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实验八 蟾蜍肠系膜平铺片及其血涂片的制作与观察
【目的要求】
掌握动物组织平铺片和血涂片的一般制作方法
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【基本原理】
肠系膜的间皮和肠系膜内的xxxx内皮是观察单层扁平上皮的较好材料. 血涂片的显微检查是血液细胞学检查的基本方法,在医学临床上应用极为广泛,特别是对于各种血液病的诊断具有重要的价值. 本实验分别采用铺片法和涂片法,将蛙肠系膜的单层扁平上皮组织及蛙血的结缔组织制备成玻片标本,在显微镜下观察这些组织的形态结构.
实验八 蟾蜍肠系膜平铺片及其血涂片的制作与观察
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【仪器、材料与试剂】
生物显微镜、解剖器具(镊、剪、针)、蜡盘、载玻片、盖玻片、注射器、染色缸、玻片架、大头针、脱脂棉活蛙或蟾蜍或牛蛙0.7%生理盐水、1%硝酸银溶液、甲醇、乙醚、姬姆萨染液、蒸馏水、甘油
实验八 蟾蜍肠系膜平铺片及其血涂片的制作与观察
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【方法与步骤 】
实验八 蟾蜍肠系膜平铺片及其血涂片的制作与观察
(一)肠系膜平铺片(单层扁平上皮)1制作蛙的肠系膜平铺片 将活蛙置于放有乙醚棉球的倒置烧杯内,使之被xx致死,或将蛙剪头杀死.将蛙仰卧于蜡盘中,用大头针固定四肢,剪开腹部皮肤和腹壁,用镊子取下小肠处肠系膜少许.若有血液污染,可用0.7%生理盐水洗净后放在一载玻片上,用解剖针将其挑开展平,晾干.加数滴1%硝酸银水溶液于肠系膜上将其浸盖,立即放在日光下晒3~5min,或在灯光下照射10~20min.当肠系膜变成浅褐色时,倾去载玻片上的溶液,用蒸馏水缓缓冲去残留染液,再加1~2滴甘油,盖上盖玻片. 2单层扁平上皮表面观
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【方法与步骤 】
实验八 蟾蜍肠系膜平铺片及其血涂片的制作与观察
(二)蛙血涂片标本的制备与观察1 血涂片的制备①解剖蛙,剪开心包膜,暴露心脏.用注射器吸取蛙心血液,滴1滴在洁净载玻片右端,血滴不宜过大.②另用一载玻片作为推片之用,将此推片的末端斜置于{dy}块载玻片上的左缘,并稍向右移,接触血滴,使血液散布在2片玻片之间.将推片以30o~40o角度迅速向左方匀速推进,从而在玻片上留下薄而均匀的血膜,就成了血片.推进时应保持一定的速度和两片间的角度,要连续推进,不要中断.血片的厚薄,可由血滴大小,推片速度和两片之间的角度大小来调节.血滴小,推进速度慢,推片角度小,涂片薄;反之,则厚.厚的涂片适于做白细胞分类,因为容易找到白细胞.
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【方法与步骤 】
实验八 蟾蜍肠系膜平铺片及其血涂片的制作与观察
(二)蛙血涂片标本的制备与观察1 血涂片的制备③摇动涂有血膜的玻片,使之尽快干燥,避免细胞皱缩.晾干后的血涂片放入盛有甲醇的染色缸内,固定3~5min.将固定后的血涂片平放在玻片架上,滴加姬姆萨染液8~10滴,以盖满血膜为宜,染色10~30min.然后在染色玻片的一端用自来水细流缓缓冲去染液,斜立血涂片于空气中,晾干后置显微镜下观察.2蛙血涂片的观察在低倍镜下选择分布均匀的血细胞,换高倍镜观察.蛙红细胞呈椭圆形,中央有一椭圆形细胞核,呈蓝色,细胞质呈红色.此外还可见到白细胞和血小板.
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注意事项
完好地剪取肠系膜并平铺于载玻片上是本实验成功的关键.当用眼科剪剪取肠系膜时,应用镊子夹住剪开的膜的边缘,防止膜皱缩成团.用镊子将膜放置于载玻片上后,再用解剖针将膜铺平.涂血片后,及时晃动玻片,使血片迅速干燥即固定;空气中干燥时间过长细胞易变形,影响观察和测量.推片时应保持一定的速度和两片间的角度,连续推进,不要中断,以免血片厚薄不一.
实验八 蟾蜍肠系膜平铺片及其血涂片的制作与观察
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【思考与练习】
实验八 蟾蜍肠系膜平铺片及其血涂片的制作与观察
1 绘蛙单层扁平上皮,并注明图中各部分名称.2 试述血液涂片的制作要点.
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