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　　　　已处分 若何用液相谱仪检测葡萄酒素
　　
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　　　　想要整体的实验方~~
　　
　　　　发问者： soslemon - 二级
　　
　　　　{zj0}答案HPLC用水起原1 特地的纯水机或超纯水机；2 去离子水重蒸；3 二次或三次重蒸水；4 采用肖似家用的纯水机；5 市场上瓶装的纯洁水或蒸馏水；6 其它道路以上的水除第1项的水能用于梯度淋洗外，其它的水均难用于梯度淋洗。不论采用何种道路，配制动相应用奇怪水，水质越高放置时光越短。逸想的HPLC用水应为18.2MΩ的超纯水，并始末0.22um的滤膜，除去热源、无机物、无机离子及气氛等。最小检测限的计算方（以N2000谱做事站为例）CL=2*Nd*c*20/HV注：Nd 基线噪声，单位：mVc 样品浓度H 峰高，单位：mV（或AU）V 进样体积例：如基线噪声为20微伏即0.02mV，萘的甲醇标样溶液浓度为0.0001g/L，峰高145000微伏即145mV，进样体积为20微升，即得：CL=2*0.02*0.0001*20/145*20=2.76e-8即10的负8次方对仪器举办维护时应当遵循的几条根本规则1. 一次规则当编制出了毛病，可能摸爽地更改某些形态，一次可能更改一个参数。例如，限制谱峰维的题目，可能顺序更改动相，换守卫柱，换领悟柱等。做一些简单的更改步骤，也许就能处分题目。2. 二次对照规则在发轫检修之前已经清爽了毛病所在，恐怕已经断定了处分毛病的计划。换句话说，发轫之前已经找对了处分格式。例如，在进样经过中觉察内标物的峰值变低了，可能反复进样看看反复如何，假若是有时变低，能否是定量管里进了气泡。这个规则可用于考查编制更改后的形。转换了流意向后在正式进样前可能进两次准绳品以检讨保存时光的安定形和谱峰的安定。在梯度洗中假若出现了多余的峰，可能空载梯度洗一次（真的有题目吗？），用此规则可能防止不用要的更改，尽快断定更改措施。3. 取代规则用好的部件换下可疑的部件，是查找毛病的{zh0}方。假若可疑检测器惹起了乐音，就换{yt}本能机能好的检测器。假若毛病被袪除了，就说明换下的检测器有题目。这个规则应用的规模有大有小，可能从换整个部件到换印刷线路板上的集块。4. 换回规则这个规则和取代规则沿路运用，好部件取代了可疑部件后形并未取得改善，应重新换上原部件。这样做的维修费用最小，也防止了用过的部件积压上去。这条规则仅适用于繁多的毛病。换回例不适用于以下的形：（1） 在取下时新部件已损害（如泵密封垫圈）；（2） 部件代价低（如柱内衬过滤片）；（3） 重新装上原部件要冒损害的风险；（4） 按期转换的部件。5. 参考条件规则通常有两种参考条件：①准绳参考条件；②试验参考条件。准绳参考条件也叫准绳试验条件，是从一个编制到另一个编制，从一个实验室到另一个实验室都易于考证的条件。用该条件所测得的数据有助于判别现实试验和编制间的题目。假若在某试验条件下编制压力降低，而在准绳条件下压力一般。这说明编制异常是由实验室的变化所惹起的。下表枚举了启用新谱柱是的准绳试验条件，在利用经过中也可用此准绳试验条件检讨编制的形。