十、临检产品 无菌的Dynabeads是在严格的无菌条件下生产的，可作临床研究之用，用于分离活细胞群。以下两类产品可有效地用于临床研究，它们均可与您选择的抗体偶联，对特殊的人细胞进行分离、去除和修饰。一旦包被上抗体或其它偶联物，Dynabeads就可加入至不同的细胞样本中。然后通过磁分离器，如Magnetic Particle Concentrator (Dynal MPC)将样本分离。不同大小、物理性质和表面化学性质的Dynabeads分别适用于从不同的样本，如全血、血沉棕黄层、单核细胞和骨髓中分离细胞。 Dynabeads Sterile Epoxy（目录号402.01） Dynabeads Sterile Epoxy 适用于临床应用前或临床试验{dy}期时的检验工作，可与其他配体如抗体、蛋白质、凝集素或碳水化合物等一起使用，来分离或去除人的某些细胞或细胞组份。 Dynabeads Sterile Epoxy亦可以用于去除巨噬细胞如样品中的单核细胞等。该产品是基于细胞对磁珠的吞噬作用而设计的。通过外加磁场的作用，含有磁珠的细胞会贴附在管壁上，从而可以方便地去除其他成分。 Dynabeads Sterile Epoxy是一种疏水性磁珠，它表面含有活化的环氧基团。这些环氧基团会以共价键的形式与蛋白质或多肽的主要氨基酸序列相结合，而无需进一步的活化过程。该磁珠的直径为4.5μm（C.V. max 5%），浓度为每毫升含磁珠4×108个，在4～37℃、中性pH的条件下可与温敏性抗体进行偶联反应。 Dynabeads Sterile Epoxy是在严格无菌的条件下进行生产的，并已备有相关FDA设备管理文件查阅，且已通过欧盟CE认证。 Dynabeads Sterile Sheep anti-Mouse IgG（目录号422.01） Dynabeads Sterile Sheep anti-Mouse IgG是一种包被有多克隆抗小鼠IgG的Dynabeads磁珠。在应用于临床研究时，它也可以包被自备的小鼠IgG来进行细胞分离。 Dynabeads Sterile Sheep anti-Mouse IgG会结合初次应答时小鼠产生的IgG重链和轻链以及IgM轻链，而无需进一步的活化过程。该磁珠的直径为4.5μm (C.V. max 5%)，浓度为4×108个/ml，在2～8℃，轻轻振荡的条件下30分钟内可完成偶联反应。整套程序仅需不到1个小时即可完成。 Dynabeads Sterile Sheep anti-Mouse IgG是在严格无菌的条件下进行生产的，并已通过欧盟CE认证。 目录号 产品说明 规格 价格 (RMB) 402.01 Dynabeads Sterile Epoxy 10 ml 9750 422.01 Dynabeads Sterile Sheep anti-Mouse IgG 10 ml 15600 1、Dynal分子生物学产品 Dynabeads Oligo(dT)25 及mRNA分离试剂盒 Dynabeads　Oligo(dT)25是一种直径为2.8μm的均一、超顺磁的微球体，其表面的5连接键共价结合了由25个脱氧核糖核苷组成的长链。Dynabeads Oligo(dT)25是为从真核总RNA中或直接从动物组织、细胞和植物的粗提物中快速分离出高纯度、全长的polyA-RNA而设计的，可在15分钟内直接分离得到全长、纯的mRNA溶液，无需经过任何的纯化步骤。经Dynabeads Oligo(dT)25分离得到的mRNA溶于适宜的缓冲体系，可直接应用于所有的分子生物学下游研究，包括酶学研究、cDNA文库的构建、RT-PCR、S1核酸酶分析、核糖核酸酶保护、引物扩增、点杂交和斑点杂交、体外转录实验、差异显示和Northern杂交，亦可用于基因克隆及基因表达分析。 本试剂盒的Dynabeads Oligo(dT)25悬浮在pH7.4含有0.02%的叠氮钠作为保护剂的磷酸缓冲液中，浓度为3.3×108个磁珠 (约5mg/ml)。根据组织或细胞类型和mRNA表达水平情况，每200μl（约1mg）的Dynabeads Oligo(dT)25最多可分离得到2μg的mRNA，即1ml的Dynabeads Oligo(dT)25可分离得到约12μg mRNA。如同样的Dynabeads Oligo(dT)25重复使用五次（四次再生），1ml的Dynabeads Oligo(dT)25最多可结合60μg的高纯度、全长的mRNA。 Dynal Biotech的mRNA分离产品全都基于Dynabeads Oligo (dT)25而生产。