Agilent1100液相基本操作步骤

(一)、开机：

??? 1、打开计算机,进入Windows NT （或Windows 2000）画面,并运行Bootp Server程序。

???? 2、打开 1100 LC 各模块电源。

???? 3、待各模块自检完成后，双击Instrument 1 Online图标，化学工作站自动与1100LC通讯，进入的工作站画面如下所示。

??? 4、从“View”菜单中选择“Method and Run control”画面, 单击”View”菜单中的“Show Top Toolbar”，“Show status toolbar”，“System diagram”,”Sampling diagram”，使其命令前有“√”标志，来调用所需的界面。

?? 5、把流动相放入溶剂瓶中。

?? 6、打开Purge阀。

?? 7、单击Pump图标，出现参数设定菜单，单击Setup pump选项，进入泵编辑画面。

?? 8 、设Flow：5ml/min，单击OK。

?? 9、单击Pump图标，出现参数设定菜单，单击Pump control选项，选中On，单击OK，则系统开始Purge，直到管线内（由溶剂瓶到泵入口）无气泡为止,切换通道继续Purge，直到所有要用通道无气泡为止。

?? 10、单击Pump图标，出现参数设定菜单，单击Pump Control选项，选中Off，单击Ok关泵， 关闭

Purge? valve。

?? 11、单击Pump图标，出现参数设定菜单，单击Setup pump选项，进入Pump编辑画面，设Flow：1.0ml/min。

?? 12、单击泵下面的瓶图标，如图所示（以二元泵为例），输入溶剂的实际体积和瓶体积。也可输入停泵的体积。单击Ok。

?

（二）数据采集方法编辑：

? 1、开始编辑完整方法：

? 从“Method”菜单中选择“Edit entire method” 项，如上图所示选中除“Data??? analysis ”外的三项，单击Ok，进入下一画面。

2、方法信息：

? 在“Method Comments”中加入方法的信息（如：方法的用途等）。

单击Ok 进入下一画面。

3、泵参数设定：（以二元泵为例）

在“Flow”处输入流量,如1ml/min，在“Solvent B”处输入70.0,(A=100-B) ,也可Insert 一行”Timetable” ,编辑梯度。在“Pressure Limits Max”处输入柱子的{zd0}耐高压，以保护柱子。

?单击Ok进入下一画面。

?4、自动进样器参数设定:

选择合适的进样方式, 如图所示，进样体积 1.0ul ,洗瓶位置为6号。“Standard Injection”----只能输入进样体积，此方式无洗针功能。“Injection with Needle Wash”----可以输入进样体积和洗瓶位置，此方式针从样品瓶抽完样品后，会在洗瓶中洗针。“Use injector program”---可以点击Edit 键进行进样程序编辑。

?点击Ok进入下一画面。

?

5、柱温箱参数设定:

????? ●? 在”Temperature”下面的方框内输入所需温度,并选中它,点击”more>>” 键,如图所示,选中”Same as left”---使柱温箱的温度左右一致。

?????? ●? 点击ok进入下一画面。

6、VWD检测器参数设定:

?●? 在”Wavelength”下方的空白处输入所需的检测波长,如254nm,? 在”Peak width (Response time)”下方点击下拉式三角框,选择合适的响应时间, 如>0.1min? (2s)。

?●? 在Timetable 中可以“Insert”一行，输入随时间切换的波长，如1min? ，波长=300nm。点击ok进入下一画面。

7、DAD检测器参数设定:

●? 检测波长: 254nm,BW=30nm,???? 参比波长=350nm,BW=100nm;?

●? 检测波长：一般选择{zd0}吸收处的波长。样品带宽BW： 一般选择{zd0}吸收值一半处的整个宽度。参比波长：一般选择在靠近样品信号的无吸收或低吸收区域。参比带宽BW：至少要与样品信号的带宽相等，许多情况下用100nm作为缺省值。Peak width（Response time）：其值尽可能接近要测的窄峰峰宽。Slit—狭缝窄，光谱分辨率高；宽时，噪音低。同时可以输入采集光谱方式，步长，范围，阈值。选中所用的灯。

●? 点击Ok进入下一画面。

8、RID检测器参数设定:

●? 色谱条件:??