动相 甲醇/水（体积比=70/30）谱柱 C18反相 流速 1mL/min检测器 UV 254nm样品 尿嘧啶（用于t0）苯酚，苯乙酮，硝基苯，苯甲醚，甲苯动相 正己烷/异丙醇（体积比=75/25）谱柱 腈基极键合相 流速 1mL/min检测器 UV 254nm样品 硝基苯，苄醇，2,4-二硝基甲苯，对硝基苄醇动相 正己烷/二氯甲烷/异丙醇胺（体积比=95/4/1）谱柱 硅胶正相 流速 1mL/min检测器 UV 254nm样品 2-苯-2-丙醇，甲苄醇，肉桂醇试验参考条件是用于检讨一般编制每天的做事形。要选最便利的方考证这种条件。每天可能打印两张校正用谱图作对照，检讨保存时光、峰宽、编制压力等方面的变化。觉察峰的斜率、谱柱塔板数和其他参数与从来谱图相比有了变化，说明编制在运转中可能发生了题目。当然发生题目不团结壮际领悟程序探究，只始末查找准绳参考谱图是不能有目共睹的。6. 记实规则这条规则每每被蔑视。应当在每次维护和毛病袪除后都作记实。例如，对编制的某一特定毛病由于没作记实就不可能编制地领悟题目，费时又费力。从悠久挂点看，编制发生的特定毛病对今后的作也有极端重要的意义。每台仪器都应备有维修记实本，形式包括期、毛病部位、现象、发作的原因、处分的格式和结果等。还有一点要贯注，试过或换下的部件都要贴上标志。做好维修颐养记实有如下好处：（1） 让所有的作员都知道发生了什么毛病，在作经过中以惹起贯注；（2） 赞作员形貌毛病现象；（3） 当再次发生毛病时可凭据原料尽快处分题目。7. 预测规则有维修试验和颐养风气的员应能够预测编制的毛病，平常在颐养方面多投入些时光，编制会以节减毛病作为报答，同时也xx了连锁的损害。例如，平常不贯注颐养，泵的密封垫圈坏了，变动相渗漏，会腐蚀泵和其它部件。擅长颐养能节俭时光和金钱，而不是仪器管制了作员。例如，每天开始做事或停止做事时觉察灯寿命惹起基线漂移就把灯换上去。假若等到灯全坏了，就须要停机，变的失掉可能比一个灯的费用还要高。8. 缓冲液规则这条规则提示停机时必定要洗净编制中的缓冲物。编制中的缓冲物的剩余会变磨损、腐蚀和阻碍。另外，生理缓冲液极易遭到xx和霉菌的影响。逸想的冲洗液是不含缓冲物的相同组的动相。不要让纯水蕴藏于编制中，以防生长xx。可在水中列入10%的无机溶剂或0.02~0.05%的xxxx。在实验室中应按如下程序冲洗：用纯水冲洗30~60min(1mL/min)再用甲醇冲洗30min后关机。千万不能一开机就用无机溶剂冲洗，否则无机盐就` 会沉淀在编制中，变不良果。HPLC常维护格式之一：压力异常作压力的变化每每是毛病的征兆。从下表中找出所观察到的现象，并在右侧的列表中参考相应的处分方。A、 没有压力显示，没有动相动原 因 处分方1Q、电源题目 1A、接通电源，开机2Q、安全丝被烧坏 2A、转换安全丝3Q、管制器设定不无误或设定腐烂 3A、a、采取妥?的设定 b、补葺或转换管制器4Q、柱塞杆折断 4A、转换柱塞杆5Q、泵头内有气氛 5A、溶剂气、发动泵抽出气氛6Q、动相不敷 6A、a、补充动相b、转换入口滤头7Q、单向阀损害 7A、转换单向阀8Q、漏液 8A、拧紧或转换手紧接头B、 动相动一般，但没有压力显示原 因 处分方1Q、仪表损害 1A、转换仪表2Q、压力传感器损害 2A、转换压力传感器C、 压力持续偏高原 因 处分方1、流速设定过高 1、调整流速设定2、柱前筛板梗塞 2、a、在承诺形下反冲谱柱 b、转换筛板c、转换谱柱3、动相利用不当或缓冲盐的结晶沉淀 3、a、利用妥?