这些磁珠可以单独使用，也可以做为下表中不同试剂盒的主要成分。 2、Dynabeads Oligo(dT)25 的应用 用于蛋白质分离的Dynabeads 目录号 产品说明 规格 价格 (RMB) 100.01 100.02 Dynabeads Protein A 1ml Dynabeads Protein A can bind 250 human IgG. 1 ml 5 ml 3900 8255 100.03 100.04 Dynabeads Protein G 1ml Dynabeads Protein G can bind 640 Mouse IgG. 1 ml 5 ml 1430 5720 112.01 112.02 Dynabeads M-280 Sheep anti-Mouse IgG, 6.6x108/ml 2 ml 10 ml 3055 8970 112.03 112.04 Dynabeads M-280 Sheep anti-Rabbit IgG, 6.6x108/ml 2 ml 10 ml 3055 8970 3、Dynabeads DNA DIRECT Dynabeads DNA DIRECTTM　是一种均一、超顺磁的多聚苯乙烯微球体，专为快速简便地提取出可直接应用于PCR反应的DNA及从原材料直接分离提取基因组DNA而设计。为了便于使用，Dynabeads DNA DIRECTTM是作为DNA提取试剂盒的一部分来提供的。 目录号 产品说明 应用 规格 价格 (RMB) 630.06 Dynabeads DNA DIRECTTM universal The kit contains Dynabeads DNA DIRECTTM and all the necessary buffers. For manual and automated isolation of PCR-ready genomic DNA. 300 tests 3250 631.02 Dynabeads DNA DIRECTTM Blood The kit contains Dynabeads DNA DIRECTTM and all the necessary buffers. For the isolation of PCR-ready genomic DNA from whole blood, buffy coat and bone marrow. 100 tests 2600 4、Dynabeads DNA DIRECTTM的多功能性 5、Dynabeads Streptavidin Dynabeads Streptavidin是一种均一、超顺磁的微球体，它表面共价结合有纯化的链亲和素。链亲和素是一种由四个相同的亚基组成的蛋白质，每个亚基均有一个与生物素有高亲和力的结合位点。这种链亲和素与生物素的高亲和力（Kd=10-5）可以快速、高效地分离生物素标记的靶分子，而不会出现像抗生物素蛋白那样的非特异性结合。生物素－链亲和素的相互作用的稳定性和结合力可以对DNA分子进行诸如解链、洗脱、杂交等操作，而不影响DNA在Dynabeads磁珠表面的稳定性。 Dynabeads kilobaseBINDERTM kit 是为增强生物素标记的大片段DNA与Dynabeads Streptavidin之间的结合能力而设计的。本试剂盒包括Dynabeads Streptavidin和一种独特的结合缓冲液，这些试剂有助于增强生物素标记的大片段DNA与Dynabeads Streptavidin之间的结合。在使用结合缓冲液的情况下，1mg Dynabeads Streptavidin可以固定约70pmol 4Kb的DNA片段和约80pmol 10Kb的DNA片段。 通过对结合在Dynabeads上32P标记的PCR产物的定量分析，结果证明PCR产物的长度会影响其与Dynabeads的结合。两个500bp DNA片段与Dynabeads Streptavidin的结合能力和1Kb DNA片段与Dynabeads Streptavidin的结合能力是一样的。如果大片段DNA与Dynabeads Streptavidin的结合能力下降，那可能是位阻引起的。如果DNA片段大于2Kb时，推荐使用Dynabeads kilobaseBINDERTM kit。因为该试剂盒提供的结合缓冲液可以提高Dynabeads对大片段DNA的结合能力。 