2010-05-15 14:50:21 阅读8 评论0 字号:大中小
酶标仪:即酶联免疫检测仪(ELISA Reader)是酶联免疫吸附试验的专用仪器。可简单地分为半自动和全自动2大类,但其工作原理基本上都是一致的,其核心都是一个比色计,即用比色法来分析抗原或抗体的含量。ELISA测定一般要求测试液的最终体积在250ul以下,用一般光电比色计无法完成测试,因此对酶标仪中的光电比色计有特殊要求。
操作流程:
1. 先启动电脑,再打开酶标仪器,仪器开始自检。
2. 使用桌面的软件快捷方式或从“开始”程序栏打开软件KCjunior。
3. 根据自己实验的需要在弹出主程序界面选择相应的程序,一般在读板之前先根据自己的需要创建一个新的实验方案,选择“新建实验方案” ,也可以打开以前的实验方案,选择“打开实验方案” 进行读板,如有必要也可以对以前的实验方案进行修改,选择“修改实验方案” ,然后再读板。一般软件启动时自动加载上次使用的实验方案,所以也可以直接选择“读板” 读板。查看以前的结果,选择“打开结果”打开相应的结果。
4. 选择“新建实验方案”命令,在弹出的方案定义对话框里输入实验方案名称和描述,其他保持默认。
5. 点击“读板方法” ,在随后的弹出界面选择读板的方法,End point、Kinetic、Multiwavelength、Spectral Scan(有些读板的方法需要仪器支持,不同的仪器具有不同的功能)。在读板参数中选择:光吸收、荧光、或者化学发光.
6. 选择测量波长和参考波长,(一般酶标试剂盒上有注明)。
7. 选择读板范围、是否震板、震板强度、是否温浴、温浴温度、读板速度等参数(某些功能需仪器支持)。动力学读板还需要设定读板间隔或者读板次数。
8. 如选择选择荧光或化学发光还需要设定读板的灵敏度,使用上探头或者下探头(需仪器支持)。选择化学发光时,要注意在激发光率光轮位置上选择“Plug”遮住杂散光的影响(注意在虑光轮上安装plug),也可以不使用plug。
9. 在做核酸蛋白定量分析时,一定要使用UV板,选择光程校正,软件会自动把吸光值校正到光程为1cm时的吸光值,在进行定量。
10. 选择模板,设置酶标板的样本排布。根据实验需要和个人习惯,以次放置空白、标准样本、样本对照、待测量样本。分配标准样本浓度以及样本的稀释关系,编辑运算公式等。
11. 选择曲线,定义曲线类型和相关信息。
12. 选择阈值,输入相应的阈值和对应的标记符号。
13. 选择报告,输入报告名称、显示内容等。
14. 保存当前实验方案,准备读板。
15. 查看读板结果,并保存结果,也可将数据导入Excel进行数据处理。
16. 取出酶标板,关闭软件,关闭仪器。
注意事项:
1、工作环境
酶标仪是一种精密的光学仪器,因此良好的工作环境不仅能确保其准确性和稳定性,还能够延长其使用寿命。根据DIN VDE 0871条例,仪器应放置在无磁场和干扰电压的位置。依据DIN 45 635 -19条例:
仪器应放置在低于40分贝的环境下。
为延缓光学部件的老化,应避免阳光直射。
操作时环境温度应在15℃-40℃之间,环境湿度在15%-85%之间。
操作电压应保持稳定。
操作环境空气清洁,避免水汽,烟尘。
保持干燥、干净、水平的工作台面,以及足够的操作空间。
2、操作注意事项
酶标仪的功能是用来读取酶联免疫试剂盒的反应结果,因此要得到准确结果,试剂盒的使用必须规范。许多医院在使用酶标仪之前是通过目测判断结果,操作过程随意性较大,在使用酶标仪后如果不能及时纠正操作习惯,会造成较大误差。在酶标仪的操作中应注意以下事项:
使用加液器加液,加液头不能混用。
洗板要洗干净。如果条件允许,使用洗板机洗板,避免交叉污染。
严格按照试剂盒的说明书操作,反应时间准确。
在测量过程中,请勿碰酶标板,以防酶标板传送时挤伤操作人员的手。
请勿将样品或试剂洒到仪器表面或内部,操作完成后请洗手。
如果使用的样品或试剂具有污染性、毒性和生物学危害,请严格按照试
剂盒的操作说明,以防对操作人员造成损害。
如果仪器接触过污染性或传染性物品,请进行清洗和xx。
不要在测量过程中关闭电源。
对于因试剂盒问题造成的测量结果的偏差,应根据实际情况及时修改参数,以达到{zj0}效果。
使用后盖好防尘罩。
出现技术故障时应及时与厂家联系,切勿擅自拆卸酶标仪。
3、阈值可疑范围的设定
一般酶标仪阈值矩阵设定可设定阴性、可疑、阳性3个范围。有经验表明可疑范围的设定要设定为临界上下15%(也称灰色区)为宜;同时阴性范围下限和阳性范围应该充分考虑到影响ELISA结果因素的存在,可疑范围上限必须考虑到双波长情况下出现负吸光度值和超范围报告影响结果的可能性。“灰色区”的结果的真实性是ELISA定性测定中最需要把握的环节,也是实验室引起医疗纠纷的主要方面,因此必须对可疑结果进行复检,{zh0}用两种试剂盒。
4、样本名字文件设定
由于部分试验的所测样本不一定是连续,样本命名显得尤为重要。同时应做到样本名字文件与吸光度值文件保持一致,这样若以后再调出吸光度文件时,样本名字文件可自动同时调出;若大批量样本时应对不同微孔板编号区别(以文件后缀形式)。
5、样板程序文件设定
一个实验室同一试验可能使用不同厂家试剂盒,但不同试剂盒规定的设定对照数量、阈值判定标准等均可能不一致,酶标仪所设样板程序也不一致。为了使用方便,可在样板程序文件中用后缀加以区别。
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