的动相b、冲洗谱柱4、谱柱选拔不当 4、选拔妥?的谱柱5、进样阀损害 5、清洗或转换进样阀6、柱温过低 6、进步温度7、管制器 7、补葺或转换管制器8、守卫柱阻碍 8、清洗或转换守卫柱9、在线过滤器阻碍 9、清洗或转换在线过滤器D、 压力持续偏低原 因 处分方1、流速设定过低 1、调整流速2、编制漏液 2、断定漏液职位地方并维修3、谱柱选拔不当 3、选拔妥?的谱柱4、柱温过高 4、降高温度5、管制器 5、维修或转换管制器E、 压力赓续高涨原 因 处分方1、见列表C 1、见列表CF、 压力降为零原 因 处分方1、见列表A、B 1、见列表A、BG、 压力赓续下降，但不回零原 因 处分方1、见列表D 1、见列表DH、 压力震动原 因 处分方1、泵中有气体 1、a、溶剂气b、从泵中除去气体2、单向阀损害 2、转换单向阀3、泵密封损害 3、转换泵密封4、气不充斥 4、a、溶剂气b、更改气方（利用在线气等）5、编制漏液 5、断定漏液职位地方并维修6、利用梯度洗 6、由于动相粘度的变化惹起的压力震动HPLC常维护格式之二：漏液通常可能始末拧紧或转换管路接头来处分漏液的题目。但值得贯注的是过份拧紧会招致金属接头的漏液和塑料接头的磨损。假若始末略微拧紧接头不能处分漏液的题目，就必需将接头取下，检讨能否损害（例如，卡套损害、密封外表有杂质）；损害的接头应当转换掉。A、 接头处漏液原 因处分方1、接头松动1、拧紧2、接头磨损2、转换3、接头过紧3、a、拧松，再重新拧紧b、转换4、接头被净化4、a、拆下清洗b、转换5、部件不亲5、利用同一品牌的配件B、 泵漏液原 因处分方1、单向阀松动1、a、拧紧单向阀（不用拧的过紧）b、转换单向阀2、接头松动2、拧紧接头（不用拧的过紧）3、混合器密封损害3、a、转换混合器密封b、转换混合器4、泵密封损害4、维修或转换泵密封件5、压力传感器损害5、维修或转换压力传感器6、脉冲阻尼器损害6、转换脉冲阻尼器7、比例阀损害7、a、检讨隔阂，假若漏液随即转换b、检讨手紧接头，损害的随即转换8、放空阀的损害8、a、拧紧放空阀b、转换放空阀C、 进样阀漏液原 因处分方1、转子密封损害1、重新装置或转换进样阀2、定量环阻碍2、转换定量环3、进样口密封松动3、调整4、进样针头尺寸不适合4、利用妥?的进样针5、废液管中发作虹吸5、维系废液管高于废液液面6、废液管阻碍6、转换或疏浚废液管D、 谱柱漏液原 因处分方1、尾端接头松动1、拧紧接头2、卡套内有填料2、拆下、清洗卡套、重新装置3、筛板厚度不适合3、利用适合的筛板（参考下表）筛板选拔指导精神粒径筛板孔径3-4u0.5u5-20u2uE、 检测器漏液原 因处分方1、畅通流畅池垫片损害1、a、防止过大的背景压力（压力降）b、转换垫片2、畅通流畅池窗破碎2、转换窗口3、手紧接头漏液3、拧紧或转换4、废液管阻碍4、转换废液管5、畅通流畅池阻碍5、重新装置或转换HPLC常维护格式之三：谱图的各种题目液相谱编制的许多题目都能在谱图上反映进去。其中有一些题目可能始末更改建造参数取得处分；而其他的题目必需始末篡改作程序来处分。对付谱柱和动相的无误选拔是取得好的谱图的关键。A、 峰拖尾原 因处分方1、筛板阻碍1、a、反冲谱柱b、转换入口筛板c、转换谱柱2、谱柱陷落2、填充谱柱3、滋扰峰3、a、利用更长的谱柱b、更改动相或转换谱柱4、动相PH选拔过失4、调整PH值。