反相色谱柱的再生和清洗——4_青春脚步
2 C18色谱柱的日常使用与保养 uQKQC?w
在日常分离分析工作中,色谱柱使用是否得当,直接影响色谱柱的寿命。下面介绍C18柱在日常使用过程中应注意的事项。 @b,H'WvhfS
  (1)柱子在装卸、更换时,动作要轻,接头拧紧要适度。必须防止较强的机械振动,以免柱床产生空隙。 ? UAuUFueA
(2)
如果仪器用来做常规分析,样品种类有限,但分析次数多,则不妨为每一类常规分析配置1根专用柱,这样有助于延长柱子的寿命。 `z\hQ%1!F
(3)
如使用柱温控制装置时,应注意在通入流动相后才能升温。 < j:[1]\;mi;
(4)
流动相使用前需进行脱气处理,以免降低柱效和影响检测等。样品溶液需经适当的前处理及过滤,以减少柱污染和堵塞。 S(Afo`
(5)
在更换流动相种类时,应注意溶剂的互溶性,防止发生盐析现象。 Yi%l W br
(6)
柱子的实际操作压力应低于填装时的{zg}压力,{zh0}在{zg}压力一半以下。一般不超过20 593.96529 419.95 kPa。在低压力(≤14 709.975 kPa)的范围使用,可使柱保持长时期的高柱效。 @ W>@6E
(7)C18
色谱柱属非极性键合相色谱柱,流动相的pH值应严格控制在27之间,以免损坏柱子。 N:)x67,
(8)
在完成分离分析工作之后,不应立即停机,需及时对色谱分析系统进行冲洗,一般0.5 h以上,以除去色谱柱内的杂质。 7]vm tl­L
(9)
如果流动相中有盐类,首先用水充分清洗。如果是胺类(如三甲胺类或四丁基胺类)添加到流动相中,要用50%甲醇和0.05%磷酸溶液混合溶剂冲洗,不要只用水冲洗。 O~*i_t*i9{
(10)C18
一般用{bfb}甲醇作为保存溶剂,以防柱子干裂而损坏。严禁水或缓冲溶液长时间在色谱流路中保留。 Xe % J{

(11)
选用合适的C18保护柱,以保护分析柱免受杂质颗粒及不可逆吸附的干扰物的影响。保护柱内装填料颗粒度应与分析柱填料的颗粒度尽量一致。 l&ueD& *4&
(12)
柱的保存期不宜太长。短期不用的C18柱,用甲醇冲洗3060 min,然后将柱两端密封。较长期不用的柱子,一是采取定期冲洗,再密封的方法;二是在冲洗后,柱两端各装1只有一定容量的灌满甲醇的容器(只装一端也可),以补充在较长存放期间柱内溶剂的蒸发。 o'#& =h$_

3 C18色谱柱的维修 'G n>~m
  色谱柱在日常使用过程中,尽管保护严格,样品和流动相尽管经过前处理,但经过长时间的使用,仍然难以xx避免柱子受到污染,固定相流失、板结、柱床塌陷以及柱效下降等。有些可以通过维修,使部分柱效恢复。 =7< ‑JD}G
3.1
 柱污染再生技术 色谱柱污染后,可以用合适的溶剂冲洗,使柱效再生。C18柱常规的再生洗涤方法是:分别用甲醇、三氯甲烷、甲醇/水各60 mL依次通过色谱柱,再用{bfb}甲醇60 mL平衡色谱柱后封存,柱效将恢复正常。必要时,根据柱污染性质(如有机污染、盐类污染等),采用0.05 mol/L H2SO40.5 mol/L H3PO40.1 mol/L EDTA钠盐冲洗,然后再用水冲洗,{zh1}用{bfb}甲醇平衡色谱柱后封存。对于严重污染的C18柱,可采用水、甲醇、氯仿、乙烷依次冲洗后,按顺序倒过来再冲洗1次,每次所用溶剂60 mL,不接检测器,{zh1}用{bfb}甲醇平衡色谱柱封存。 &u2;S ?7m
3.2
 柱污染的修复 在柱污染再生无效或已知柱污染严重时,可以采用柱修补的方法解决,但柱污染深度不宜超过5 mm。方法是将特制小铲将污染部分挖去,再用与柱填料相同的固定相与流动相混合制成浆状,然后将浆状固定相仔细补入被挖去的部分(尽量使后填补的固定相接近原装的紧密程度),修平端面即可。修好的柱子如果柱头两端的筛板的孔径是一致的,可将柱子颠倒过来使用一般时间,目的是借助流动相冲洗作用,恢复柱床紧密程度。 ]o‑<]A [<
3.3
 柱塌陷的修复 柱塌陷的原因很多。对于塌陷不太严重时,如果柱头两端的筛板孔径是一致的,可将柱颠倒使用一般时间,即可恢复性能。当塌陷严重(5 mm左右)时,可采用柱污染的修复方法修补即可。


We cleaned the column by injecting 500μL of 1%SDS solution at 1 mL/min,followed by a 10-minute gradient from 5%to 95%acetonitrile with 0.1%(v/v)TFA.

After equilibrating to starting conditions,the peptide separation was restored(C).



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