课程代码：4192

{dy}部分 课程性质与设置目的

一、课程性质与特点

本课程是高等教育自xxx生物技术专业的一门综合实验课程。该课程以分组实验为主，通过辅助以多媒体教学和演示实验，向学生介绍生物实验室常用仪器设备（酸度计、分光光度计、冷冻高速离心机、电泳设备等）的基本原理、构造、操作要点以及安全注意事项；课程所选择实验突出代表性与实用性，即所选择的实验直接与科研实验接轨，其中包括一定比例的综合与设计实验，力图通过实验教学锻炼学生实际动手能力和实验设计能力以及协作精神；同时，向学生介绍常用生物软件（Origin，Sigmaplot等）的特点及操作方法等。本大纲是根据高等教育自xxx生物技术专业培养目标编写的，立足于培养高素质人才，适应生物技术专业的培养方向。

二、课程目标与基本要求

本课程结合生物实验室现有实验条件与现代生物技术发展趋势，在学生即将毕业走向科研与工作岗位之前，主要通过实验教学，同时辅助以理论教学，使学生掌握生物实验室常用仪器设备的原理、操作流程以及注意事项；掌握生物大分子分离、纯化、鉴定过程中涉及到的常用技术的原理、适用范围及基本操作步骤等；此外，通过自主设计实验和综合性实验，培养学生的实验设计能力、结果分析能力以及团结协作精神。

第二部分  课程内容与考核目标

{dy}章   缓冲液

一、学习目的与要求

通过本章学习，理解缓冲液的重要性，缓冲介质的概念，缓冲范围的界定，缓冲液的配置方法等；了解生物实验常用缓冲介质的性质及使用注意事项，了解台面式酸度计的原理及操作注意事项。

二、考核知识点与考核目标

（一）缓冲液（重点）

      识记：缓冲液的概念，缓冲范围的界定。

      理解：缓冲范围与缓冲介质pK值关系。

      应用：缓冲溶液的配制。

（二）常见缓冲介质（次重点）

      识记：磷酸缓冲液、TRIS缓冲液的功能。

      理解：缓冲液功能，缓冲介质浓度与生物大分子间的辩证关系。

      应用：蛋白提取液的配制。

（三）酸度计的使用（一般）

      识记：酸度计使用流程、保养与注意事项。

      应用：使用酸度计测定溶液pH值。

三、实验内容

实验一  缓冲液的性质（演示酸度计的使用）

第二章   分光光度技术

一、学习目的与要求

通过本章学习，理解掌握吸收值（A），透过率（T）的概念及换算关系，朗伯－比尔定律的内容及使用范围，使用分光光度计测定吸收值及吸收光谱的操作步骤等；了解各种生物大分子浓度测定法的xx度及在分离纯化流程中的使用位置，标准直线法在生物定量实验中的重要性等。

二、考核知识点与考核目标

（一）吸光度（A）（重点）

      识记：吸光度与透过率的概念及换算关系。

      理解：测定吸光度的流程。

（二）朗伯－比尔定律（重点）

      识记：朗伯－比尔定律的内容与适用范围。

      理解：摩尔消光系数（ε）及其决定因素。

      应用：使用该公式直接测定物质浓度，使用标准直线测定物质浓度的基本流程及注意事项。

（三）分光光度计的使用（次重点）

      识记：分光光度计基本构造、使用流程，不同材质比色皿的选择原则。

      应用：使用分光光度计测定光度值与吸收光谱。

三、实验内容

实验二  岛津mini-1240 / UV-2550分光光度计的使用

实验三  蛋白浓度测定（一）－紫外法

实验四  蛋白浓度测定（二）－Bradford法

实验五  紫外法鉴定核酸纯度以及浓度测定

第三章   离心技术

一、学习目的与要求

通过本章学习，了解离心力、相对离心力（g）的概念及相互换算，沉降系数的概念及单位（S），角转头、水平转头的特征及使用范围，冷冻高速离心机的构造与基本操作，差速离心法、密度梯度离心法分离细胞器与大分子的实验流程，不连续密度梯度的制备方法。