对付碱化合物，低PH值更有益于取得对称峰5、样品与填料外表的熔化点发生反映图5、a、列入离子对试剂或碱挥发修饰剂b、更改谱柱B、 峰前延原 因处分方1、柱温低1、降低柱温2、样品溶剂选拔不妥?2、利用动相作为样品溶剂3、样品过载3、消沉样品含量4、谱柱损害4、见A1、A2C、 峰分叉原 因处分方1、 守卫柱或领悟柱净化图1、取下守卫柱再举办领悟。假若必要转换守卫柱。假若领悟柱阻碍，拆上去清洗。假若题目依然生，可能是柱子被强保存精神净化，运用适当的再生措施。假若题目依然生，入口可能被阻碍，转换筛板或转换谱柱。2、样品溶剂不溶于动相2、更改样品溶剂。假若可能采取动相作为样品溶剂。D、 峰变形原 因处分方1、样品过载1、节减样品载量E、 早出的峰变形原 因处分方1、样品溶剂选拔不妥?1、a、节减进样体积b、运用低极样品溶剂F、 早出的峰拖尾水平大于晚出的峰原 因处分方1、柱外效应1、a、调整编制连接（利用更短、内径更小的管路）b、利用小体积的畅通流畅池G、 K’增加时，尾更急急原 因处分方1、二级保存效应，反相形式1、a、列入三乙胺（或碱样品）b、列入乙酸（或酸样品）c、列入盐或缓冲剂（或离子化样品）d、转换一支柱子2、二级保存效应，正相形式2、a、列入三乙胺（或碱样品）b、列入乙酸（或酸样品）c、列入水（或多官能团化合物）d、试用另一种方3、二级保存效应，离子对3、列入三乙胺（或碱样品）H、 酸或碱化合物的峰拖尾原 因处分方1、缓冲不适合1、a、利用浓度50-100mM的缓冲液b、利用Pka等于动相PH值的缓冲液I、 特别的峰原 因处分方1、样品中有其他组份1、一般2、前一次进样的洗峰2、a、增加运转时光或梯度斜率b、进步流速3、空位或鬼峰3、a、检讨动相能否纯洁b、利用动相作为样品溶剂c、节减进样体积J、 保存时光震动原 因处分方1、温控不当1、调好柱温2、动相组分变化2、防止变化（蒸发、反映等）3、谱柱没有均衡3、在每一次运转之前予以足够的时光均衡谱柱K、 保存时光赓续变化原 因处分方1、流速变化1、重新设定流速2、泵中有气泡2、从泵中除去气泡3、动相选拔不妥?3、a、转换适合的动相b、选拔适合的混合动相L、 基线漂移原 因处分方1、柱温震动。（纵使是很小的温度变化都会惹起基线的震动。通常影响示差检测器、电导检测器、较低智慧度的紫外检测器或其它光电类检测器。）1、管制好柱子和动相的温度，在检测器之前利用热相易器图2、动相不平均。（动相条件变化惹起的基线漂移大于温度招致的漂移。）2、利用HPLC级的溶剂，高纯度的盐和增加剂。动相在利用前举办气，利用中利用氦气。3、畅通流畅池被净化或有气体3、用甲醇或其他强极溶剂冲洗畅通流畅池。如有须要，可能用1N的硝酸。（不要用盐酸）4、检测器入口阻碍。（高压变畅通流畅池窗口翻脸，发作乐音基线）4、取出阻碍物或转换管子。参考检测器手册转换畅通流畅池窗。5、动相配比不当或流速变化5、更改配比或流速。为防止这个题目可按期检讨动相组及流速。6、柱均衡慢，特别是动相发生变化时6、用中等强度的溶剂举办冲洗，更改动相时，在领悟前用10-20倍体积的新动{jd1}柱子举办冲洗。7、动相净化、蜕变或由低品德溶剂配7、检讨动相的组。利用高品德的化学试剂及HPLC级的溶剂8、样品中有强保存的精神（高K’值）以馒头峰样被洗出，从而发扬出一个渐渐降低的基线。