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液相色谱—质谱联用方法研究及其在蛋白质组分析中的应用- 液相色谱柱法 ...

液相色谱—质谱联用方法研究及其在蛋白质组分析中的应用

2010-04-13 23:55:51 阅读30 评论0 字号：大中小

液相色谱-质谱联用方法在蛋白质组学研究中有着举足轻重的作用,随着蛋白质组学研究的发展,液相色谱-质谱联用方法也在迅速发展。本文首先对双向凝胶电泳-质谱联用方法和基于盐梯度洗脱的二维液相色谱-质谱联用方法进行比较,表明基于盐梯度洗脱的二维液相色谱-质谱联用方法能鉴定到更多的蛋白质。但是,基于台阶盐洗脱的强阳离子交换液相色谱由于其分辨率不高导致不同盐梯度间的肽段相互重叠;并且需要较长的时间来脱盐,以免残存的盐对质谱分析产生影响。因此,我们对基于pH洗脱模式的液相色谱-质谱联用方法进行了研究,结果表明基于pH洗脱的强阳离子交换液相色谱在肽段水平的分级十分有效;然后采用液相色谱-质谱联用方法在细胞及组织中进行了大规模的蛋白质鉴定及定量分析。我们建立和发展了在线的台阶和连续的pH梯度洗脱的强阳离子交换液相色谱-反相液相色谱-质谱联用方法。与传统的在线盐梯度洗脱的方法相比,基于在线的pH梯度洗脱的方法具有以下优点:能鉴定更多的肽段和蛋白质;能提高鉴定蛋白质的序列覆盖率;能鉴定更多的碱性肽段;能降低不同组分间肽段的相互重叠。上述实验中使用的pH溶液的盐浓度很低,因而与质谱有很好的兼容性。在此基...
Liquid chromatography-mass spectrometry is one of the most important analytical methods in proteome research. Although more proteins were identified by 2D LC-MS/MS method based on salt step elution than by 2-DE/MS method from human bile, it still suffered from complications mostly due to elution of the same peptides in the consecutive salt steps (peptide overlap), as well as from the interference of salt with the mass signal. Therefore, we have developed liquid chromatography-mass spectrometry methods...

文献名称	液相色谱—质谱联用方法的研究及其在蛋白质组分析中的应用
Article Name 英文(英语)翻译	Development of Liquid Chromatography-mass Spectrometry Method and Its Application in Proteomic Analysis;
作者	周虎; 导师:曾嵘;
Author
作者单位 Author Agencies	中国科学院研究生院（上海生命科学研究院）;
文献出处 Article From	中国科学院研究生院（上海生命科学研究院）; 生物化学与分子生物学(专业) 博士论文 2007年度
关键词
Keywords	pH-elution strong cation exchange chromatography;Membrane protein;Cholesterol gallstone;3T3-L1 adipocyte;Concanavalin A affinity purification;SD rat epididymis;Glycoproteomics;

来源

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