实验目的 一、观察动、植物活细胞内线粒体，液泡系的形态、数量与分布。 二、学习一些细胞器的超活染色技术。 实验原理 活体染色是指对生活有机体的细胞或组织能着色但又无害毒的一种染色方法。它的目的是显示生活细胞内的某些结构。而不影响细胞的生命活动和产生任何物理、化学变化以致引起细胞的死亡。活染技术可用来研究生活状态下的细胞形态结构和生理．病理状态。 根据所用染色剂的性质和染色方法的不同，通过把活体染色分为体内活染与体外活染两类。体内活染是以胶体状的染料溶液注入动。植物体内，染料的胶粒固定、堆积在细胞内某些特殊结构里，达到易于识别的目的。体外活染又称超活染色，它是由活的动、植物分离出部分细胞或组织小块，以染料溶液浸染，染料被选择固定在活细胞的某种结构上而显色。 活体染料之所以能固定、堆积在细胞内某些特殊的部分，主要是染料的“电化学”特性起重要作用。碱性染料的胶粒表面带阳离子，酸性染料的胶粒表现带有阴离子，而被染的部分本身也是具有阴离子或阳离子，这样，它们彼此之间就发生了吸引作用。但不是任何染料皆可以作为活体染色剂之用，应选择那些对细胞xx性或毒性极小的染料，而且总是要配成稀淡的溶液来使用。一般足以碱性染料最为适用，可能因为它具有溶解在类脂质(如卵磷脂、胆固醇等)的特性，易于被细胞吸收。詹纳斯绿B(Janus peen B)和中性红(neutral red)两种碱性染料是活体染色剂中最重要的染料，对于线粒体和液泡系的染色各有专一性。 实验用品 一、器材 显微镜、恒温水浴锅、解剖盘、剪刀、罐子、双面刀片、载玻片、凹面载玻片、盖玻片，表面皿，吸管，牙签、吸水纸。 二、试剂 1、Ringer溶液 氯化钠 氧化钾 0.258 氯化钙 蒸馏水 100ml 2、10%、1/3000中性红溶液 称取 临用前，取已配制的1％中性红溶液．取l呢原液lml，加入29ml Ringer溶液混匀，装入棕色瓶备用。 3、l%、1/5000詹纳斯绿B溶液 称取50rug詹纳斯绿B溶于 三、材料 3、洋葱磷茎内表皮细胞。 实验方法 一、线粒体的超活染色与观察 线粒体是细胞进行呼吸作用的场所，具形态和数量随不同物种、不同组织器官和不同的生理状态面发生变化。 詹纳斯绿B是毒性较小的碱性染性，可专一性地对线粒体进行超活染色，这是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保持氧化状态(即有色状态)，呈蓝绿色：而线粒体周围的细胞质中，这些染料被还原为无色的色基(即无色状态)。 (三)洋葱鳞茎表皮细胞线粒体的超活染色观察 1、用吸管吸取1/5000詹纳斯绿B染液，滴一滴于干净的载玻片上，然后，撕取一小片洋葱鳞茎内表皮，置于染液中，染色10--15min. 2、用吸管吸去染液，加一滴Ringer液，注意使内表皮组织展平，盖上盖玻片进行观察。 3、在高倍镜下，可见洋葱表皮细胞中央被一大液泡所占据，细胞核被挤至一侧贴细胞壁处．仔细观察细胞质中线粒体的形态与分布。 二、液泡系的超活染色与观察 中性红为弱碱性染料，对液泡系(即高尔基体)的染色有专一性，只将活细胞中的液泡系染红色，细胞核与细胞质xx不着色，这可能是与液泡中某些蛋白质有 |