二、考核知识点与考核目标

（一）离心力与相对离心力（重点）

      识记：离心力与相对离心力的概念及换算关系，沉降系数的概念及单位。

      理解：决定沉降系数的因素。

      应用：科技论文中对离心力的准确描述方式。

（二）高速离心法（次重点）

      识记：差速离心法、密度梯度离心法的概念及使用范围，常见密度梯度介质（蔗糖、氯化铯等）。

      理解：密度梯度介质选择的基本原则。

      应用：差速离心法、密度梯度离心法的基本流程及注意事项。

（三）离心机的使用（次重点）

识记：离心机的基本构造、使用流程，角转头、水平转头的特点。

      理解：不同离心法对转头的要求，高速与超速离心机的界定及差别。

      应用：离心机的熟练使用。

三、实验内容

实验六  冷冻高速离心机的使用

实验七  Beckman 超速离心机的使用（演示）

实验八  差速离心法提取叶绿体及其吸收光谱测定

实验九  蔗糖密度梯度离心法提取叶绿体

第四章   电泳技术

一、学习目的与要求

通过本章学习，理解电泳的概念（阳极、阴极电泳，变性、非变性电泳）及基本操作流程，聚丙烯酰胺及琼脂糖在电泳中的应用，不连续电泳（前导离子、尾随离子的概念）的原理及优点，SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白分子量的原理；了解等电聚焦、双向电泳、毛细管电泳的基本原理。

二、考核知识点与考核目标

（一）电泳相关概念（重点）

      识记：电泳的概念，阳极、阴极电泳、变性、非变性电泳、示踪染料的概念。

      理解：生物大分子的性质、存在环境及电泳形式的关系，染料选择的基本原则，决定大分子泳动速度的因素。

      应用：电泳的基本流程。

（二）不连续电泳（重点）

      识记：不连续电泳的概念及作用，前导离子、尾随离子、浓缩胶、分离胶的概念。

      理解：不连续电泳的原理。

      应用：各种不连续体系前导离子与尾随离子的选择。

（三）电泳三维介质（次重点）

      识记：聚丙烯酰胺凝胶及琼脂糖的配制与使用范围。

      理解：介质的功能，孔径大小的表示。

（四）SDS－PAGE（次重点）

      识记：该电泳模式的原理与用途，SDS的作用，迁移率的概念

      理解：该电泳体系中肽链的存在模式，电泳速度的决定因素。

      应用：使用该电泳模式测定肽链分子量。

（五）其它电泳形式（一般）

      识记：等电聚焦的基本原理。

      理解：双向电泳的功能，毛细管电泳的基本原理。

三、实验内容

实验十  SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳

实验十一  聚丙烯酰胺凝胶电泳测定植物过氧化物酶同功酶组成

第五章   细胞破碎与酶活力测定

一、学习目的与要求

通过本章学习，了解破碎细胞常用方法的特点及使用范围，酶活力与比活力的概念，蛋白酶提取及活力测定的基本流程。

二、考核知识点与考核目标

（一）细胞破碎（重点）

      识记：物理破碎与化学破碎概念及特点。

      理解：细胞壁组成与使用破碎方法间关系，各种破碎方法比较。

      应用：常见生物材料的细胞破碎。

（二）蛋白酶活力测定（重点）

      识记：酶活力、比活力概念及单位表示，酶活测定的基本流程及注意事项。

      理解：测定酶初速度与平均速度的应用。

      应用：酶活力测定实验基本设计原则。

（三）生物作图软件的使用（一般）

      应用：Origin，Sigmaplot作图软件的使用。

三、实验内容

实验十二  超声波细胞破碎仪的使用（演示）

实验十三  植物抗氧化酶（POD，SOD，ASA－POD）活力的测定

实验十四  Origin，Sigmaplot作图软件的使用（上机）

第三部分  有关说明与实施要求

一、教材

建议教材：

《现代生物学技术》（第二版）. 张丰德，王秀玲. 天津：南开大学出版社，2003

参考教材：

[1] 何忠孝等.《现代生物技术概论》. 北京：北京师范大学出版社，1999

[2] 吴冠芸等.《生物化学与分子生物学实验常用数据手册》. 北京：科学出版社，2000

[3] Steward K K / Ebel R E 著，上官棣华等译.《生物体系中的化学测量》. 北京：化学工业出版社，2003

[4] 王秀奇等.《基础生物化学实验》（第二版）. 北京：高等教育出版社，2004

二、助学学时

本课程共6学分，建议总学时108学时，课时分配如下

三、关于考核的有关规定

    1、考核方式为：闭卷笔试＋实验报告＋操作表现

2、成绩评定：本课程采用百分制评分，其中闭卷笔试成绩占40％，实验报告占50％，操作表现占10％。闭卷笔xx面成绩为100分，计算总成绩时按实际成绩40％折算。考试时间为90分钟。

四、题型示例（笔试部分）

（一）填空 

蛋白质电泳时常使用            凝胶，而核酸电泳时则使用            凝胶。

（二）解释名词

角转头

（三）单选题

朗泊－比尔定律中，下列哪个量是没有单位的？（     ）

A．A        B．ε       C．l        D．c

（四）判断题

无机盐不能作为缓冲介质使用。（      ）

（五）简答题

简述密度梯度离心的基本原理。

（六）问答题

若采用色谱法进行混合氨基酸溶液的组分分离鉴定，请写出三种具体手段及其基本原理。