和常用电泳仪简答题

1．简述电泳、电泳的概念。

答：电泳是指带电荷的溶质或粒子在电场中向着与其本身所带电荷相反的移动的现象。利用电泳现象将多组分物质分离、分析的叫做电泳。

2．简述电泳的基本原理。

答：物质分子在正常情况下一般不带电，但是在一定的物理作用或化学反应条件下，某些物质分子会成为带电的离子（或粒子），不同的物质，由于其带电性质、颗粒形状和大小不同，因而在一定的电场中它们的移动方向和移动速度也不同，因此可使它们分离。

3．影响电泳的外界因素有哪些？

答: 外界因素有电场强度、溶液的pH值、溶液的离子强度、电渗作用、粒子的迁移率、吸附作用等。

4．临床常用的电泳分析方法有哪些？

答：纸电泳、醋酸纤维素薄膜电泳、凝胶电泳、等电聚焦电泳、等速电泳、双向凝胶电泳（二维电泳）、免疫电泳。

5．溶液的Ph值对电泳速度有何影响？

答：溶液的pH值决定了带电质点的解离程度，也决定了物质所带电荷的多少。对蛋白质、氨基酸等两性电解质而言，pH值离等电点越远，颗粒所带的电荷越多，电泳速度也越快。反之，则越慢。

6．何谓蛋白质的等电点（pI）？

答：当溶液的酸碱度处于某一特定pH值时，它将带有相同数量的正、负电荷（即净电荷为零），致使蛋白质分子在电场中不会移动，称此特定的pH值为该蛋白质的等电点。

7．何为粒子的迁移率？迁移率与哪些因素有关？

答：迁移率为带电粒子在单位电场强度下的移动速度，常用μ来表示。主要与颗粒直径、形状以及所带的净电荷量等有关。

8．电泳根据分离原理如何分类？

答：根据分离原理可分为移界电泳、区带电泳、等速电泳、等电聚焦、免疫电泳等。

9．通常所说的电泳可分为哪些？

答：通常所说的电泳可分为主要（分离系统）和辅助（系统）。主要指电泳仪电源、电泳槽。辅助指恒温循环冷却装置、伏时积分器、凝胶烘干器等，有的还有分析装置。

10．电泳对支持物一般有何要求？

答：不溶于溶液，不导电，吸液量多而稳定，不带电荷，没有电渗，不吸附蛋白质等其它电泳物质，热传导度大，结构均一而稳定，分离后的成份易析出等。

11．醋酸纤维素薄膜电泳的特点是什么？

答：分离速度快、电泳时间短、样品用量少。因此特别适合于病理情况下微量异常蛋白的。

12．简述聚丙烯酰胺凝胶电泳特点及应用范围。

答：优点：是具有强度好、弹性大、透明、化学稳定性高、无电渗作用、简单、样品量小（1～100μg）、分辨率高等。

应用范围：可用于蛋白质、核酸等分子大小不同的物质的分离、定性和定量分析。还可结合去垢剂十二烷基硫酸钠（SDS），以测定蛋白质亚基的相对分子质量。

13．简述等电聚焦电泳法的原理、特点。

答：原理：不同的蛋白质等电点不同，如果分子处于pH和等电点一致的溶液中，则泳动就停止进行。如果溶液内的pH是位置的函数，或者说有一个pH的位置梯度，那么在一个稳定连续的线性pH梯度的溶液（两性载体电解质）中进行分离，每一种被分离的两性物质都移向与它的等电点相一致的pH位置，在那里不再移动（称为聚焦）。由于在这点净电荷（正负抵消）为零，因而又称等电聚焦。

特点：①使用两性载体电解质，在之间形成稳定的、连续的、线性的pH梯度。②由于“聚焦效应”，即使很小的样品也能获得清晰的、鲜明的区带界面③电泳速度快。④分辨率高。⑤加入样品的位置可任意选择。⑥可用于测定蛋白质类物质的等电点。⑦适用于中、大分子量（如蛋白质、肽类、同工酶等）生物组分的分离分析。

