细胞培养之实验室准备[转]_雪地里的稻草人_新浪博客
准备室的设备:
单蒸馏水蒸馏器、双蒸馏水蒸馏器、酸缸、烤箱、高压锅、储品柜(放置未xx物品)、储品规(放置xx过的物品)、包装台。
配液室的设备:
扭力天平和电子天平(称量药品)、PH计(测量培养用液PH值)、磁力搅拌器(配置溶液室搅拌溶液)。 
培养室的设备:
液氮罐、储品柜(存放杂物)、日光灯和紫外灯、空气净化器系统、低温冰箱(-80℃)、空调、二氧化碳缸瓶、边台(书写实验记录)。必须放在无菌间的设备:离心机(收集细胞)、超净工作台、倒置显微镜、CO2孵箱(孵育培养物)、水浴锅、三氧xxxx机、4℃冰箱(放置serum和培养用液)。
无菌操作
无菌室的xx: 
1.定期打扫无菌室:每周打扫一次,先用自来水拖地、擦桌子、超净工作台等,然后用3‰来苏尔或者新洁尔灭或者0.5%过氧乙酸擦拭。
2.CO2孵箱(培养箱)xx:先用3‰新洁尔灭擦拭,然后用75%酒精擦拭或者0.5%过氧乙酸,再用紫外灯照射
3.实验前xx:打开紫外灯、三氧xx机、空气净化器系统各20-30分钟
4.实验后xx:用75%酒精(3‰新洁尔灭)擦拭超净台、边台、倒置显微镜的载物台。 
实验人员的无菌准备:
1.肥皂洗手。 
2.穿好隔离衣、带好隔离帽、口罩、放好拖鞋
3.用75%酒精棉球擦净双手.
无菌操作的演示: 
1.凡是带入超净工作台内的酒精、PBS、培养基、胰蛋白酶的瓶子均要用75%酒精擦拭瓶子的外表面
2.靠近酒精灯火焰操作。
3.器皿使用前必须过火xx  
4.继续使用的器皿(如瓶盖、滴管)要放在高处,使用时仍要过火。
5.各种操作要靠近酒精灯,动作要轻、准确,不能乱碰。如吸管不能碰到废液缸。
6.吸取两种以上的使用液时要注意更换吸管,防止交叉污染.
器械的清洗和xx
玻璃器械洗消:
一、新的玻璃器皿的洗消:
1.自来水刷洗,除去灰尘。
2.烘干、泡盐酸:烤箱中烘干,然后再浸入5%稀盐酸中12小时以除去脏物、铅、砷等物。
3.刷洗、烘干:12小时后立即用自来水冲洗,再用洗涤剂刷洗,自来水冲干净后用烤箱烘干。
4.泡酸、清洗:用清洁液(重铬酸钾120g:浓硫酸200ml:蒸馏水1000ml)浸泡12小时,然后从酸缸内捞出器皿用自来水冲洗15次,{zh1}蒸馏水冲洗3-5次和用双蒸水过3次。
5.烘干、包装:洗干净后先烘干,然后用牛皮纸(油光纸)包装。
6.高压xx:包装好的器皿装入高压锅内盖好盖子,打开开关和安全阀,当蒸气成直线上升时,关闭安全阀,当指针指向15磅时,维持20-30分钟。
7.高压xx后烘干
二、旧的玻璃器皿的洗消:
1.刷洗、烘干:使用过的玻璃器皿可直接泡入来苏尔液或洗涤剂溶液中,泡过来苏尔溶液(洗涤剂)的器皿要用清水刷洗干净,然后烘干。
2.泡酸、清洗:烘干后泡入清洁液(酸液),12小时后从酸缸内捞出器皿立即用自来水冲洗(避免蛋白质干涸后粘附于玻璃上难以清洗),再用蒸馏水冲洗3次。
3.烘干、包装:洗干净的器皿烘干后取出用牛皮纸(油光纸)等包装,以便于xx储存及防止灰尘和再次被污染。
4.高压xx:包装好的器皿装入高压锅内,盖好盖子,打开开关和安全阀,随着温度的上升安全阀冒出蒸气,当蒸气成直线冒出3-5分钟后,关闭安全阀,气压表指数随之上升,当指针指向15磅时,调节电开关维持20-30分钟即可。(玻璃培养瓶xx前可将胶帽轻轻盖上)
5.烘干备用:因为高压xx后器皿会被蒸气打湿,所以要放入烤箱内烘干备用。
金属器械洗消:
  金属器皿不能泡酸,洗消时可先用洗涤剂刷洗,后用自来水冲干净,然后用75%酒精擦拭,再用自来水,然后用蒸馏水冲洗,再烘干或空气中晾干。放入铝制盒内包装好在高压锅内15磅高压(30分钟)xx,再烘干备用。
橡胶和塑料:
橡胶和制品通常处理方法是:先用洗涤剂洗刷干净,再分别用自来水和蒸馏水冲干净,再用烤箱烘干,然后根据不同品质进行如下的处理程序:
1 . 针式滤器帽不能泡酸液,用NaOH泡6-12小时,或者煮沸20分钟,在包装之前要装好滤膜两张,安装滤膜时注意光面朝上(凹向上),然后将螺旋稍微拧松一些,放入铝盒中在高压锅内15磅30分钟xx,再烘干备用。注意在超净台内取出使用时应该立即将螺旋旋紧。
2. 胶塞烘干后用2%氢氧化钠溶液煮沸30分钟(用过的胶塞只要用沸水处理30分钟),自来水洗净,烘干。然后再泡入盐酸液30分钟,再用自来水,蒸馏水,三蒸水洗净,烘干。{zh1}装入铝盒内高压xx,烘干备用。
3. 胶帽,离心管帽烘干后只能在2%氢氧化钠溶液中浸泡6-12小时(切记时间不能过长),自来水洗净,烘干。然后再泡入盐酸液30分钟,再用自来水,蒸馏水,三蒸水洗净,烘干。{zh1}装入铝盒内高压xx,烘干备用。
4. 胶头可用75%酒精浸泡5分钟,然后紫外照射后使用即可。
5.塑料培养瓶,培养板,冻存管:
6.其他xx方法:有的物品既不能干燥xx,又不能蒸气xx,可用70%酒精浸泡xx。塑料培养皿打开盖子,放在超净台台面上,直接暴露在紫外线下xx。也可用氧化乙烯xx塑料制品,xx后需要用2—3周时间洗除残留的氧化乙烯。用20000—100000rad的r射线xx塑料制品效果{zh0}。
为了防止清洗器材已xx与末xx发生混淆,可在纸包装后,用密写墨水作好标记。其法即用沾水笔或毛笔沾以密写墨水,在包装纸上作一记号,平时这种墨水不带痕迹,一经高温,即出现字迹,从而可以判定它们是否xx。密写墨水的配制:氯化钻(CoC12•6H2o)2g,30%盐酸10m1,蒸馏水88m1。
注意事项:
1.严格执行高压锅的操作规程:高压xx时,先检查锅内是否有蒸馏水,以防高压时烧干,水不能过多因为其将使空气流畅受阻,会降低高压xx效果。检查安全阀是否通畅,以防高压时爆炸。 
2.安装滤膜时注意光面朝上:注意滤膜光滑一面是正面,要朝上,否则起不到过滤的作用。
3.注意人体的防护和器皿的xx浸泡:A.泡酸时要戴耐酸手套,防止酸液溅起伤害人体。B.从酸缸内捞取器皿时防止酸液溅到地面,会腐蚀地面。C.器皿浸入酸液中要xx,不能留有气泡,以防止泡酸不彻底。
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