荧光产生的原理

荧光的定义：某些物质受紫外光或可见光照射激发后能发射出比激发光波长较长的光。

荧光产生的原理：化学物质能从外界吸收并储存能量（如光能、化学能等）而进入激发态，当其从激发态再回复到基态时，过剩的能量可以电磁辐射的形式放射（即发光）。

荧光化合物的两种特征光谱

1.        荧光激发光谱，就是通过测量荧光体的发光通量随波长变化而获得的光谱，它反映了不同波长激发光引起荧光的相对效率。

2.      荧光发射光谱，如使激发光的波长和强度保持不变，而让荧光物质所产生  的荧光通过发射单色器后照射于检测器上，扫描发射单色器并检测各种波长下相应的荧光强度，然后通过记录仪记录荧光强度对发射波长的关系曲线，所得到的谱图称为荧光光谱。

物质的激发光谱和荧光发射光谱，可以用作该物质的定性分析。当激发光强度、波长、所用溶剂及温度等条件固定时，物质在一定浓度范围内，其发射光强度与溶液中该物质的浓度成正比关系，可以用作定量分析。

荧光分析法的灵敏度一般较紫外分光光度法或比色法为高，浓度太大的溶液会有“自熄灭”作用，以及由于在液面附近溶液会吸收激发光，使发射光强度下降，导致发射光强度与浓度不成正比，故荧光分析法应在低浓度溶液中进行。

荧光发射的特点：可产生荧光的分子或原子在接受能量后即刻引起发光；而一旦停止供能，发光（荧光）现象也随之在瞬间内消失。

溶液荧光光谱通常具有的特征：

（1)     斯托克斯位移：在溶液荧光光谱中，所观察到的荧光的波长总是大于激发光的波长。

（2)     荧光发射光谱的形状与激发波长无关。

（3)     荧光发射光谱的形成与吸收光谱的形状有镜像关系

荧光的猝灭：荧光分子的辐射能力在受到激发光较长时间的照射后会减弱甚至猝灭 ，这是由于激发态分子的电子不能回复到基态，所吸收的能量无法以荧光的形式发射。一些化合物有xx的荧光猝灭作用而被用作猝灭剂，以xx不需用的荧光。因此荧光物质的保存应注意避免光（特别是紫外光）的直接照射和与其他化合物的接触。

荧光效率：荧光分子不会将全部吸收的光能都转变成荧光，总或多或少地以其他形式释放。荧光效率是指荧光分子将吸收的光能转变成荧光的百分率，与发射荧光光量子的数值成正比。

荧光效率＝发射荧光的光量分子数（荧光强度）／吸收光的光量子数（激发光强度）

发射荧光的光量子数亦即荧光强度，除受激发光强度影响外，也与激发光的波长有关。各个荧光分子有其特定的吸收光谱和发射光谱（荧光光谱），即在某一特定波长处有{zd0}吸收峰和{zd0}发射峰。选择激发光波长量接近于荧光分子的{zd0}吸收峰波长，且测定光波量接近于{zd0}发射光波峰时，得到的荧光强度也{zd0}。

任何荧光都具有两种特征光谱：激发光谱与发射光谱。它们是荧光定性分析的基础。

1）激发光谱

    改变激发波长，测量在最强荧光发射波长处的强度变化，以激发波长对荧光强度作图可得到激发光谱。

    激发光谱形状与吸收光谱形状xx相似，经校正后二者xx相同！这是因为分子吸收光能的过程就是分子的激发过程。

    激发光谱可用于鉴别荧光物质；在定量时，用于选择最适宜的激发波长。

2）发射光谱

    发射光谱即荧光光谱。一定波长和强度的激发波长辐照荧光物质，产生不同波长的强度的荧光，以荧光强度对其波长作图可得荧光发射光谱。

    由于不同物质具不同的特征发射峰，因而使用荧光发射光谱可用于鉴别荧光物质。