??????单抗和多抗的固有特性决定了其优劣势。单抗是由单个B细胞克隆产生的，具有高亲和力和针对单个抗原表位的特异性。如需检测具有相同氨基酸序列的蛋白家族，单抗就非常适合。单抗和抗原结合的效果取决于抗原能否保持其xx构象。但是抗原的构象一旦由于各种原因发生改变，比如：由于蛋白相互作用，翻译后修饰，温度，pH，固定，盐浓度等，单抗和抗原结合的效果会受到严重影响。

??????由于多抗可以识别多个表位，不太受蛋白质构象变化的影响。一般来说，在一定的值和盐浓度范围内，多抗也比单抗更加稳定。基于这些原因，多抗比单抗更适合IHC/ICC实验。

?????? 一抗抗体浓度，稀释，孵育时间和温度都会影响染色质量。这些变量需要针对不同抗体和样品进行优化，以达到高特异性，低背景的信号。一般的优化过程是，保持固定的孵育时间和温度，同时改变抗体的浓度以决定{zj0}的低噪音背景的信号。例如，使用一只高亲特异性抗体，可以使用相对较高的抗体浓度配套较短的孵育时间；或者，相对较低的抗体浓度配套较长的孵育时间。 为促进特异性染色，常选用较长的孵育时间及较低温度下进行（如室温和4°C）。

?????? 所有IHC/ICC研究具体取决于抗体抗原结合，由疏水作用，离子相互作用，氢键结合以及其他分子间作用力等控制。然而，同样的引力也可能导致非特异性染色，即一抗结合了抗原表位以外的氨基酸。这是在IHC/ICC中是一个常见的问题。我们面临的挑战是减少非特异性相互作用，而不影响抗体的抗原表位结合。

?????? 非特异性染色的原因包括一抗和二抗与和血清蛋白的相互作用，抗体和组织间的离子相互作用，能影响IHC检测系统的内源性分子的相互作用。这些问题可能导致高背景从而无法观察到目标蛋白的表达位置。通过使用阻断剂（a blocking reagent），可以修正非特异性染色体，而这些修正步骤都必须在一抗孵育之前完成。

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