目录号 产品说明 应用 规格 价格 (RMB) 112.16 112.05 Dynabeads M-280 Streptavidin Supplied at 6.7x108 beads per ml (10mg/ml) in PBS, pH7.4 with 0.1% BSA and 0.02% sodium azide. Isolation of any biotinylated target. Applications include DNA, RNA and protein isolation and handling. 0.4 ml 2 ml 780 3445 601.01 Dynabeads kilobaseBINDERTM kit The kit contains Dynabeads Streptavidin(1ml), binding solution and washing solution. Isolation of long DNA fragments 1 kit 3445 6、表面活化Dynabeads 表面活化的Dynabeads已成功应用于分子操作、亲和分离及生物测定。它具有两种大小规格，亲水性磁珠和疏水性磁珠，及多种不同的表面化学试剂，可以简单方便地结合几乎任一种配体。 7、优点 （1）使用同一大小磁珠时重复性较好； （2） 大小适中，既不会聚集，也不会沉淀； （3） 与蛋白的非特异性结合少； （4） 配合应用，具多种选择。 8、根据大小选择表面活化Dynabeads 较大的Dynabeads（直径4.5μm）适于象细胞和细胞器那样的较大组分的分离。小珠的尺寸及铁含量可以保证甚至是从粘性的样品中，也能xx分离。而较小的磁珠（直径2.8μm）则在分离象蛋白和噬菌体这样的组分时是理想的工具。结合力的增加是表面积增加的三倍。 9、根据疏水或者亲水性选择表面活化Dynabeads （1） 疏水的磁珠（M-450和M-280）可以迅速吸附 蛋白到球表面，随后形成共价键。蛋白疏水区的最初吸附促进了一些蛋白（比如IgG）最适宜地定位于磁珠表面。这些磁珠在水介质中xx稳定。 （2）亲水的磁珠（M-270和M-500 Subcellular）是 设计用于更柔和的分子与磁珠表面间共价连接，以 确保酶的功能和不稳定蛋白不被破坏，同时也促进 肽的结合。由于这种磁珠在水中具有很好的分散 性，所以在自动化步骤中应用这些磁珠也很理想。 10、根据应用选择选择表面活化Dynabeads （1）细胞分离 在需要稍大的磁珠以便正确定位抗体、使功能结合容易而有效分离细胞时，选择Dynabeads M-450 Epoxy。对于易损坏的细胞需要轻柔处理时，则选择Dynabeads M-280 Tosylactivated。 （2）胞器分离 需要柔处理时，选Dynabeads M-500 Subcellular。由于它的超平滑表面，表面活化Dynabeads是用来在电镜下进行胞器分离的理想磁珠。 （3）xx分离 选择Dynabeads M-280 Tosylactivated，可以使功能结合容易、正确定位抗体和增加与更小的磁珠的结合性。Dynabeads M-270 Epoxy，则作为疏水性磁珠的一种选择，以使非特异性结合减到最少。 （4）噬菌体展示 噬菌体转移时用到几种产品，依靠分子固定。Dynabeads M-270 Epoxy适用于肽结合，Dynabeads M-280 Tosylactivated利用抗体结合和噬菌体表达的抗原决定簇选择。Dynabeads M-270 Carboxylic acid是通过不稳定的抗原决定簇结合来达到快速选择噬菌体的目的。 （5）蛋白分离 （a） 一些蛋白的分离可选Dynabeads M-280 Tosylactivated，例如正确定位抗体。应用更轻柔的结合化学试剂和降低非特异性结合时，可从Dynabeads M-270系列中选择。 （b）His-tag Proteins: 选择Dynabeads M-270 Epoxy，使金属螯合剂与磁珠表面的环氧树脂易于结合。 （c）抗体固定： 选择Dynabeads M-280 Tosylactivated，正确定位抗体。 （d） 肽固定： 选择Dynabeads M-270 Epoxy，以使结构完整的肽结合；选择Dynabeads M-270 Amine，用于C端肽固定；或选择Dynabeads M-270 Carboxylic Acid，用于快速肽结合。 （e） 糖蛋白固定：选择Dynabeads M-270 Amine，使磁珠上的胺易结合，产生氧化作用，之后是还原胺化作用。 （f） 巯基组固定：选择Dynabeads M-270 Amine，它是一种“{wn}磁珠”，因为它和多种交联试剂都具有极好的反应性，能够容易地引入表面活性剂，其中的巯基可以容易地引入交叉结合物。 （6）糖类固定 选择Dynabeads M-270 Amine，通过先氧化后氨还原，可容易地结合磁珠的氨基。 （7）自动步骤 选择任一种亲水性Dynabeads M-270， 以获得良好的水中分散性。 目录号 产品说明 规格 价格（元） 142.03 142.04 Dynabeads M-280 Tosylactivated hydrophilic p-toluene-sulfonyl (tosyl) group, 2x109/ml 2 ml 10ml 2639 7800 143.01 143.02 Dynabeads M-270 Epoxy hydrophilic beads, glycidyl ether, 2x109/ml 2 ml 10ml 2795 11245 143.05 143.06 Dynabeads M-270 Carboxylic acid hydrophilic beads, 2x109/ml 2 ml 10ml 2795 11245 143.07 143.08 Dynabeads M-270 Amine hydrophobic beads Amino group, 2x109/ml 2 ml 10ml 2795 11245 302.12 Dynabeads M-450 Tosylactivated (30mg/ml), 4x108/ml 10 ml 7800 302.02 Dynabeads M-450 Epoxy (30mg/ml), 4x108/m 10 ml 6825 150.01 Dynabeads M-500 Subcellular very hydrophilic p-toluene-sulfonyl (tosyl) group, 4x108/ml 2 ml 3250 （8）DYNAPURETM Dye Terminator Removal Ver.2试剂盒 为了获得测序的{zj0}质量和较长的阅读序列，很有必要在电泳前对测序产物进行有效的处理。这对于contemporary dye terminator sequencing kits来说尤为重要，因为在这种试剂盒中，染料分解的产物会影响到序列的阅读。 DYNAPURETM Dye Terminator Removal Ver.2试剂盒在自动分离得到测序产物的同时，不会丢失大量的信号，也不会掺杂有害的未结合的终止子和染料分解的产物。采用常规的标准步骤，每一步不同的测序反应要有其自身独特生物素标记的引物，如果此反应不常用的话，实验的费用会很昂贵。现在我们向您介绍一种用于DYNAPURETM体系的基因测序的简便的PCR引物修饰法，它可极大地减少购买生物素标记引物的花费。 （9）材料及方法 用一个未修饰的基因特异性引物和一个在5挾擞肕13标记的引物PCR（10μl）得到测序模板。加入1 unit的SAP和10 units的ExoI纯化PCR产物，37℃孵育30分钟，再在95℃下孵育10分钟。 （10）测序反应体系 （a）1μl PCR product （b） 0.5μl BigDyeTM V1 （c） 0.75μl 5x dilution buffer （d） 0.25μl biotinylated M13 primer (10 pmoles/μl) （e） 2.5μl UHP H2O. 94℃ 2分钟，再（94℃ 30秒，50℃ 15秒，60℃ 4分钟）x 30个循环。然后按DYNAPURETM Dye Terminator Removal Ver.2试剂盒说明书来分离PCR产物。用1.5μl 95% 的去离子甲酰胺将测序产物从beads上洗涤下来，在96齿的RapidLoadTM membrane comb上0.5μl的样品，按ABI PRISM 377 DNA测序仪说明书装梳子。 （11）结果和结论 我们用此方法检测了从NF1 (neurofibromatosis type 1)、TSC1、TSC2 (tuberous sclerosis)和RET基因来源的100种不同的PCR产物，结果可靠、稳定且无未结合的染料痕迹。 本方法的优点在于其不用为每一个测序反应都购买一个生物素标记的引物和昂贵的测序引物。虽然PCR引物要再加一些碱基，但其花费要比使用生物素少得多。另一个优点就是可随意地设计目的序列的起始部分，这样就能从目的序列开始阅读。此方法也可自动操作，吸液、分离和洗涤等步骤都能用机器操作完成。