液II,溶液显红色并逐渐消失为阳性反应。用于薄层色谱检查,将1 g亚硝酰铁氰化钠溶于10%氢氧化钠-乙醇(1:1)的溶液中,喷洒后,显红色或紫色斑点。
(4)醋酐硫酸(Liebermann-Burchard)试剂   
    检查甾体、甾体皂苷、三萜类及强心苷。
    取0.1~0.2 mg样品,置于白瓷反应板上,加入0.3 ml醋酐,使样品溶解,沿边缘滴入硫酸,出现红-紫-蓝-绿色,{zh1}褪色为甾体皂苷,三萜皂苷只能呈黄-红-紫等。
    强心苷的鉴定应由苷元(甾体母核和不饱和五元内酯)和2-去氧糖两部分共同证实。
7.甾体、三萜及其苷的鉴定试剂
(1)三氯化锑试剂
    检查甾体、萜类、皂苷。
    25 g三氯化锑溶于75 ml氯仿中。喷后l00℃加热5 min,不同皂苷元在可见光或紫外光灯下显不同颜色。
(2)三氯醋酸试剂
    检查皂苷。
    3.3 g三氯醋酸溶于10 ml氯仿,再加入1~2滴30%过氧化氢溶液。将样品的氯仿溶液滴在滤纸上,加试剂1滴,加热至60℃,生成红色-紫色为甾体皂苷;加热到100℃始见显色的为三萜皂苷。
(3)硫酸-甲醇(1:1)试剂
    喷后加热,不同皂苷元可显红褐色、紫色、黄色或黑色。所显颜色与温度无关。   
(4)氯磺酸-乙酸(1:1)试剂
    喷后130℃加热5 min,各种皂苷元可显天蓝色、紫色、粉红色、淡棕色等,在紫外光灯下也显不同的荧光。
(5)香草醛硫酸试剂
    检查高级醇类、酚类、甾体、萜类、芳香油。
    1 g香草醛溶于l00 ml硫酸中,或0.5 g香草醛溶于100 ml硫酸-乙醇(4:1)中。喷洒后,120℃加热观察,显示红、蓝、紫等各种颜色斑点。
8.氰苷鉴定试剂
(1)苦味酸试纸
(2)普鲁士蓝试验
    溶液I:10% 硫酸亚铁溶液(用前配制)。
    溶液II:5% 三氯化铁溶液。取样品粉末0.5 g置试管中,加水湿润,立即用经10% 氢氧化钾溶液湿润的滤纸将试管口包紧,于热水浴上加热10 min后,在滤纸上加溶液I、稀盐酸和溶液II各1滴,滤纸显蓝色为阳性。
(三)挥发油鉴定试剂
1.茴香醛硫酸试剂   
    硫酸l ml加至50 ml冰醋酸中,冷却后加入茴香醛0.5 ml(必须临用时配制)。喷洒后,105℃加热,挥发油中各成分显不同颜色。 
2.碘化钾-冰醋酸-淀粉试剂
    检查过氧化物。
    溶液I:4%碘化钾溶液10 ml与冰醋酸40 ml混合,再加锌粉一小匙过滤。
    溶液II:新制的1%淀粉溶液。先喷溶液I 5 min.后大量喷溶液II,直至薄层透明止。显蓝色斑点为过氧化物。
3.2,4-二硝基苯肼试剂  
    检查醛、酮类化合物。
    1 g 2,4-二硝基苯肼、36%盐酸10 ml溶于1000 ml乙醇中。喷洒后,显黄红色斑点为阳性反应。
4.硝酸铈试剂
    检查醇类化合物。
    硝酸铈6 g溶于2.5% l00 ml硝酸溶液中,喷洒后,黄色背景上显棕色斑点为阳性反应。 
(四)生物碱鉴定试剂   
1.改良碘化铋钾试剂
    生物碱通用显色剂。 
    溶液I:0.85 g次硝酸铋溶于l0 ml冰醋酸,加水40 ml。
    溶液II:8 g碘化钾溶于20 ml水中。溶液I和Ⅱ等量混合,于棕色瓶中可以保存较长时间。   
目前市场上有碘化铋钾试剂可供直接配制:7.3 g碘化铋钾、冰醋酸10 ml加水60 ml取l ml样品的稀酸溶液加1~2滴试剂,产生桔红色浑浊或沉淀为阳性反应。如作薄层色谱显色剂,取混合液l ml、醋酸2 ml、水10 ml混合即得。喷洒后呈桔红色斑点为阳性反应。
2.碘化汞钾试剂
    生物碱通用沉淀试剂。
    1.36 g氯化汞和5 g碘化钾各溶于20 ml水中,将氯化汞溶液慢慢加入碘化钾溶液,混合后,加水至100 ml。取l ml样品的稀酸溶液,加入1~2滴试剂,产生类白色沉淀为阳性反应。
3.硅钨酸试剂   
    生物碱通用沉淀试剂。