14．等速电泳的特点是什么？

答：特点：一是所有谱带以同一速度移动，二是区带锐化，在平衡状态下，如果有离子改变速度扩散进入相邻区带，界面清晰，能显示很高的分离能力。三是区带浓缩，即组分区带的浓度由前导缓冲液决定，一旦前导缓冲液浓度确定，各区带内离子的浓度亦即为定值。

15．简述双向凝胶电泳（二维电泳）的工作原理。

答：{dy}维采用等电聚集（isoelectric focusing, IEF）电泳。当把蛋白质加人到含有pH梯度的载体时，如果蛋白质所在位置的pH值与其等电点不同，则该蛋白质会带一定量的正电荷或负电荷，在外加强电场的作用下，蛋白分子就会分别向正极或负极泳动，直到pH值与其等电点相等的位置，蛋白质不再泳动，而浓缩成狭窄的区带。

第二维采用了十二烷基硫酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）。蛋白质的电泳迁移率取决于各种蛋白质所带的静电荷、分子量的大小以及形状的不同。SDS-PAGE就是按蛋白质分子量的大小使其在垂直方向进行分离。蛋白质样品经过双向凝胶电泳两次分离后，其结果不再是条带状，而是呈现为斑点状。

16．免疫电泳的优点是什么？该方法的研究目是什么？

答：该优点：一是加快了沉淀反应的速度，二是将某些蛋白组分跟据其带电荷的不同而将其分开，再与抗体起反应，从而使本法更为微量化，多样化，使其应用范围日益扩大。

该方法可以用来研究：①抗原和抗体的相对应性；②测定样品的各成分以及它们的电泳迁移率；③根据蛋白质的电泳迁移率，免疫特性及其它特性，可以确定该复合物中含有某种蛋白质；④鉴定抗原或抗体的纯度。

17．简述毛细管电泳基本工作原理和毛细管电泳的特点。

答：毛细管电泳基本工作原理：毛细管电泳又称高效毛细管电泳（HPCE ）或毛细管分离法。溶液中的带电粒子以高压电场为驱动力，沿毛细管通道，以不同速度向与其所带电荷相反的方向迁移，并依据样品中各组分之间淌度和分配行为上的差异而实现分离。

毛细管电泳的特点：高灵敏度，高速度，高分辨率，样品少，成本低，易自动化，应用范围广。

18．毛细管电泳分离模式有哪些？

答：毛细管电泳有多种分离模式，如毛细管区带电泳，毛细管胶束电动色谱，毛细管凝胶电泳、等电聚焦毛细管电泳、毛细管等速电泳和毛细管电色谱等。

19．简述毛细管区带电泳的应用范围。

答：毛细管区带电泳(CZE)适用于小离子、小分子、肽类、蛋白质的分离，在一定限度内适合于DNA的分离。应用CZE还可分离人血清中氨甲喋呤（MTX）及其代谢产物7–羟基氨甲喋呤（7–OH–MTX）。

20．简述毛细管电泳仪的基本结构。

答：毛细管电泳仪的结构并不复杂，主要有高压源、毛细管柱、器，以及两个供毛细管两端插入而又可和电源相连的缓冲液槽。输出讯号和记录装置相连，记录装置可以是一个普通的、积分仪，也可以是有控制功能的计算机工作站。

21．高效毛细管电泳的应用范围有哪些？

答：应用范围：从小分子、无机离子到生物大分子，甚至整个细胞，从带电粒子到中性分子都可用高效毛细管电泳方法进行分析。在临床医学中，根据被测对象的不同，可分为xx分析、蛋白质、多肽及氨基酸分析、DNA、RNA分析、体内代谢产物分析、离子分析、xx分析、酶及同工酶分析、维生素分析、糖类等。