8、利用守卫柱，如有必要，在进样之间或在领悟经过中，按期用强溶剂冲洗柱子。9、利用循环溶剂，但检测器未调整。9、重新设定基线。当检测器动力学边界发生变化时，利用新的动相。10、检测器没有设定在{zd0}招揽波利益。10、将波长调整至{zd0}招揽波利益M、 基线乐音（规则的）原 因处分方1、在动相、检测器或泵中有气氛1、动相气。冲洗编制以除去检测器或泵中的气氛。2、漏液图2、见第三局部。检讨管路接头能否松动，泵能否漏液，能否有盐析出和不一般的乐音。如有必要，转换泵密封。3、动相混合不xx3、用手摇动使混合平均或利用低粘度的溶剂4、温度影响（柱温过高，检测器未加热）4、节减分歧或加上热相易器5、在同一条线上有其他电子建造5、断开LC、检测器和记实仪，检讨滋扰能否来自于内部，加以更正。6、泵振动6、在编制中列入脉冲阻尼器N、 基线乐音（不规则的）原 因处分方1、 漏液图1、见第三局部。检讨接头能否松动，泵能否漏液，能否有盐析出和不一般的乐音。如有必要，转换密封。检讨畅通流畅池能否漏液。2、动相净化、蜕变或由低质溶剂配2、检讨动相的组。3、动相各溶剂不相溶3、选拔互溶的动相4、检测器/记实仪电子元件的题目4、断开检测器和记实仪的电源，检讨并更正。5、编制内有气泡5、用强极溶液清洗编制6、检测器内有气泡6、清洗检测器，在检测器反面装置背景压力医治器7、畅通流畅池净化（纵使是极少的净化物也会发作乐音。）7、用1N的硝酸（不能用磷酸）清洗畅通流畅池8、检测器灯能量不敷8、转换灯9、谱柱填料丧失或阻碍9、转换谱柱10、动相混合不平均或混合器做事不一般10、维修或转换混合器，在动相不走梯度时，发起不利用泵的混合装置O、 宽峰原 因处分方1、动相组变化1、重新制备新的动相2、动相流速太低2、医治流速3、漏液（特别是在柱子和检测器之间）3、见section 3。检讨接头能否松动、泵能否漏液、能否有盐析出以及不一般的乐音。假若必要转换密封。4、检测器设定不无误4、调整设定5、柱外效应影响a、柱子过载b、检测器对反映时光或池体积响应过大c、柱子与检测器之间的管路太长或管路内径太大d、记实仪响应时光太长图5、a、 小体积进样（例如：10ul而不是100ul）以1：10或1：100的比例浓缩样品b、节减响应时光或利用更小的畅通流畅池c、 利用内径为0.007-0.01的短管路d、节减响应时光6、缓冲液浓度太低6、增加浓度7、守卫柱净化或生效7、转换守卫柱8、谱柱净化或生效，塔板数较低8、转换异样类型的谱柱。假若新柱子可能提供对称的谱峰，则用强溶剂冲洗旧柱子。9、柱入口陷落9、翻开柱入口，填补陷落或转换柱子10、呈现两个或多个未被xx折柳的精神的峰10、选拔其它类型的谱柱以改善折柳效果11、柱温过低11、进步柱温。除非特殊形，温度不宜超出75℃12、检测器时光常数太大12、利用较小的时光常数P、 折柳度消沉原 因处分方1、动相净化或蜕变（惹起保存时光变化）1、重新配置动相2、守卫柱或领悟柱阻碍图2、去掉守卫柱举办领悟。假若必要则转换守卫柱。假若领悟柱阻碍，可举办反冲。假若题目依然生谱柱可能被强保存的净化物损害，发起利用妥?的再生程序。假若题目依然生，入口可能阻碍了，转换入口处的筛板或转换谱柱。