[学习目的] 1、学习蛙类动物单毁髓与双毁髓的方法。 2、学习并掌握蛙类（蟾蜍）坐骨神经—腓肠肌标本的制备方法 [动物与器材] 蛙或蟾蜍、常用手术器械（手术剪、手术镊、手术刀、金冠剪、眼科剪、眼科镊、毁髓针和玻璃分针）、蜡盘、蛙板（木质或硬泡沫塑料）、固定针、锌铜弓、培养皿或不锈钢盘、滴管、纱布、粗棉线、任氏液。 [方法与步骤] 1、蛙或蟾蜍的单毁髓与双毁髓 一手握住蛙或蟾蜍（可用纱布包裹蟾蜍躯干部），背部向上。用拇指压住蛙或蟾蜍的背部，食指按压其头部前端，使头端向下低
另一手持毁髓针，有两眼之间沿中线向后触划，当触及到两耳间的凹陷处（此处与两眼的连线成等边三角形）时，持针手即感觉针尖下陷，此处即是枕骨大孔的位置。将毁髓针由凹陷处垂直刺入，即可进入枕骨大孔。然后将针尖向前刺入颅腔，在颅腔内搅动，以捣毁脑组织。如毁髓针确在颅腔内，实验者可感到针尖触及颅骨。此时的动物为单毁髓动物。在将毁髓针退至枕骨大孔，针尖转向后方，与脊柱平行刺入椎管，以捣毁脊髓。
彻底捣毁脊髓时，可看到动物的后肢突然蹬直，然后瘫软如棉，此时的动物为双毁髓动物。
如动物仍表现四肢肌肉紧张或活动自如，必须重新毁髓。操作过程中应注意使蟾蜍头部向外侧（不要挤压耳后腺），防止耳后腺分泌物射入实验者眼内（如被射入，则需立即用生理盐水冲洗眼睛）。 2、坐骨神经—腓肠肌标本制备 （1）剥制后肢标本 如果动物个体较大，可将双毁髓的动物腹面向上放入蜡盘中。一手持手术镊轻轻提起耻骨联合上方的皮肤，另一手用手术剪横向剪开皮肤，再剪开体壁肌肉（开口要大）。 然后用手术镊轻轻提起内脏，自耻骨部剪断（勿损伤脊神经）。一手轻轻托起蟾蜍后肢，使头部及内脏向下，看清支配后肢的脊神经发出部位，于其前方用金冠剪横向剪断脊柱。 然后再沿脊柱两侧到横向切口剪断体壁，一手用蘸有任氏液的拇指和食指捏住断开的脊柱后端，另一只手向后撕剥皮肤并除去断开脊柱以上部位肢体及内脏。
如果下肢撕皮困难，可在撕皮至股部时，用手勾住双股中间后再行撕剥。将剥干净的后肢放入任氏液中备用。清洗手及用过的手术器械。 （2）分离两后肢 将去皮的后肢腹面向上置于蛙板上，脊柱端在左侧，用左手拇指和食指固定标本的股部两侧肌肉，右手持手术刀，于耻骨联合体处向下按压刀刃，切开耻骨联合。然后用手托起标本，用金冠剪剪开两后肢相连的肌肉组织，并纵向剪开脊柱（尾杆骨留在一侧），使两后肢xx分离。将分开的后肢，一只继续剥制标本，另一只放入任氏液中备用。
（3）分离坐骨神经
将一侧后肢的脊柱端腹面向上，耻端向外侧翻转，使其足底向上，用固定针将标本固定在蛙板上。用玻璃分针沿脊神经向后分离坐骨神经（图）。
股部沿腓肠肌正前方的股二头肌和半膜肌之间的肌缝，找出坐骨神经。 坐骨神经基部（即与脊神经相接的部位），背部有一梨状肌盖住神经，用玻璃分针轻轻挑起肌肉，便可看清下面穿行的坐骨神经。 剪断（或用玻璃分针扯断）梨状肌，xx暴露坐骨神经与其相连的脊神经。在用玻璃分针轻轻挑起神经，自前向后剪去支配腓肠肌之外的神经分支，将坐骨神经分离至腘窝处。 取下脊柱端的固定针，保留神经发出部位的一小块脊柱骨，用金冠剪剪去其余部分脊柱骨及肌肉。再用手术镊轻轻提起连有神经的脊柱骨片，将神经移开股骨。
（4）游离腓肠肌 一手捏住耻端，另一手用手术镊（尖头镊）在腓肠肌跟腱下面穿线，
并用结线扎紧。 提起结线
游离腓肠肌。 （5）分离股骨头或胫腓骨头 如果所用动物个体小，可分离股骨头。方法是：一手捏住股骨，沿膝关节剪去股骨周围的肌肉，再用金冠剪自膝关节向前刮干净股骨上的肌肉，
保留1cm股骨头并剪断股骨。提起腓肠肌上的扎线，
剪去膝关节下部的后肢，仅保留腓肠肌与股骨的联系。 如果所用动物个体大，可分离胫腓骨头。此方法简便而易于操作。即在分离出腓肠肌的基础上，移开腓肠肌，用金冠剪剪去胫腓骨上的肌肉，自膝关节以下保留1cm长的胫腓骨并剪断后肢，然后自膝关节剪断股骨。
制备完整的坐骨神经—腓肠肌标本应包括：连有坐骨神经的脊柱骨、坐骨神经、腓肠肌、股骨头或胫腓骨头四部分. （6） 检验标本 用手术镊轻轻提起标本的脊柱骨片，使神经离开玻璃板。再用将任氏液蘸湿的锌铜弓，将其两级接触神经如腓肠肌发生迅速收缩，则表示标本机能正常。 提起腓肠肌上的扎线，不使神经受到牵拉，轻轻将标本放入任氏液中保存。稳定15～20min后即可进行实验。此标本可以用于神经感兴奋的传导、神经—肌肉接点的传递以及骨骼肌的收缩等实验研究。 注意：制备标本过程中需经常用任氏液湿润标本。 3、骨骼肌标本制备 （1）取蛙或蟾蜍双毁髓（方法同1） （2） 用手术剪环切皮肤并将后肢剥皮，剪断膝关节以上的股骨。在腓肠肌肌腱上穿线并结扎，游离腓肠肌（方法同前）。剪去胫腓骨上附着的肌肉后，自膝关节以下1cm处剪断肢骨。完整的腓肠肌标本应包括腓肠肌、胫腓骨头（如果动物个体小，可分离股骨头代替胫腓骨）。 资料出处 更多实验 |
