菌种保存的方法
菌种保存的方法
2010-03-05 11:16:37
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微生物具有容易变异的特性,因此,在保藏过程中,必须使
微生物
的代谢处于最不活跃或相对静止的状态,才能在一定的时间内使其不发生变异而又保持生活 能力。
低温、干燥和隔绝空气是使微生物代谢能力降低的重要因素,所以,
菌种
保藏方法虽多,但都是根据这三个因素而设计的。
保藏方法大致可分为以下几种:
1.传代培养保 藏法
又有斜面培养、穿刺培养、疱肉培养基培养等(后者作保藏厌氧xx用),培养后于4—6℃冰箱内保存。
2.液体石蜡覆盖保 藏法
是传代培养的变相方法,能够适当延长保藏时间,它是在斜面培养物和穿刺培养物上面覆盖xx的液体石蜡,一方面可防止因培养基水分蒸发而 引起菌种死亡,另一方面可阻止氧气进入,以减弱代谢作用。
3.载体保藏法
是将微生物吸附在适当的载体,如土壤、沙子、硅胶、 滤纸上,而后进行干燥的保藏法,例如沙土保藏法和滤纸保藏法应用相当广泛。
4.寄主保藏法
用于目前尚不能在人工培养基上生长 的微生物,如病毒、立克次氏体、螺旋体等,它们必须在生活的动物、昆虫、鸡胚内感染并传代,此法相当于一般微生物的传代培养保藏法。病毒等微生物亦可用其 他方法如液氮保藏法与冷冻干燥保藏法进行保藏。
5.冷冻保藏法
可分低温冰箱(-20—-30℃,-50—-80℃)、干冰酒 精快速冻结(约-70℃)和液氮(-196℃)等保藏法。
6.冷冻干燥保藏法
先使微生物在极低温度(-70℃左右)下快速冷 冻,然后在减压下利用升华现象除去水分(真空干燥)。
有些方法如滤纸保藏法、液氮保藏法和冷冻干燥保藏法等均需使用保护剂来制备
细胞
悬液,以防止因冷冻或水分不断升华对细胞的损害。保护性溶质可通过氢和离子键对水和细胞 所产生的亲和力来稳定细胞成分的构型。保护剂有牛乳、
血清
、糖类、
甘油
、二甲亚砜等。
器材 :
xx、酵母菌,放线菌和霉菌;
肉膏
蛋白
胨斜面培养基,xx脱脂牛乳,xx水,化学纯的液体石蜡,甘油,五氧化二磷,河沙,瘦黄 土或红土,冰块、食盐,干冰,95%酒精,10%盐酸,无水氯化钙;
xx吸管,xx滴管,xx培养皿,管形安瓿管,泪滴形安瓿管(长颈球形 底),40目与 100目筛子,油纸,滤纸条(0.5×1.2cm),干燥器,真空泵,真空压力表,喷灯,L形五通管,冰箱,低温冰箱(-30℃),液氮冷冻保藏器。
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