通过实验掌握有关培养基的一般原理，常用培养基的制备方法和用途；了解xx和xx的常用方法和适用范围，掌握干热xx和高压湿热xx的操作方法。

电炉、石棉网、铝锅、铁架、漏斗（带橡皮管的铁夹）、量杯、玻棒、标签、记号笔、纱布、未脱脂棉花、烧杯、小刀、药匙、粗天平、称量纸、三角瓶、试管。
马铃薯、蔗糖、牛肉浸膏、蛋白胨、琼脂。
1mol/ml HCL、1mol/ml NaOH、精密试纸（pH6.8－8.2）。
高压xx锅、烘箱、培养皿、铝盒（装培养皿用）、吸管、塑料枪头、长铁筒（装吸管用）、马铃薯葡萄糖琼脂（PDA）培养基、营养琼脂（NA）培养基、xx水。

（一）培养基制备

1．培养基的种类 培养基的种类很多，名称各异，成分也各不相同。
根据培养基的形态不同有液体培养基（培养液）、半固体培养基和固体培养基三大类。
根据营养物质的来源不同，可分为xx培养基、半合成培养基和合成培养基三类。
根据培养基的用途不同可分为生长繁殖培养基、加富（富集）培养基、贮存培养基、选择性培养基和鉴别培养基等。

2．常用培养基的制备

（1）马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）和马铃薯蔗糖琼脂（PSA）培养基 培养xx最常用的培养基，成分如下：
去皮马铃薯 200 g 葡萄糖或蔗糖 20g
琼脂 15－20g 水 1000 ml
配制方法：将马铃薯洗净去皮，称取200 g，切成小块（不必大小）放入锅中，加水1000ml，煮沸半小时，稍冷后用双层纱布过滤，在滤液中加蔗糖20g，加水补足到1000ml。配成的培养基一般呈酸性，用于培养xx，可以不必调pH。如配制固体培养基，在加蔗糖前先加15－20g琼胶加热熔化，{zh1}加入蔗糖，混匀并加水补是至1000ml，趁热分装在试管或三角瓶中。标准试管（15×150mm）分装量如下：一般用作斜面培养的每试管装培养基3－5ml，用作平面培养的每试管约10ml，加棉花塞后xx。
培养xx用的培养基必须调节其酸度值到中性（pH7．0左右）。
（2）牛肉汁蛋白胨培养基（NA） 是培养xx最常用的培养基，又称营养琼脂或肉汤培养基。成分如下：
酵母浸膏 1g 牛肉浸膏 3g
蛋白胨 5-10g 蔗糖（或葡萄糖） l0g
琼脂 15-20g 水 1000ml
pH7.0
配制方法：称取牛肉浸膏及蛋白胨溶于少量热水中备用，在其余水中加入琼脂，加热溶化后将牛肉浸膏和蛋白胨溶液加入混匀，然后加水补足到1000 ml，用NaOH或HCL调整至pH7.0，趁热分装，加棉花塞后xx。
（3） 玉米叶培养基 取一定数量的玉米叶片，洗净后剪成1㎝2左右的小块，放在250ml的三角瓶中，盛放量一般为三角瓶的1／3，然后加少量的水以保持湿润， 加棉花塞后xx。xx培养基一般不必调整pH。
（4）查氏（Czapek）培养基 查氏培养基是一种组合培养基，其成分如下：
NaNO3 2g K2HPO4 1 g
MgSO4·7H2O 0．5g KCl 0．5g
FeSO4 0．01g 蔗糖 30g
水 1000ml
（5）xx水的配制 蒸馏水（或自来水）经过xx处理即成xx水，是实验室用量{zd0}的必备品之一，常用于病原菌的分离、稀释、保湿等。一般每试管装10ml的蒸馏水。准备做系列稀释的xx水，每试管装9ml蒸馏水。三角瓶也可分装xx水。分装后的试管或三角瓶即可加棉花塞xx。如果自来水中含氯量太高，必须用蒸馏水xx备用，否则影响微生物生长。

配制好的培养液可直接通过漏斗分装在试管中或三角瓶中，加试管塞后xx。如是固体培养基，则应趁热用纱布过滤后立即通过漏斗分装在试管或三角瓶中。分装时应注意防止培养基粘附在管口或瓶口，如有粘附应用干净湿纱布仔细擦去。
供移植菌种用的斜面培养基，每支试管（150×15mm）盛有3－5ml培养基，倒培养皿（直径9cm）用的每支10ml。试管塞可以用未脱脂的棉花制成，也可用橡皮塞或泡沫塑料塞。
棉花塞的制作最普遍，其大小和松紧程度是否适当很重要，须反复练习才能制作出正确的棉塞，每人都应学会棉花塞的制作方法。通常选用未脱脂的经过弹松的棉花卷制。
培养基的xx一般都采用高压蒸气xx法，在1．1 kg ／ cm２（121℃）中保持20—30分钟。特殊的培养基（如牛乳、糖液等）才采用10磅10分钟的xx法，甚至采用过滤xx的方法。
经过xx的培养基和xx水等应及时从xx锅内取出。要搁置斜面的，应在室温下稍冷却后再搁置成斜面，否则表面的冷凝水太多，会影响微生物生长发育。

