2．液体石蜡保藏法取化学纯液体石蜡f要求不合水分、不霉变1装于三角瓶中加棉塞并包纸．在1公斤／平方厘米压力下xx1小、时，再放入40'12恒温箱中数天．以蒸发其中水分，至石蜡油xx透明为止。将处理好的石蜡油移接在空白斜面上．28~30℃下培养2-3天．证明无杂菌生长方可使用。然后用无菌操作的方法把液体石蜡注入待保藏的斜面试管中。注入量以高出培养基斜面1-1．5厘米．塞上橡皮塞，用固体石蜡封口．直立于低温干燥处保藏。保藏时间在一年以上，在低温下．保藏时间还可延长。

    3．沙土管保藏法取河沙用水浸泡洗涤数次．过60目筛除去粗粒．再用10％盐酸浸泡2～4小时．除去其中有机物质．再用水冲洗至流水的oH达到中性，烘干备用。同时取贫脊土或菜园土用水浸泡．使呈中性．沉淀后弃去上清液．烘干碾细，用100目筛子过筛．将处理好的沙与土以f2～41：l混匀，用磁铁吸出其中的铁质．然后分装小试管或安瓶内．每管装量0．5-2克，塞棉塞，用纸包扎xxf1．5公斤／平方厘米，1小时1，再干热xx(160℃，2-3小时1l～2次，进行无菌检验，合格后使用。将已形成孢子的斜面菌种．在无菌条件下注入无菌水3-5毫升．刮菌苔。制成菌悬液．再用无菌吸管吸取菌液滴入砂土管中．以浸透砂土为止。将接种后的沙土管放入盛有干燥剂的真空干燥器内．接上真空泵抽气数小时．至沙土干燥为止。真空干燥操作需在孢子接入后48小时内完成．以免孢子发芽。制备好的沙土管用石蜡封口，在低温下可保藏2-10年。

    4．滤纸片保藏法取白色（收集深色孢子）或黑色（收集白色孢子）滤纸．剪成4x0．8厘米的小纸条．平铺在培养皿中用纸包裹进行xx（1公斤，平方厘米，30分钟）。采用钩悬法收集孢子，让孢子落在滤纸条上。将载有孢子的滤纸条放入保藏试管中，再将保藏试管放入干燥器中1-2天，除去滤纸水分．使滤纸水分含量达2％左右．然后低温保藏。

  5．自然基质保藏法

  （1)麦粒保藏法：取无瘪粒、无杂质的小麦淘洗干净．浸泡12-15小时．加水煮沸15分钟，继续热浸15分钟．使麦粒胀而不破．沥干水分摊开晾晒，使麦粒的含水量在25％左右。将碳酸钙、石膏拌入熟麦粒中(麦粒、碳酸钙、石膏比例为10公斤：133克：33克1．拌和均匀后装入试管中．每管约2-3克．然后清洗试管．塞棉塞，xx1．5(1．5公斤／平方厘米．2小时1．经无菌检查合格后备用．试管基质冷却后接种．适温培养．待菌丝长满基质

后用石蜡涂封棉塞．放低温保藏。2年左右转接一次。

    (2)麸曲保藏法：取新鲜麸皮．过60目筛除去粗粒。将麸皮和自来水按1：1拌匀．装入小试管．每管约装1／3高度，加棉塞用纸包扎．高压xxf1．5公斤／平方厘米．30分钟1，经无菌检查合格后备用．将生长在斜面培养基上的健壮菌种．移种至无菌麸曲管中．移种时注意尽管捣匀小试管中的麸皮．呈疏松状态，在适温下培养至菌丝长满麸皮为止，将麸曲小管置干燥器中。在低温或适温下保藏。

    6．生理盐水保藏法取纯氯化钠0．7-0．9克，放人100％毫升蒸馏水中．搅拌均匀分装试管．每管5-10毫升，进行xx(1公斤／平方厘米，30分钟)，经无菌检查合格后备用，将待保藏的菌种接入马铃薯葡萄糖液体培养基中适温振荡培养5-7天。无菌操作吸取少许培养菌种注入经检验合格的生理盐水试管中，塞上无菌橡皮塞．用石蜡涂封，在室温或低温保藏。

    7．冷冻真空干燥法将已培养、生长丰富的菌体或孢子悬浮于xx的血清、卵白、脱脂奶制成菌悬液．将悬液以无菌操作分装于xx的玻璃安瓿瓶中，每管约0．3~0．5毫升，然后用耐压橡皮管与冷冻干燥装置连接，安瓿瓶放在冷冻槽中于-30℃至-40℃迅速冷冻．并在冷冻状态下抽空干燥．并在真空状态下熔封安瓿．在-20℃保存，一般可保存十年以上．但成本较高。

  （ 摘自《农业信息周刊》2009．6．2．⑤    联系电话：0351—7122943）

(张华)

种植与养殖2009.16

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