甲苯胺蓝

结构图

　　CAS: 3209-30-1

　　分子式: C28H20N2O10S2·2Na

　　中文名称: 甲苯胺蓝

　　2,2'-[(9,10-二氢-4,8-二羟基-9,10-二氧代-1,5-蒽二基)二亚氨基]双(5-甲基苯磺酸)二钠盐

　　英文名称: Toluidine bule

　　Benzenesulfonic acid, 2,2'-[(9,10-dihydro-4,8-dihydroxy-9,10-dioxo-1,5-anthracenediyl) diimino]bis(5-methyl-, disodium salt

　　Dimethyl toluth ionine, chloride

　　甲苯胺蓝是常用的人工合成染料的一种,属于醌亚胺染料类,这类染料一般含有两个发色团,一个是胺基,一个是醌型苯环,来构成色原显色。染料除有发色团外,还要有能使色原对组织及其他被染物产生亲和力的原子团即助色。助色团能促使染料产生电离成盐类,帮助发色团对组织产生染色力, 使切片上的组织细胞着色。甲苯胺蓝不仅含有两个发色团,还含有两个助色团,为碱性染料,甲苯胺蓝中的阳离子有染色作用,组织细胞的酸性物质与其中的阳离子相结合而被染色。可染细胞核使之呈蓝色；肥大细胞胞质内含有肝素和组织胺等异色性物质遇到甲苯胺蓝可呈异染性紫红色，可用于xxxx的初筛及肥大细胞的检测，例如色素性荨麻疹

　　染色方法:

　　(一)1.甲苯胺蓝液

　　甲苯胺蓝0.5g 蒸馏水定容至100ml

　　2.冰醋酸液

　　冰醋酸0.5ml蒸馏水定容至100ml

　　染色步骤

　　1.组织切片常规脱蜡至水

　　2.入甲苯胺蓝液30min

　　3.稍水洗

　　4.入冰醋酸液分化，直到胞核和颗粒清晰。

　　5.稍水洗，用冷风吹干

　　6.二甲苯透明，中性树胶封固

　　(二)

　　①切片脱腊至水。

　　②蒸馏水浸洗3次。

　　③0.1%甲苯胺蓝液浸染10min。

　　④水洗，洗去多余染液。

　　⑤各级酒精脱水。

　　⑥二甲苯透明，中性树胶封固。

　　结果：在胃粘膜腺上皮表面，腺腔内均可见到幽并肩战斗让螺杆菌（HP），有的呈弯曲杆状或逗点状，HP可散在出现，也可成团聚集出现，这要根据不同病例而异。

　　试剂的配制：称取0.1g甲苯胺蓝，溶于100ml 0.1M醋酸盐缓冲液中，置室温5天后，即可使用染液于室温下可保存3个月，若放于4℃冰箱则可保存半年左右，但该液的染色效果在早期为{zj0}，若染液存放时间较长，则染色偏淡，应适应延长染色时间。

试剂：
甲苯胺蓝
原液：
甲苯胺蓝Toluidine Blue O   1.0 gm
70%酒精 alcohol       100.0 ml
混合溶解，保存期6个月。
警告：避免接触和吸入。
工作液：
甲苯胺蓝Toluidine blue, Stock 5.0 ml
1%氯化钠Sodium chloride   45.0 ml
新鲜配制，用后丢弃。
1%氯化钠：
氯化钠Sodium chloride 0.5 gm
蒸馏水Distilled water 50.0 ml
新鲜配制。

程序：
1. 脱蜡至蒸馏水。
2. 甲苯胺蓝工作液1-2 minutes。
3.蒸馏水稍洗×3。
4. 快速95%和无水乙醇脱水。
5. 二甲苯透明和封固。
结果：
肥大细胞紫红色
背景蓝色

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①常规HE染色，显示肠钻膜上皮内淋巴细胞等。

②甲苯胺蓝染色法。选用改良甲苯胺蓝M(TB)染色法，显示肥大细胞。

染液配制:

A液:甲苯胺蓝0.8克溶于80毫升蒸馏水中;

