产品编号： EIA05316

使用前彻底阅读说明书。本酶联免疫试剂盒是基于经典酶联夹心技术原理，能测量大鼠IL-9，只能用于研究用途，不得用于医学诊断。

工作原理

白介素-9是由CD4+Th2细胞分泌的细胞因子,具有多种生物学活性,在机体的免疫应答中具有多种免疫调节作用,参与肿瘤发生、寄生虫免疫、支气管xx、慢性阻塞性肺病和器官移植等多种疾病过程。所提供的ELISA Kit是典型的夹心法酶联免疫吸附测定试剂盒（ELISA）。预先包被的抗体为多克隆抗体。检测相抗体也为多克隆抗体，经生物素（biotin）标记。样品和生物素标记抗体先后加入酶标板孔反应后，PBS或TBS洗涤。随后加入过氧化物酶标记的亲和素反应；经过PBS或TBS的彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的待测因子呈正相关。

每套试剂盒中内容(96T)

需要而未提供的试剂和器材

1．     37℃恒温箱。

2．     标准规格酶标仪。

3．     自动洗板机。

4．     单通道或多通道可调节移液器以及其吸头。

5．     蒸馏水，容量瓶等

6．     干净的试管和Eppendof管。

注意事项

1．     开启试剂盒之前要室温平衡至少30分钟。

2．     配制各种试剂时，切记混匀！

3．     用户在初次使用试剂盒时，应将各种试剂管离心数分钟，以便试剂集中到管底。

4．     建议所有标准品、样本都做双份检测。

5．     要严格避免操作过程中酶标板干燥。干燥会使酶标板上生物成份迅速失活！

6．     为免交叉污染，要避免重复使用手中的吸头和试管。

洗板方法

手工洗板方法：吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将推荐的PBS或TBS洗涤缓冲液至少0.35ml注入孔内，浸泡1-2分钟。根据需要，重复此过程数次。

自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。

样品的准备和保存

样品如果不立即分析，应分装后冷冻保存，且避免反复冻融。

血清——用干净试管收集血液，室温凝固2小时或4℃过夜，离心1000×g 10分钟，收集血清。立即分析或分装后-20℃冷冻保存。

细胞培养、组织匀浆、体液——离心去除沉淀，立即分析或分装后-20℃冷冻保存。

样品稀释的一般原则

用户须查阅文献了解标本内待测因子的含量，决定适当的稀释倍数，以使稀释后样品中待测因子的浓度处于ELISA试剂盒的{zj0}检测范围。样品的稀释应有详细记录。

试剂的准备和保存

A. 标准品的稀释和使用：在使用前2小时内准备。将冻干品管内加入1ml样品稀释液，彻底溶解后做倍比稀释。

稀释后的标准品在2小时内使用。

B．生物素标记抗体工作液：在使用前2小时内准备。

1．     根据每孔需要0.1ml计算总的用量（实际配制时应多配制0.1-0.2ml）。

2．     按10ul生物素标记抗体加抗体稀释液990ul的比例配制工作液。轻轻混匀。

C．亲和素-过氧化物酶复合物（ABC）工作液的准备：在使用前1小时内准备。

1．   根据每孔需要0.1ml计算总的用量（实配时应多配制0.1-0.2ml）。

2．   按10ul亲和素-过氧化物酶复合物（ABC）加ABC稀释液990ul的比例配制工作液。轻轻混匀。

D.  TMB显色工作液的准备：在使用之前30分钟，按TMB显色液A 9份加 TMB显色液B 1份的比例配制TMB显色工作液。

操作程序

1．     确定本次检测所需的已包被抗体的酶标板孔数目。

2．     将倍比稀释的标准品各0.1ml依次加入一排7孔中，1孔只加样品稀释液的作为对照。处理后的标本按100ul每孔加入。

3．     酶标板加上盖，37℃反应90分钟。

4．     反应后用自动洗板机吸去酶标板内的液体；或甩去酶标板内液体，再对着吸水纸拍几下。洗涤2次。

5．     将准备好的生物素抗体工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反应60分钟。

6．     0.01M TBS或0.01M PBS洗涤3次，每次浸泡1分钟左右。

7．     将准备好的ABC工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反应30分钟。

8．     0.01M TBS或0.01M PBS洗涤5次，每次浸泡1-2分钟左右。

9．     按每孔0.09ml依次加入已在37℃平衡30分钟的TMB显色液，37℃避光反应，反应过程中，要经常的观察，当肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度蓝色，后3-4孔差别不明显时，即可加入TMB终止液0.1ml/孔。（显色反应最长不要超过30分钟）。

10．  用酶标仪在450nm测定O.D.值。

11．  根据样品的吸光值在坐标上找出对应的浓度。用户也可以使用各种应用软件来计算。应记住由于样品稀释了N倍，其实际浓度应该×N。

操作程序总结：

准备试剂，样品和标准品

加入准备好的样品和标准品，37℃反应90分钟

洗板2次，加入生物素化抗体工作液，37℃反应60分钟

洗板3次，加入ABC工作液，37℃反应30分钟

洗板5次，加入TMB显色液，37℃反应

加入TMB终止液

30分钟之内读OD值

计算标本待测因子含量

检测范围：2000pg/ml→31.2pg/ml。

敏感性：  ＜2pg/ml

特异性：  系统和其它细胞因子无交叉反应。

保存：    -20℃ [短期内（如两周）可4℃]

有效期：  12个月（-20℃）。

用途：    用于体外定量分析液体标本（通用型）。