Q、 所有的峰面积都太小原 因处分方1、检测器衰减设定过高1、节减衰减的设定2、检测器时光常数设定太大2、设定较小的时光常数3、进样量太少3、增大进样量4、记实仪连接不当4、利用无误的连接R、 所有的峰面积都太大原 因处分方1、检测器衰减设定过低1、采取较大的衰减2、进样过多2、节减进样量3、记实仪连接不无误3、无误连接记实仪HPLC常维护格式之：进样阀的题目以下题目在利用进样阀经过中有可能发生。A、 手动进样阀，转动不灵原 因处分方1、转子密封损害1、转换或调整转子密封2、转子太紧2、调整转子的松紧度B、 手动进样阀，载样贫穷原 因处分方1、进样阀装置不当1、重新装置2、定量环阻碍2、清洗或转换定量环3、进样器净化3、清洗或转换进样器4、管路阻碍4、清洗或转换管路C、 主动进样阀，不能转动原 因处分方1、无压力（或电源）1、提供妥?的压力（电源）2、转子太紧2、调整转子的松紧度3、进样阀装置不当3、重新装置D、 主动进样阀，其它题目原 因处分方1、阻碍1、清洗或转换阻碍部件2、机械毛病2、见随机维修手册3、管制器毛病3、维修或转换管制器HPLC常维护格式之五：由气息、场面地步和声响可能觉察的题目由气息、场面地步和声响可能觉察的题目须要运用所有的感官去觉察液相谱的题目。{zh0}养风气，每天上几分钟运用的感官（除了味觉）来“感应”的液相谱能否生题目，这样可能赞急忙找到题目所在。例如：在看到漏液之前，可能首先闻到它的气息。大局部的题目是可能始末眼睛看到。A、 溶剂的气息原 因处分方1、漏液1、见section 32、溅出2、a、检讨废液瓶能否已满b、找到溅出的部位并清洗清洁B、 热气息原 因处分方1、仪器过热1、a、检讨并医治通风设施b、检讨并医治温度设定c、关掉仪器，查找维修手册C、 读数不一般原 因处分方1、压力不一般1、见section 22、柱温箱题目2、a、检讨并医治设定b、参照用户手册3、检测器灯生效3、转换灯D、 灯警觉原 因处分方1、压力超出极限值1、a、检讨能否阻碍b、检讨并医治极限值的设定2、其它警示灯2、见用户手册E、 警觉音原 因处分方1、溶剂吐露/溅出1、找到并处分2、其它警觉音2、见用户手册F、 难听的短音或长音原 因处分方1、轴承生效1、见用户手册2、光滑不够2、举办妥?的光滑3、机械毛病3、见用户手册HPLC常维护格式之：罕见毛病及常维护罕见毛病及常维护下表中列出了液相谱罕见的一些题目，右侧中则列出的常维护的方可能节减题目出现的频次。括号中的数字是发起举办维护的时光隔绝。用户手册则提供您更多的维护方。溶剂瓶问 题维 护1、入口筛板阻碍1、a、转换（3-6个月）b、过滤动相，0.5u滤膜2、气泡2、动相气泵问 题维 护1、气泡1、动相气2、泵密封损害2、转换（3个月）3、单向阀损害3、过滤动相，运用在线过滤，盘算备用单向阀进样阀问 题维 护1、转子密封损害1、a、不要拧的过紧b、过滤样品谱柱问 题维 护1、筛板阻碍1、a、过滤动相b、过滤样品c、运用在线过滤或守卫柱2、柱头陷落2、a、防止利用PH>8的动相（针对大局部硅胶的柱子）b、利用守卫柱c、利用预柱（饱和谱柱）检测器问 题维 护1、灯生效，检测器响应消沉，乐音增大1、转换（6个月）或盘算备用灯2、畅通流畅池有气泡2、a、维系畅通流畅池清洁b、池后利用反遏抑制器c、动相气常问 题维 护1、腐蚀/冲突损害1、在不利用时维系编制缓冲液的清洁
　　
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