B液:高锰酸钾0.6克溶于20毫升蒸馏水中;

将己溶解的A液煮沸10分钟，再将已溶解的B液逐滴加入A液中，再煮沸

(使甲苯胺蓝充分氧化)，用蒸馏水补足至100毫升，待自然冷却后过滤备用。一

期为2周。

染色步骤:

1)石蜡切片常规脱蜡至蒸馏水;

2)切片从水中取出，投入染液中放置30秒;

3)蒸馏水洗两次;

4)95%酒精分色，在镜下观察控制;

5)一00%酒精脱水;

6)二甲苯透明，中性树胶封片

7)染色结果:肥大细胞胞浆可见紫红色颗粒。

③以S染色法，显示杯状细胞等。PAS法(糖原及多糖高碘酸一Shcffi氏剂显

是显示组织细胞内的糖原、粘多糖和糖蛋白等，主要利用高碘酸的氧化作用，使单

有乙醇键的-CC键打开，氧化为二醛基，这种新生的醛基能与Shcffi氏剂结合成

紫红色物质，即PAS阳性反应。

卡诺氏液

　　卡诺氏固定液(Carnoy's Fluid) 适用于一般植物组织和细胞的固定,常用于根尖,花药压片及子房石蜡切片等.有极快的渗透力,根尖材料固定15—20min即可,花药则需1h左右,此液固定最多不超过24h,固定后用95%酒精冲洗至不含冰醋酸为止;如果材料不马上用,需转入70%酒精中保存.固定液的重要特性是能迅速穿透细胞，将其固定并维持染色体结构的完整性，还要能够增强染色体的嗜碱性，达到优良染色效果。

　　配方:无水酒精3份:冰醋酸1份

　　或无水乙醇6份，氯仿3份，冰醋酸1份。

PAS染色试剂的制备:

1)5%高碘酸水液:高碘酸.05克，蒸馏水loonll。

2)Schiff氏剂:碱性复红.02克，研磨后加蒸馏水ioonu，加热溶解，过滤冷却

℃加1NHCL10毫升，再冷却至25℃，加入重亚硫酸钠.05克，充分摇匀置低

直至溶液呈透明无色后方能使用。

3)亚硫酸水:偏重亚硫酸钠.25克，蒸馏水25d，INHCL25而，蒸馏水45

勺复染液:E恤lihc氏苏木精或1%甲基绿。苏木素染色液将.209苏木素溶于

95%乙醇中配成甲液，将.209硫酸铝钾溶于looml蒸馏水中配成乙液，将上述2种

合后，加入loonli冰醋酸，混匀，置于广口瓶中，用纱布包好瓶口，置空气中氧化

呈现暗紫色。

PAS法染色程序:

国农业大学硕士学位论文第三章丁酸钠对断奶仔猪肠道勃膜免疫相关细胆夔量分剑

)l切片脱蜡下行入蒸馏水;

2)入.05%一1%高碘酸水液氧化5分钟;

3)蒸馏水速洗一次;

4）Schiff氏剂染色30一60分钟，此步应37℃温箱中进行，瓶盖必须密封;

5)经Shcffi氏剂后，以亚硫酸水洗2一3次，每次约30秒至1分钟;

6）蒸馏水速洗二次;

7)苏木精复染胞核;

8)苏木精复染色后，经.05%盐酸酒精溶液分色(5一10秒钟)，以镜检为准，

来水蓝化;

9)经95%酒精及无水酒精脱水(各1一2分钟)，二甲苯透明;

10)中性树胶封片。

n)染色结果:糖原颗粒紫红色，糖蛋白粉红色，粘蛋白和粘多糖呈红色。

对照染色步骤:

1)切片脱蜡下行入蒸馏水。

2)经醋酸醉与毗睫混合液处理3~5分钟(配法:醋酸配13.sml十毗陡20ml)

液或淀粉酶消化处理作对照实验。

3)经自来水洗2一3分钟，入蒸馏水1一2分钟。

4)切片再按上述PAS法染色。