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反相色谱法用的乙腈与甲醇的区别

 

1、首先，乙腈价格高
    乙腈，特别是HPLC级的价格很高，但是，文献或LC厂家所示的条件，多用乙腈，这是为什么呢？现就此谈谈。

2、吸光度。
    乙腈HPLC级的小。乙腈和甲醇的市销HPLC级和优级的吸收光谱中，乙腈HPLC吸收最小（特别是在短波长上小）。所谓HPLC级是除去具有吸收UV的杂质，在规定的波长上吸光度限制在规格值以内。在UV检测时，产生的噪声小，因此在进行UV短波长上的高灵敏度分析时乙腈HPLC级最适宜。另外，在UV检测中的梯度基线上也是乙腈HPLC级产生鬼峰少，虽然，其他与水相溶性高的有机溶剂有各种各样，但很难能找到比乙腈HPLC级吸收更小的。另外，甲醇的HPLC级和优级，虽然所得的光谱相差不大，但是优级不能保证吸光度，有可能产生偏差，价格也相差不大，所以尽量使用HPLC级。

3、压力。
    乙腈低，柱内承受的压力，根据有机溶剂的种类或混合比率的不同而异，水/乙腈，水/甲醇混合液的比率与输液压力的关系中,甲醇与水混合，压力增高，而乙腈同样与水混合且并不如此。所以，乙腈一方，在同样的流速下不在柱内加上多余的压力。从上述两项，可以确认使用乙腈的意义，那么，甲醇除了价格以外，还有没有其化优点呢?

4、洗脱能力。
    一般而言，乙腈较强。乙腈和甲醇分别用同样的比率与水混合时，一般情况下，乙腈的洗脱能力强。特别是混合比率低时，从xxx和苯酚的洗脱来看，获得同样的保留时间，乙腈的比率，只需甲醇的比率的一半以下即可。另一方面，有机溶剂{bfb}或与此极接近时，从胡萝卜素和胆甾醇来看，常常都是甲醇的洗脱能力强。混合比在50比1等较为特殊时，调制的误差大，影响保留时间，或平衡化的时间长，乙腈遇到这种情况时，用甲醇的10比1混合代替乙腈，这样操作方便些。溶剂受温度影响时，不采用容器定量，而采用重量的方法(考虑比重)，可使混合比的误差减小。

5、分离(洗脱)的选择性。
    两者的差异，乙腈和甲醇在分离的选择性上不同。由于有机溶剂分子的化学性质(甲醇和乙醇是质子性，乙腈和四氢呋喃是非质子性)不同所致。因此，在用乙腈类不能获得分离的选择性，就试用甲醇类看看。

6、峰形。
    用时出现差异。像水杨酸化合物(在邻位上具有羧基或甲氧基的苯酚化合物)等，用乙腈类时拖尾大，用甲醇类可抑制。可是，一般情况下，聚合物类反相柱，与硅胶柱相比，更具有峰形宽的倾向，特别是用聚苯乙烯分析柱芳香族化合物等时常见。这在流动相是甲醇时非常显著，而用乙腈时不明显。为此，用聚合物类反相用柱时建议采用后者(乙腈类)，这是因为乙腈使凝胶膨润。

7、流动相的脱气，乙腈类要注意。
    混合溶剂的置制，不说在LC装置内，只谈预先在流动相瓶内进行时，(等浓度系统)。甲醇与水混合时发热，多余的溶解空气较易变为脱出气泡(脱气容易)。而乙腈由于吸热冷却，随着慢慢回到室温，产生气泡，所以要考虑脱气(加温搅拌，过滤膜，He脱气等)。

8、结论
    以上反相色谱法流动相常用的乙腈和甲醇进行了比较。粗略地讲是，使用乙腈HPLC级{zh0}，在选择性，峰形差时试用甲醇HPLC，但根据各种不用性质设计分析条件也是必要的。

 

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针对乙腈涨价的对应方案：使用甲醇代替乙腈做流动相

针对乙腈涨价的对应方案：使用甲醇代替乙腈做流动相

[ 2009-2-6 ]

HPLC的流动相并不是单一的，如果选择流动相不当，不仅无法得到另人满意的分离效果，也会是色谱柱受到损坏，根据情况的不同也可能引起其他事故。选择流动相的时候，我们通常应该考虑到以下因素： 能够适当溶解样品，并且与非样品不发生反应 与其他使用的流动相能混合 粘度低，不为柱子增添其他负担 用UV检测器检测时，样品的检测波长里没有UV的吸收 用RI检测器检测时，样品的屈折率与流动相的曲折率差别明显 沸点与分析温度之间要有一定差距，避免产生气泡 不容易引燃，爆炸 对人体xx 廉价 大多数用户都会选择乙腈作为流动相，因为它符合以上大部分的条件。对此，我们可以稍微作一下分析。 水与有机溶剂的混合比引起的压力变化 作为HPLC的流动相，如果选择粘度较高的溶剂，会在分析时产生很高的压力，导致柱子的损坏加快。在有机溶剂与水混合的时候，根据混合比例的不同，所产生的粘度（=压力）的比例也会不同。以下图的甲醇为例，{zg}可达1.8倍于{bfb}水溶液时候的压力。 考虑的色谱柱的寿命，在选择流动相时，我们应该尽量避免选择高压力的流动相；但若已经在使用了这样的流动相的情况下，我们依然可以通过选择低压力的色谱柱来弥补流动相在压力方面表现的不足。 HPLC中使用的有机溶剂的紫外吸收特性 UV检测器或荧光检测器使用的时候需要注意的是，由于溶剂的不同可测定的波长范围也有所不同，使用的溶剂自身也有吸收特性，导致基线漂移，或者样品不出峰的情况。在下图中列出了HPLC常用的一些有机溶剂的紫外吸收特性，如果说UV检测中最普遍被用到的波长为254nm的话，苯（倒数第三行）与甲苯（倒数第二行）的透过率就很显然不符合要求。而乙腈（{dy}行）和甲醇（第三行）都能符合要求。 关于溶剂的等级   不同等级的甲醇的紫外吸收曲线图，基本上等级对于甲醇在紫外吸收度上的影响不大 右图是乙腈的吸光度显示图。与甲醇不同的是，特级乙腈和色谱级乙腈在低波长段里的吸光度大不相同，如果在这个波长段的话一定要谨慎选择溶剂的等级。 根据溶剂的等级不同，紫外吸收波长的差异也不同。下图通过只能低波长段检测的脂肪酸的甲脂类，对其进行梯度分析，确定了杂质对分析的实际影响。可以看到，色谱级的乙腈没有产生太大的基线漂移，而特级乙腈的基线则是相当的不稳定。 色谱级乙腈 特级乙腈     总结： 作为HPLC的流动相，乙腈在各方面都比较出色，但是色谱级的乙腈成本较高，普通等级的乙腈效果又远不如色谱级，而且有毒性也是乙腈的一个缺点。 甲醇没有毒性，价格比起乙腈也相当廉价，在吸光度等各方面的表现也毫不逊色。尽管使用时对柱子的压力较大，但若能使用普遍压力较低的色谱柱，依然可以达到理想的分析效果。

总结：
作为HPLC的流动相，乙腈在各方面都比较出色，但是色谱级的乙腈成本较高，普通等级的乙腈效果又远不如色谱级，而且有毒性也是乙腈的一个缺点。

甲醇没有毒性，价格比起乙腈也相当廉价，在吸光度等各方面的表现也毫不逊色。尽管使用时对柱子的压力较大，但若能使用普遍压力较低的色谱柱，依然可以达到理想的分析效果。

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