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高效液相色谱仪资料（一）_天南star_新浪博客

一、液相色谱仪的组成
      储液器
       泵
       进样器：进样阀或注射器
      色谱柱：内有固定相以分离混合组分的柱
      检测器：能检测色谱柱流出组分及其量的变化的器件
      记录仪
二、泵的要求
      输出压力高：一般至少要有15~35MPa,{zg}有50MPa。
      流量范围大：分析型在0.1~10mL/min内连续调节，制备型要求在100mL以上。
      流量恒定：要求无脉冲，精度重复性在0.5%左右。
      耐腐蚀：能适合各种有机溶剂、水和缓冲溶液。
      适于梯度洗脱。
      目前最常用的是柱塞往复泵。
      其他：密封、小巧、便于清洗和维护等。
三、检测器
      要求：具有高灵敏度、噪音低、线性范围宽、重复性好、适用性广等性能。
      原理：通过检测器的组分，对特定波长紫外线的吸收服从 Lamber-Beer 定律（A=ELc）。
      高效液相色谱法常用的检测器有紫外检测器（UVD）、光电二极管阵列检测器（DAD）、荧光检测器（FD）、示差检测器（RID）、蒸发光散射检测器（ELSD）等。
   （一）紫外检测器（ Ultraviolet Visible Detector,UVD ）
       光源一般为氘灯（D2）
       温度和流量的变化比较不敏感
       对许多样品有很高的灵敏度
       检测下限低(可达3×10-9g)
二）光电二极管阵列检测器（Photodiode Array Detector,DAD）
       可作紫外一可见光谱的快速扫描检测，使液相色谱所能提供的信息量大幅度增加。
       可获得“在流”色谱的全部光谱的全部信息，即不必停留，可跟随色谱峰发描，用于观察色谱柱流出组分的每个瞬间的动态光谱吸收图。
      所获得的图为三维光谱-色谱图（3D- spectro-chromatogram,简称三维图）。图上t、A、λ分别对应x、y、z 轴。
（三）荧光检测器         (Fluorescence Detector,FD)
荧光检测器是测量溶质受紫外光辐照激发出的荧光能量。
要求：流动相必须不吸收在原始波长或荧光波长处的辐射。
对于具有强烈发射荧光能力的化合物，灵敏度能高达10-9克/毫升。
如：某些代谢物、xx、氨基酸、胺类、维生素和甾族化合物都可用荧光检测器来检测。
（四）示差折光检测器（Refractive Index Detector，RID）
分为反射式RID和偏转式RID
对流量的变化，特别是在升高温度时，是很敏感的。
灵敏度取决于样品和流动相之间的折射率之差。
不能采用梯度洗脱模式进行检测。
检测

（五）蒸发光散射检测器（ Evaporative Light Scattering Detector，ELSD ）
   原理：将色谱柱流出液引入雾化器，与通入的气体（常为高纯氮，有时是空气）混合形成均匀的微小液滴，经过加热的漂移管，蒸发除去流动相，而样品组分形成气溶胶，然后进入检测室，检测器检测得到信号。
用途：用于检测糖类、高级脂肪酸、磷脂、维生素、氨基酸、甘油三酯及甾体等。
要求：流动相必须是挥发性的，不可含有缓冲盐类。
缺点：灵敏度低，尤其是有紫外吸收的组分。
四、色谱分析的心脏-色谱柱
要求：分离度高、柱容量大及分析速度快等。
结构：采用优质不锈钢管，内部采用匀浆高压装柱法填充固定相。
分类：按规格的不同分为分析型柱和制备型柱。
分析型柱：常用的的有4.6*150mm，4.6*250mm，内部填料粒径为5um或10um。
制备型柱：内径20-40mm，长10-30cm。
色谱柱的基本特点
填料必需为键合相，如ODS、C8等。
不能被流动相所溶解。
要耐受高压，其载体必需要有很高的机械强度。
柱体只能是不锈钢。
通常是细粒径、短柱长、低流量。
常用色谱柱
正相色谱法：常用的有氨基柱（-NH2）、氰基柱（-CN）等，流动相常选用乙醚、三氯甲烷、二氯甲烷，以环己烷作为底剂。
反相色谱法：常用的有十八烷基硅烷键合硅胶（ODS，C18）、辛烷基硅烷键合硅胶（C8）等，流动相常选用甲醇、乙腈、四氢呋喃，以水作为底剂。
常用色谱柱柱效评价
            柱产评价可以了解色谱柱是否合乎要求，进行“色谱条件系统性实验”，给出分析状态理色谱柱应达到的最小理论塔板数。
硅胶柱
     样品：苯、萘、联苯及菲（用己烷配置）；
     流动相：无水己烷；
反相色谱柱（ODS等）：
     样品：硝基苯、萘、芴（或甲醇配置的硅胶柱样品）；
     流动相：AcN：H2O（6：4）；
正相色谱柱（-CN或-NH2）：
     样品：偶氮苯、氧化偶氮苯及硝基苯的混合物；
     流动相：正庚烷

灵敏度低，较UVD低1000倍。

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