    1 g硅钨酸溶于20 ml水中,加10%盐酸使成pH2左右。取l ml样品的稀酸溶液,加入1~2滴试剂,产生白色至褐色沉淀为阳性反应。
4.碘化铂钾(碘铂酸)试剂   
    生物碱通用沉淀试剂。  
    10%六氯铂酸3 ml和97 ml水混合,加6%碘化钾溶液100 ml,混合均匀(临用前配制)取l ml样品稀酸溶液,加1~2滴试剂,不同生物碱显不同颜色沉淀。
5.碘-碘化钾试剂
    生物碱沉淀剂。   
    1 g碘及10 g碘化钾溶于50 ml水中,加2 ml醋酸,再用水稀释至100 ml,取l ml样品稀酸溶液,加入试剂1~2滴,产生棕色或褐色沉淀为正反应。
6.苦味酸试剂
    生物碱通用沉淀试剂。   
    苦味酸1 g溶于100 ml水中。取l ml样品中性溶液,加入试剂1~2滴,产生黄色晶形沉淀。
7.硫酸铈-硫酸试剂
    检查生物碱及含碘化合物。  
    0.1 g硫酸铈悬浮于4 ml水中,加三氯醋酸1 g,加热至沸,放冷,逐滴加入硫酸直到浑浊消失为止。喷洒试剂后,110℃加热数分钟,呈色(不同生物碱显不同的颜色)。
8.雷氏铵盐试剂  
    检查水溶性生物碱。
    2%硫氰化铬铵溶液(临用时配制)。取l ml样品的弱酸性水溶液(pH5-6),加入1~2滴试剂,产生暗红色沉淀为阳性反应。
9.Ehrlich试剂   
    检查吡咯、吲哚类生物碱。 
    1 g对二甲氨基苯甲醛溶于25 ml 36%盐酸和75 ml甲醇混合溶液中。取1 ml样品的稀酸溶液,加入数滴试剂,加热,显紫红或青紫色。
(五)鞣质类鉴定试剂
1.氯化钠-明胶试剂
    检查糅质。
    1 g明胶溶于50 ml水中(60℃水浴中加热),加入10 g氯化钠,使xx溶解后,用水稀释到100 ml取l ml样品的60℃水浸液,加入1~2滴试剂,产生白色浑浊或沉淀。
2.对甲苯磺酸试剂
    检查鞣质、甾体、黄酮类。   
    20%对甲苯磺酸氯仿溶液。薄层色谱上喷洒试剂后,100℃加热5 min显出不同颜色的斑点。  
3.新鲜石灰水试剂
    检查鞣质。
    取l ml样品的热水提取溶液,加新鲜石灰水上清溶液数滴,产生青灰色沉淀为可水解鞣质,产生棕或棕红色沉淀为缩合鞣质。
(六)氨基酸、多肽,蛋白质鉴定试剂
1.茚三酮试剂   
    检查2-氨基酸及含有2-氨基酸的肽类、氨基糖和蛋白质。
    0.2 g茚三酮溶于l00 ml正丁醇中,加冰醋酸3 ml。或者0.2 g茚三酮溶于100 ml乙醇或丙酮中。取l ml样品的冷水浸液,加入2~3滴试剂,沸水浴上加热5 min,放冷,显蓝色或蓝紫色。
2.吲哚醌试剂
    检查氨基酸、多肽。  
    吲哚醌1 g溶于l00 ml丙酮中,加入10 ml醋酸。作薄层色谱显色剂,喷洒试剂后,100℃~110℃加热10 min。显蓝、红、桃红或棕色斑点。
3.1,2-萘醌-4-磺酸钠试剂   
    检查氨基酸。   
    0.02 g 1,2-萘醌-4-磺酸钠溶于l00 ml 15%碳酸钠溶液中,新鲜配制。喷洒试剂后,室温晾干,不同氨基酸出现不同的颜色。
4.双缩脲试剂
    检查多肽,蛋白质。  
    溶液I:10%氢氧化钠溶液。 
    溶液II:1%硫酸铜溶液。取l ml样品的冷水浸液,加入2 ml溶液I与II等体积混合液(新鲜配制),摇匀后显紫红色。  .
(七)有机酸鉴定试剂
1.溴酚蓝试剂   
检查有机酸。
    0.1%溴酚蓝的乙醇溶液。作薄层色谱显色剂,喷洒后,蓝色背景上呈黄色斑点。如不明显,可再喷氨水,然后暴露在盐酸气体中、则为黄色背景上呈蓝色斑点。   
2.芳香胺-还原糖试剂   
    检查有机酸。 
    5 g苯胺和5 g木糖溶于l00 ml 50%乙醇中。作薄层色谱显色剂,喷洒试剂后,125~130℃加热至出现棕色斑点。

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