【目的】 掌握尿液检查干化学试带的反应原理和使用注意事项. 【原理】 1.试带构成 在长条形塑料片上每隔一定距离(约2mm)有一正方形试剂模块(5mm*5mm),其中有两块集中在试纸条一端,分别是空白模块尿液颜色参比模块,可作为对照使用;其余模块分别含有相应干式化学试剂(图5-25).试剂中的碘酸盐可破坏VitC等还原性物质,xxVitC中的碘酸盐可破坏Vit C等还原性物质,xxVitC对其他反应的干扰;若不含碘酸盐,试纸条将增加Vit C检测模块,以便对Vit C干扰项目的质控和校正.
2.检测项目 尿液的酸碱度(pH)、比密(SG)、蛋白质(PRO)、葡萄糖(GLU)、酮体(KET)、胆红素(BIL)、尿胆原(URO)、 亚硝酸盐(NIT)、白细胞(LEU/WBC)、红细胞(RBC/ERY)或隐血(Hb)、维生素C(Vit C),一个或多个检测内容可组成不同的组合. 3.试带反应原理 ⑴酸碱度(pH):采用pH指示剂法.用甲基红(pH4.6~6.2)和溴麝香草酚蓝(pH6.0~7.8)两种指示剂适量组合成为复合pH试剂模块,其呈色范围为pH4.5~9.0,颜色发生橙红、黄绿及蓝色变化.
⑵比密(SG):采用离子交换pH指示剂法.尿液中电解质释放出的阳离子与试带中的离子交换体中的H+交换,释放出的H+与酸碱指示剂反应,根据指示剂显示的颜色(蓝、绿及黄)可换算尿液中的电解质浓度,以电解质浓度来代表密度,从而得出比密值. ⑶尿蛋白(PRO):采用 pH指示剂蛋白误差法.试剂模块中主要含有酸碱指示剂溴酚蓝、枸橼酸缓冲系统和表面活性剂.在pH3.2时,溴酚蓝电离、带负电荷并释放H+,带负电荷的溴酚蓝与此时带正电荷的蛋白质(白蛋白)生成复合物,导致溴酚蓝进一步电离产生更多的H+,当超过缓冲范围时,指示剂发生颜色改变(黄、绿及蓝),变色程度与蛋白质含量成正比.
⑷尿葡萄糖(GLU):采用葡萄糖氧化酶法.尿液中葡萄糖在试带中葡萄糖氧化酶的催化下,生成葡萄糖酸内酯和过氧化氢.在有过氧化物酶的情况下,以过氧化氢为电子受体使色素原(邻甲联苯胺、碘化钾等)氧化而呈色.色素原不同,呈色可为蓝色、红褐色或红色. ⑸尿酮体(KET):采用亚硝基铁氰化钠法.检测尿酮体的模块中主要含有亚硝基铁氰化钠,可与尿液中的乙酰乙酸、丙酮产生紫色反应.其对乙酰乙酸的敏感性为50~100mg/L,对丙酮为400~700mg/L,不与β-羟丁酸起反应.
⑹尿亚硝酸盐(NIT):采用偶氮法.尿液中含有来自食物或蛋白质代谢产生的硝酸盐,如尿液中含有大肠埃希菌等具硝酸盐还原酶的xx时,可将硝酸盐还原为亚硝酸盐,亚硝酸盐与芳香胺的重氮化反应形成重氮盐,随后发生偶联反应,形成红色重氮色素. ⑺尿胆红素(BIL):采用偶氮法.在强酸性介质中,胆红素与试带上的二氯苯胺重氮盐起偶联作用,生成红色偶氮化合物.
⑻尿胆原(URO):采用①醛化反应法:在强酸条件下尿胆原和对-二甲氨基苯甲醛发生醛化反应,生成樱红色缩合物.②偶氮法:在强酸条件下尿胆原和对-四氧基苯重氮四氟化硼发生重氮盐偶联反应,生成胭脂红色化合物. ⑼尿白细胞(LEU):采用中性粒细胞酯酶法.中性粒细胞的酯酶能水解吲哚酚酯生成吲哚酚和有机酸,吲哚酚可进一步氧化形成靛蓝,或吲哚酚和重氮盐反应生成紫色重氮色素.
⑽尿红细胞(RBC)或血红蛋白(Hb):采用过氧化物酶法.血红蛋白中亚铁血红素具有弱的过氧化物酶样作用,以催化H2O2作为电子受体使色原(常用的有邻联甲苯胺、氨基比林、联苯胺等)氧化呈蓝绿色,其颜色的深浅与血红蛋白成正比. ⑾尿维生素C(VitC):采用还原法.试剂模块中含有2,6-二氯酚靛酚钠、中性红、亚甲基绿磷酸二氢钠和磷酸氢二钠,维生素C能还原氧化型染料,而使指示剂发生由绿或深蓝至粉红色的颜色变化,颜色的深浅与VitC含量成正比.也有采用VitC和作为色素原的磷钼酸反应,形成钼蓝的原理.
【操作】 1.混匀尿液 2.浸湿试带 3.沥去多余尿液 4.比色与分析 5.报告方式
【注意事项】 1.熟悉试带特性 必须了解所用试带各膜块反应原 理、xx干扰以及参考范围等,掌握试带检测每一成分的敏感度和特异性.很多中间环节和干扰因素都可影响颜色变化而导致假阳性或假阴性.同一检测项目,不同厂家所用的色素原可能不同,因此存在显色差别 2.注意试带保存条件 尿试带应根据厂家推荐的条 件(如温度、暗处等)保存,在有效期内使用.不应将试带放在直射光下照射或暴露在潮湿环境中,应保存在厂商提供的容器中,不可更换保存容器.
3.规范操作 (1)试带从冷藏冰箱中拿出后,待平衡至室温再打开盛装的筒盖.一次只取所需要量的试带,并应立即将瓶盖盖好.多余试带不得放回原容器中,更不应该合并各瓶的试带. (2)试带与尿液的反应时间需严格遵循产品说明书的规定,操作中注意切勿触摸试带上的反应检测模块. (3)试带浸入尿液标本的时间应在1~2s,所有试剂模块,包括空白和参比模块,要全部渗入尿液中,试带上过多的尿液标本应去除干净.
4.结果分析 (1)尿液干化学测定结果与传统湿化学法存在差异. (2)必要时,试带法干化学检测尿液结果应做确证试验. (3)尿液干化学试带检查仅是一个过筛手段,适用于健康普查和疾病筛选,不能xx替代尿液有形成分显微镜检查,特别是蛋白质、白细胞、红细胞、亚硝酸盐中任一项阳性,必须进行人工镜检. (4)尿液干化学测试结果应与理学、显微镜检查结果相结合,互相印证才能为临床提供有价值的信息.
(5)肾移植病人发生免疫排斥时尿液中出现大量淋巴细胞,但由于其胞质无中性粒细胞酯酶,干化学试带法检测白细胞阴性. (6)白细胞检测时出现干化学试带法"阳性"而镜检"阴性"的结果,可能与尿液在膀胱贮存时间过长、中性粒细胞中被破坏后其酯酶释放到尿液中有关.红细胞出现此类结果可能是因为红细胞在尿液中被破坏,无完整红细胞(血红蛋白释放),或尿液中含高活性不耐热的触酶.对于后者,可将尿液煮沸冷却后再测试,验证和排除"假阳性"结果.