22．理想的毛细管柱条件是什么？

答：理想的毛细管柱应是化学和电惰性的，紫外和可见光可以透过，易于弯曲，有一定的柔性，耐用而且便宜。

23．对各种器方法进行比较。

答：各种器方法的比较见下表：

                                                                                               

方法     质量极限   浓度极限                    备  注

                       （Mol）         （mol/L）                                              

紫外          10-13～10-16      10-5～10-8             用得最多，通用性强，扫瞄迅速

荧光          10-15～10-17                                                               灵敏，但样品通常需衍生

激光诱导荧光    10-15～10-20             10-14～10-16                            极其灵敏，但样品通常需衍生，费用高

安培          10-18～10-19             10-10～10-11              用得多，灵敏，简单，提供信息少

电导          10-15～10-18      10-7～10-8             通用，需要专门元件和毛细管改性柱

质谱          10-16～10-17           10-8～10-9                               灵敏，鉴别能力强，提供结构信息

拉曼       2×10-15                                                                   通用，灵敏度较相应的直接紫外低      

24．临床进行尿蛋白电泳的主要目的是什么？

答：临床进行尿蛋白电泳的主要目的是：①确定尿蛋白的来源；②了解肾脏病变的严重程度（选择性蛋白尿与非选择性蛋白尿），从而有助于诊断和预后的判断。

25．怎样进行电泳仪的保养？

答：自动化电泳仪每天使用完后，像其他自动分析仪一样，需要严格的保养。每天保养的重点应当是的，每天电泳工作完成后，应当用干滤纸擦净，避免缓冲盐沉积于上或酸碱对的腐蚀。每月保养的重点应是扫描系统的比色滤镜及光源。只有才能这样获得较高准确度和xx度电泳分析结果。

26．简述临床上进行电泳分析时易出现的问题。

答： 临床上进行电泳分析时，往往由于不能全面了解电泳仪的结构和原理、电泳结果的意义，较容易出现以下问题：①已知标本不知用何电泳进行分析以达到诊疗目的，如1份血标本，要想分析总的蛋白分布情况、酶学性质或某种特定蛋白定性等，是用血清蛋白电泳还是同工酶电泳分析等，不清楚；②电泳分析的盲目选择，如血清蛋白电泳盲目选择，五个区带的基本成分都搞不清，导致有意义的区带出现而不解其义；③对电泳分析的局限性了解不够，导致欲了解某一组份蛋白而选错方法，如欲选择普通血清蛋白电泳来了解前白蛋白的性质。

27．简述毛细管电泳法进样的注意事项。

答：（1）毛细管一旦插入样品溶液，应立即开始进样操作，否则将会产生毛细作用及虹吸现象，引起误差并使谱带展宽；

（2）如果和毛细管接触，毛细作用可能导致进样时样品区带出现间断现象，使定量精度降低，区带展宽，甚至使峰分裂；

（3）只要器的灵敏性能提供足够的信号强度，进样区带越小越好，加大进样区带会使校效和分离度降低；

（4）注意温度对进样体积的影响；

（5）样品溶液中的溶剂必须是能和运行缓冲液互溶的并不引起后者的沉淀，另外，前者的离子强度要低于后者的离子强度。

28．简述等速电泳工作原理。

答：它采用两种不同浓度的电解质组成，一种为前导电解质，充满整个毛细管柱；另一种为尾随电解质，置于一端的电泳槽中。前导电解质的迁移率高于任何样品组分，后者则低于任何样品组分，被分离的组分按其不同的迁移率夹在中间，在强电场的作用下，各被分离组分在前导电解质与尾随电解质之间的空隙中移动，实现分离。

29．简述毛细管等速电泳的工作原理。

答：。同等电聚焦电泳一样，等速电泳在毛细管中的电渗流为零，缓冲系统由前后两种不同浓度的电解质组成。毛细管内首先导入具有比被分离各组分高电泳淌度的前导电解质，然后进样，随后再导入比各分离组份低电泳淌度的尾随电解质，在强电场的作用下，各被分离组分在前导电解质与尾随电解质之间的空隙中发生分离。