进样体积: 20ul 。????? 光学单元温度:? Off 。

极性: 正 。?????????? 峰宽(响应时间) :? 4s? 。

●? 如图所示: “Optical Unit Temperature”---若环境温度控制在±2℃,设定为Off,? 若环境温度不稳定,则设定光学单元温度为高于环境温度5度,以防样品在池中沉淀。“Peak width”---大多数分析设为4S，只有在高速分析下设为更短。“Automatic recycling after analysis”---在不进行分析时可以让流动相循环，节省流动相，检测器连续运行，可随时投入使用。

?●?? ***** 点击RID图标，选择RID? Control ：Heater 设为On，若要循环流动相，必须将“Recycling Valve”设为ON。手动purge 参比池，将其设为On，并输入Purge 时间。?

9、FLD检测器参数设定:

??? 色谱条件：?

?●?? 样品：P/N 01018-68704? 用甲醇稀释为1:10。

?●??? 进样体积：5ul。

?●??? 柱温箱:? 30℃ 。?? EX=246nm, EM=317nm ,PMT=10。

?●??? 响应时间=4s.???? 停止时间：?出峰完毕。

?●??? Excitation A: 激发波长:200-700nm,步长为1nm,或Zero Order。

?●??? Emission: 发射波长: 280-900nm, 步长为1nm,或Zero Order。

?●??? PMT: 大多数应用适当的设定值为10,若高浓度样品峰被切平头,则减少 PMT 值。

?●? “Peak width”：大多数应用设为4s，只有快速分析采用小的设定值。

?●??? Multi Ex ： 多波长及光谱（激发）。

?●??? Multi Em：多波长及光谱（发射）。?

?●??? 同时可以输入范围Range、步长step、采集光谱。

?

10、在“ Run time checklist ”中选中“Data acquisition”，单击Ok。

?

?

11、单击“Method”菜单，选中“Save method as”，输入一方法名，如“test”，单击Ok。

12、从菜单 “View”中选中”Online signal” ,选中Windows 1,然后单击Change 钮,将所要绘图的信号移到右边的框中,点击Ok.(如同时检测二个信号,则重复12,选中Windows 2)。

13、从“Run? control ”菜单中选择“Sample info”选项，如上图所示，输入操作者名称，在“Data file ”中选择“Manual”或“Prefix”。

区别:??? Manual--每次做样之前必须给出新名字,否则仪器会将上次的数据覆盖掉。?? Prefix—在Prefix 框中输入前缀，在Counter 框中输入计数器的起始位，仪器会自动命名，如vwd0001，vwd0002……。

14、从Instrument 菜单选择System on。

15、等仪器Ready，基线平稳，从Method菜单中选择“Run method”，进样。

（DAD, VWD色谱图如下所示：）

?

（三）、数据分析方法编辑:

1、? 从“View”菜单中，单击“Data analysis”进入数据分析画面。

2、? 从“File”菜单选择“Load signal”，选中您的数据文件名，如下图所示。单击Ok。

3、? 做谱图优化,从“Graphics”菜单中选择“Signal options”选项，。从Ranges中选择Auto scale及合适的显示时间，单击ok,或选择”Use Ranges” 调整。反复进行，直到图的比例合适为止。

4、积分:

(1)、从“Integration”中选择 “Auto integrate”,如积分结果不理想,再从菜单中选择“Integration? Events”选项，选择合适的Slope sensitivity，Peak width，Area reject，Height reject。

(2)、从“Integration”菜单中选择“Integrate”选项， 则数据被积分。

(3)、如积分结果不理想，则修改相应的积分参数，直到满意为止。

(4)、单击左边“√”图标，将积分参数存入方法。

5、打印报告:

(1)、从“Report”菜单中选择“Specify report”选项，进入如上画面。

(2)、单击“Quantitative? Results”框中Calculate右侧的黑三角，选中Percent（面积百分比），其它选项不变。

(3)、单击Ok.

(4)、从“Report”菜单中选择“Print report”，则报告结果将打印到屏幕上，如想输出到打印机上，则单击Report 底部的“Print”钮。

? (四)、关机:

?●? 关机前，用 {bfb}的水冲洗系统20分钟，然后用有机溶剂冲洗系统10分钟（如ACN），然后关泵，（适于反相色谱柱）。[正相色谱柱用适当的溶剂冲洗]

●? 退出化学工作站，及其它窗口，关闭计算机（用shut down关