免疫磁珠法分离细胞原理
免疫磁珠法分离细胞是基于细胞表面抗原能与连接有磁珠的特异性单抗相结合,在外加磁场中,通过抗体与磁珠相连的细胞被吸附而滞留在磁场中,无该种表面抗原的细胞由于不能与连接着磁珠的特异性单抗结合而没有磁性,不在磁场中停留,从而使细胞得以分离。 免疫磁珠法分为阳性分离法和阴性分离法 1、阳性分离法 磁珠结合的细胞就是所要分离获得的细胞 2、阴性分离法 磁珠结合不需要的细胞,游离于磁场的细胞为所需细胞 一般而言,阴性分离法的磁珠用量比阳性分离法的大,阳性分离法用行更多。 磁分离细胞的重要指标 纯度和得率,这取决于磁珠所连接单抗的特异性和磁珠大小(磁性),然而太大的磁珠会影响细胞活性,也无法直接上流式。 不同物种磁珠分离试剂 1、人 CD3,CD4,CD8,CD14,CD19; 2、小鼠 CD4,CD8a,CD14,CD45R/B220,CD90.2(Thy1.2),CD11b,Ly-6G。 利用Streptavidin连接的磁珠,只需选配biotin标记的所需单抗,就能分离更多种类细胞。
磁性微球在细胞标记和细胞分离上的应用 细胞分离是生物细胞学研究中一种十分重要的技术,高效的细胞分离在细胞分离是生物细胞学研究中一种十分重要的技术,高效的细胞分离在临床中是首要的、重要的步骤。这种细胞分离技术在医疗临床诊断上有广范的应用,例如xx癌症需在辐射xx前将骨髓抽出,且要将癌细胞从骨髓液中分离出来。传统的细胞分离技术主要采用离心法,利用密度梯度原理进行分离,时间长、效果差。随着合成磁性微球的发展,免疫磁性微球在分离细胞方面已经获得了快速的发展,经动物临床试验已获成功。其中最重要的是选择一种生物活性剂或者其他配体活性物质(如抗体、荧光物质、外源凝结素等),根据细胞表面糖链的差异,使其仅对特定细胞有亲和力,从而达到分离、分类以及对其种类、数量分布进行研究的目的。磁性微球用于细胞分离需要考虑以下几个因素;不与非特定细胞结合、具有灵敏的磁响应性、在细胞分离介质中不凝结。Jhunu等人用外源凝结素分别修饰聚苯乙烯磁性微球和白蛋白磁性微球,通过实验发现两者都有分离红细胞的能力,白蛋白磁性微球效率比聚苯乙烯磁性微球的效率高得多,但是成本高。Wedemeyer N等人则将高分子磁性微球结合不同的DNA而可以达到经济快速分离各种不同的细胞的目的。 利用磁流体或超顺磁性物质标记细胞已是体内细胞分离中日趋普遍的方法。多流体或超顺磁性物质标记细胞已是体内细胞分离中日趋普遍的方法。多数当前用的标记技术主要包括以下两种方法:将磁性微球连接到细胞表面;通过液相内吞、受体调解内吞或噬菌作用使生物相容性磁性微球内在化。有效而特异性的磁性微球细胞标记策略就是用能经过受体中介吞噬而被靶细胞吸收的配基,如单克隆抗体,对磁性纳米微球进行改性。靶向配基如:转铁蛋白、乳转铁蛋白、白蛋白、胰岛素、生长因子等已被用于修饰细胞表面,且这些配基稳定性好,并无免疫原性。 而目前发展迅速的细胞磁分离技术,设备简单,费用低廉,仪器操作简便,不影响细胞活性,且可实现连续分离,可克服荧光xx细胞分离法(fluorescence-activated cell sorting,FACS)和免疫亲和柱分离法中,仪器昂贵,设备复杂,处理量小,且收集的细胞活性低的缺点。 免疫磁性细胞分离法(Immunomagnetic cell separation methods)在细胞生物学中越来越成为专家学者关注的焦点。免疫磁性细胞分离依靠两种机制实现靶细胞分离。直接方法就是通过将亲和配基(即抗体)连接到磁性微球上,形成表面结合单克隆抗体的免疫磁性微球(immunomagnetic microspheres, IMMS),此抗体能特异性地与靶细胞结合并使之具有磁响应性,当此结合物受到外磁场作用时,可以使靶细胞与其它杂质分离。间接法就是先将自由亲和配基(抗体)加到细胞悬液中,孵化后没有结合配基的细胞被洗掉,而抗体-靶细胞复合物则通过标记有另一配基(即二抗)的免疫磁性微球捕获。
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