4． 培养基的存放

xx后的培养基{zh0}先放在30℃恒温箱中48-72小时，一方面可以使斜面上的水滴蒸发掉，又可以观察有无杂菌生长，经检查合格的培养基即可放在玻璃橱内备用，也可放在4℃冷橱中保存。不同种类的培养基应分类存放，写上标签，也可用不同色彩的试管帽或标签带作标记，以防混淆。

（二） xx

1．器具的xx 玻璃缸、玻片、玻棒、刀剪等小型器具，洗净干燥后可用消毒剂擦拭，淋洗或浸泡xx。常用的消毒剂有75％乙醇、5 ％煤酚皂（Lysol）、0．25％新洁尔灭等。
保湿接种材料所用的玻璃缸，及上面加盖的玻璃板，可先用酒精涂擦，再用点燃的酒精棉球擦一遍。利用酒精火焰xx，同时将多余的酒精烧去。
2．工作场所的xx 为创造无菌条件进行微生物的分离，工作场所必须先进行xx。首先要做好室内特别是工作台的清洁工作，然后用水喷雾除去悬浮在空中的尘埃和微生物。有条件的工作室可用水蒸气除尘。较小的场所如无菌操作箱内可放一杯水，利用煮沸杯水时产生的蒸气除尘。要求较严的场所如无菌室、无菌操作箱、超净工作台、培养箱等，可用漂白粉、甲醛、新洁尔灭、乙醇、石炭酸、煤酚皂等消毒剂的溶液擦洗或喷雾提高xx效果。必要时还可用紫外光灯照射xx。
工作场所的空气xx，可用石碳酸喷雾、甲醛熏蒸或硫磺熏蒸均能获得良好效果。
除尘xx后的工作台上铺上湿纱布，并有次序地放好所需工具后就可以按预定的程序进行无菌操作。
3．分离材料的表面xx 分离病原物所用的病组织材料要先经表面xx，去除或杀死粘附在表面的微生物，而保存病组织内部的病原物才能分离获得纯培养。
表面xx的方法是将病组织小块放在消毒剂中浸泡一定时间，取出沥去残留表面的消毒剂，用xx水清洗后分离。
常用的表面消毒剂有0．1％升汞溶液， 2－10％漂白粉溶液，或70％乙醇溶液等。
xx前将病组织小块在70％乙醇溶液中浸5－10秒钟，驱除病组织表面的气泡，再放入0．1％升汞溶液处理2－5分钟让病组织与升汞溶液充分接触发挥xx作用。升汞的毒性很大，配制好的溶液要加蓝色或红色染料标记。xx后要用xx水清洗3次。
如不用升汞水xx处理，也可用2—10％漂白粉溶液表面xx，处理的时间一般为2-10分钟，也有长达30分钟。因为漂白粉液中的氯气能自行挥发，xx后一般不必清洗，但如漂白粉溶液不够澄清，可以用xx水洗去残留在病组织上的漂白粉微粒。
从枝干或肉质组织上分离病原物时，常用70％乙醇溶液擦拭或浸泡xx。也可以用酒精棉球涂擦分离部位再通过火焰将酒精烧去，如此反复1－2次，也可达到表面xx甚至表面xx的效果。

