二抗的选择和定位 因为不同物种来源的免疫球蛋白含有相似的结构，抗一个物种的抗体可能与其他物种发生交叉反应，除非事先特殊处理过(如标有&；ldquo；min X Hu, Bov&；hellip；Sr Prot&；rdquo； - minimal cross-reactivity to human and bovine serum proteins) ), 经过用圆括号中的物种 (human, bovine) 的血清蛋白的吸附处理来降低交叉反应)。在选择二抗时，只有在来自两个很相近的物种的一抗都存在而需要检测其中一种时，才使用针对其中一种特殊吸附处理过的抗体。这样的抗体可能不能和所有亚型的IgG都很好的反应。比如，在含有内源性免疫球蛋白的大鼠的组织样本中，使用针对大鼠吸附处理过的anti-mouse IgG来检测小鼠的一抗，或者在多标记实验中使用了大鼠的一抗时。当不含有大鼠免疫球蛋白时，{zh0}采用没有针对大鼠IgG处理过的anti-mouse二抗来检测小鼠的一抗。牛血清白蛋白（BSA）和奶粉中可能含有牛IgG。直接针对牛，山羊，马和绵羊的二抗会跟牛IgG反应。因此，使用BSA或者奶粉来封闭或者稀释这些抗体可能导致背景染色明显增加，以及抗体效价的降低。这时，推荐使用5％的二抗来源物种的正常血清来封闭。
Anti-IgG，Fc fragment specific这类抗体和IgG重链的Fc部分反应。它们通过了ELISA检测，和(或)针对Fab片段吸附的测试。某些情况下，需要额外检测和处理来降低和IgM或IgA的交叉反应，会被描述为&；ldquo；Anti-IgG, Fc&；gamma；fragment specific&；rdquo；。注意：不是所有anti-IgG, Fc抗体和所有亚型的IgG反应能力一致。要找和四种IgG亚类反应能力差不多的anti-mouse IgG, Fc&；gamma；抗体的话，应当选Goat Anti-Mouse IgG (subclasses 1+2a+2b+3), Fc&；gamma；fragment specific (min X Hu,Bov,Rb Sr Prot)。
(min X&；hellip；Sr Prot)这类抗体经过了检测，以及针对IgG和圆括号中的物种的血清蛋白的吸附处理。当其他物种免疫球蛋白的出现可能导致交叉反应时，推荐使用这类抗体。但是，当要选择经过针对相近物种吸附处理的抗体时，要特别注意，因为它们能识别的表位数量大大减小了，可能识别单抗的能力很弱。这种情况的例子有Anti-Mouse IgG (min X Rat,&；hellip；.Sr Prot), Anti-Rat IgG (min X Mouse, &；hellip；Sr Prot), 和 Anti-Ramenian Hamster IgG (min X Mouse, Rat, &；hellip；Sr Prot)。
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