液相色谱系统的许多问题都能在谱图上反映出来。其中有一些问题可以通过改变设备参数得到解决;而其他的问题必须通过修改操作程序来解决。对于色谱柱和流动相的正确选择是得到好的色谱图的关键。

A、峰拖尾

原 因

解决方法

1、筛板阻塞

a、反冲色谱柱 b、更换进口筛板 c、更换色谱柱

2、色谱柱塌陷

填充色谱柱

3、干扰峰

a、使用更长的色谱柱 b、改变流动相或更换色谱柱

4、流动相PH选择错误

调整PH值。对于碱性化合物，低PH值更有利于得到对称峰

5、样品与填料表面的溶化点发生反应

a、加入离子对试剂或碱性挥发性修饰剂b、更改色谱柱

B、峰前延

原 因

解决方法

1、柱温低

升高柱温

2、样品溶剂选择不恰当

使用流动相作为样品溶剂

3、样品过载

降低样品含量

4、色谱柱损坏

见A1、A2

C、峰分叉

原 因

解决方法

1、保护柱或分析柱污染

取下保护柱再进行分析。如果必要更换保护柱。如果分析柱阻塞，拆下来清洗。如果问题仍然存在，可能是柱子被强保留物质污染，运用适当的再生措施。如果问题仍然存在，入口可能被阻塞，更换筛板或更换色谱柱。

2、样品溶剂不溶于流动相

改变样品溶剂。如果可能采取流动相作为样品溶剂。

D、峰变形

原 因

解决方法

1、样品过载

减少样品载量

E、早出的峰变形

原 因

解决方法

1、样品溶剂选择不恰当

a、减少进样体积 b、运用低极性样品溶剂

F、早出的峰拖尾程度大于晚出的峰

原 因

解决方法

1、柱外效应

a、调整系统连接(使用更短、内径更小的管路)

b、使用小体积的流通池

G、K’增加时，脱尾更严重

原 因

解决方法

1、二级保留效应，反相模式

a、加入三乙胺(或碱性样品) b、加入乙酸(或酸性样品) c、加入盐或缓冲剂(或离子化样品) d、更换一支柱子

2、二级保留效应，正相模式

a、加入三乙胺(或碱性样品) b、加入乙酸(或酸性样品) c、加入水(或多官能团化合物) d、试用另一种方法

3、二级保留效应，离子对

加入三乙胺(或碱性样品)

H、酸性或碱性化合物的峰拖尾

原 因

解决方法

1、缓冲不合适

a、使用浓度50-100mM的缓冲液 b、使用Pka等于流动相PH值的缓冲液

I、额外的峰

原 因

解决方法

1、样品中有其他组份

正常

2、前一次进样的洗脱峰

a、增加运行时间或梯度斜率 b、提高流速

3、空位或鬼峰

a、检查流动相是否纯净 b、使用流动相作为样品溶剂 c、减少进样体积

J、保留时间波动

原 因

解决方法

1、温控不当

调好柱温

2、流动相组分变化

防止变化(蒸发、反应等)

3、色谱柱没有平衡

在每一次运行之前给予足够的时间平衡色谱柱

K、保留时间不断变化

原 因

解决方法

1、流速变化

重新设定流速

2、泵中有气泡

从泵中除去气泡

3、流动相选择不恰当

a、更换合适的流动相 b、选择合适的混合流动相

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L、基线漂移

原 因

解决方法

1、柱温波动。(即使是很小的温度变化都会引起基线的波动。通常影响示差检测器、电导检测器、较低灵敏度的紫外检测器或其它光电类检测器。)

控制好柱子和流动相的温度，在检测器之前使用热交换器图

2、流动相不均匀。(流动相条件变化引起的基线漂移大于温度导致的漂移。)

使用HPLC级的溶剂，高纯度的盐和添加剂。流动相在使用前进行脱气，使用中使用氦气。

3、流通池被污染或有气体

用甲醇或其他强极性溶剂冲洗流通池。如有需要，可以用1N的硝酸。(不要用盐酸)

4、检测器出口阻塞。(高压造成流通池窗口破裂，产生噪音基线)

取出阻塞物或更换管子。参考检测器手册更换流通池窗。

5、流动相配比不当或流速变化

更改配比或流速。为避免这个问题可定期检查流动相组成及流速。