（1）火焰xx：直接用酒精灯或煤气灯的火焰烧灼器皿用具，xx彻底。对于接种饵（环、针）、镊子等金属用具可烧灼至发红，在空气中冷却后即处于无菌状态。玻棒、剪刀等可采用蘸酒精后通过火焰数次的方法达到xx的目的。
一些大的容器也可用少许酒精棉球涂擦烧灼的方法达到xx或xx的要求。
（2）干热xx：使用干燥的热空气（176℃）保持1－2小时的方法杀死器皿中的微生物。各种玻璃器皿（培养皿、吸管、金属器具等）均可用干燥xx法xx，但所有棉纱或化学纤维制品、橡胶制品、塑料制品、含水的培养基等，均不能用干热xx法，否则会被烤焦变形、变性或炸裂。
使用电热干燥箱（烘箱）干热xx时，应注意下列几点：
①所有玻璃器皿要洗净、擦干或晾干后包装好，以防烤焦和炸裂。培养皿直接装入铝盒。单支吸管用纸卷好，再装入铁筒。
②烘箱中不能装得太满，以总容量的2／3为限，上部1／3应留有空隙。
③物品不能直接放在底板上，尽量不放纸和棉纱等易燃物品，非用不可时千万不能与箱壁接触。
④升温时要打开排气孔，在保温时关闭。xx后应让其自然降温至室温或低于60℃时才能取用，高温时不得打开箱门，以防炸裂。
（3）常压蒸气xx：此法是湿热xx的方法之一。材料放在不能密封的容器中，利用水蒸气杀死微生物。由于在常压下水蒸气的温度不超过100℃（在高海拔地区还要低些），因此并不能杀死所有微生物，但适用于糖溶液、牛奶等培养基的xx。巴斯德xx法（Pasteurization）和间隙xx法都是常压蒸气xx法。
间隙xx法是将培养基等材料在常压下煮沸30分钟，然后放在28－30℃下培养24小时，每天煮沸一次，连续煮三次的方法，可以杀死包括芽孢在内所有的微生物，但不破坏或改变培养基的性质
（4）高压（蒸汽）xx：此法是微生物学中应用最广、效果{zh0}的湿热xx法。微生物的营养细胞在开水中即可被杀死，但有芽孢的xx，常压下煮沸10分钟甚至2个小时也不死亡，要在加压的条件下提高温度才能全部杀死。通常都是在1．05 ka ／ cm 2或15磅/英寸2压力下保持20－30分钟。在此压力条件下温度可达到121．5℃，可以杀死xx芽孢。
水蒸汽的温度与压力高低呈正相关，但是如果高压xx锅内不全是水蒸汽而有空气，则同样压力条件下温度就低。
常见的高压xx锅有卧式、立式和手提式三种，压力锅上的压力表刻度有“公斤／平方厘米”（kg/cm2）和“磅／平方英寸”（lb/in2）两种。

使用高压锅的注意事项：

（1）水要加足以防烧干；
（2）加盖密封时对称地旋紧密封螺丝，用力要均匀，防止密封不好而漏气；
（3）加温时要打开放气阀，直至空气xx排空才关闭升压；
（4）xx结束后要逐渐地打开排气阀，缓缓放气降压，不能过快，以防培养基沸腾而冲出容器或弄湿棉塞。
放气降压打开锅盖要及时，否则相对延长了加压加热时间，易使培养基成分分解变质，引起pH值的改变或产生沉淀物，同时容器上的棉花塞因长时间闷在水蒸气中，易被沾湿而增加污染的机会。

2．过滤xx

一些不耐热的物质，在高温条件下会分解变质或失效，故不能用加热xx的方法，如xx素、血清、噬菌体、疫苗、糖类、氨基酸、维生素等，可采用特制的xx滤器。
此外，还有空气过滤器，所用的材料是活性炭和棉花或玻璃纤维等，超净工作台的空气就是经过过滤xx的纯净空气。

一定剂量的射线可以杀死微生物，常用的辐射处理方法有紫外线xx和电离辐射xx两类。
（1）紫外线xx　 波长在2600－2800Å（260－280nm）之间的紫外线具有很强的xx能力很低，在距离光源20-50厘米之内的微生物，经照射3－10分钟即可被xx杀死，但它的穿不能透过普通玻璃。紫外线xx力。紫外线xx灯广泛应用于超净工作台、无菌室、手术室、病房等场所的空气xx与xx。
（2）电离辐射　由放射性元素产生的射线如X-线、γ-线等都有很强的穿透力和xx力，各种罐头食品和中成药等材料均可用射线xx。一般使用的照射剂量为40－60 kGy（戈瑞）或400-600万拉德（rad）。

一些化学物质具有很强的xx和抑菌活性，如多种氧化剂或烷化剂，它们影响或破坏了微生物细胞的表面结构或内部生理活动，常用的如70％乙醇、0．1 ℅升汞、2-10％的漂白粉、0．5ppm氯气、3％的双氧水、3－8％甲醛、0．1-0．5％高锰酸钾、0．1—0．25％的新洁尔灭、1％碘酒、5％ 的石炭酸或煤酚皂等。此外还有0．2－0．5％过氧乙酸、生石灰、4％龙胆紫、0．01％硫柳汞等。特殊条件下还可用xxx或氯化苦、环氧乙烷等气体熏蒸做灭生性处理。

（1）为什么有的培养基要调节酸度值，有的可不调？
（2）为什么有时在1．1 kg/cm2xx30分钟后的培养基上仍然长出杂菌来？
（3）仔细思考日常生活中的保健知识，哪些与xx和xx有关？哪些与微生物的培养基有关？
（4）在没有超净工作台或无菌室的实验室分离或移植微生物时，应怎样处理才能减少污染？
（5）试比较水、自来水、井水、矿泉水、沙滤水、蒸馏水、重蒸馏水和xx水的异同（从微生物学的角度来分析）
（6）试设想培养皿的xx方法可有几种？

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