【摘要】 目的: 探讨绞股蓝对小鼠皮肤衰老的形态学影响。 方法: 将60只12月龄昆明种小鼠随机分成3组:对照组、绞股蓝低剂量组（A组）、绞股蓝高剂量组（B组）;对照组用赋型剂外涂，A组用4%绞股蓝霜剂外涂，B组用16%绞股蓝霜剂外涂。40天后做组织学切片检测。 结果: 与对照组比较，高剂量绞股蓝可使xx层显著变厚，胶原纤维粗大，排列紧密，弹性纤维增多;低剂量绞股蓝对皮肤衰老程度的影响不显著。 结论: 高剂量绞股蓝对小鼠皮肤衰老的形态学影响是胶原纤维合成增加，弹性纤维变性减少。


【关键词】 绞股蓝;衰老;皮肤;形态学;图像分析

　　皮肤位于体表，是机体衰老过程中最易显露的器官。因此，预防和延缓皮肤衰老已成为生命科学研究的热点之一 ［1］ 。近年研究证明:绞股蓝（Fiveleaf Gynostemma Herb）含有丰富的人参皂甙及多种人体必需的氨基酸和微量元素，具有xx健脾、xx温阳、延缓衰老、抗疲劳、养心xx、滋补强壮、xx等多种药理功能，对多种疾病有较好疗效。但对于外用绞股蓝是否能引起皮肤衰老的形态学改变方面报道不多，本实验对此进行了初步探索。

　　1 实验材料与方法

　　1.1 实验动物及分组方法 健康昆明种12月龄小鼠60只，体重40～45g。随机分为3组:对照组、绞股蓝低剂量组（A组）、绞股蓝高剂量组（B组），每组20只。每组小鼠均雌雄各半。实验所用动物均由沈阳医学院实验动物中心提供。动物按性别及组别分笼饲养。在相同的自然条件下，常规饲食饮水，适应性饲养后开始进行实验。

　　1.2 实验xx及实验方法 市售绞股蓝（购于沈阳同仁堂药房）经常规蒸馏水温浸法提取得试液（0.3g生药/ml），置4℃冰箱备用，实验前稀释成所需浓度，然后与赋型剂按1∶1比例混合制成绞股蓝霜剂。赋型剂选用友谊雪花膏（上海日用化学品厂生产）。

　　对照组外涂赋型剂，A组和B组分别外涂加入赋型剂的绞股蓝霜剂，其浓度分别为4%、16%（根据实验动物学及中药药理学，按成人用量的9.3倍进行计算）。实验前用剃毛器给小鼠背部脱毛（3cm×3cm）后涂抹绞股蓝霜剂，保鲜膜保护2h，每日一次，每次0.5g，共计40d。

　　1.3 标本取材及制备 将各组小鼠于第41d用剃毛器脱去所有小鼠背部皮肤的毛，面积为3cm×3cm;摘眼球放血处死，取背部脱毛处全层皮肤，面积为2cm×3cm大小，10%中性甲醛液中固定，石蜡包埋，常规切片，片厚6μm，H-E染色;弹性染色采用Weigert's间苯二酚-碱性品红染色法;胶原纤维染色采用Mallory-Heidenhain's改良法 ［2］ 。

　　1.4 统计学处理 所有数据均通过SPSS11.5软件进行方差分析和q检验，各组实验参数以x±s表示。

　　2 结果与分析

　　2.1 镜下观察形态学变化 观察对照组，衰老皮肤的表皮层改变表现为细胞层数减少，表皮与xx交界平坦，xx乳头数减少。xx层的改变较明显，xx厚度变薄，胶原总量减少，胶原纤维细长，走向平直，排列疏松。弹性纤维数量减少，弹性纤维断裂，卷曲，排列不规则。

　　与对照组比较，A组小鼠表皮变厚，xx层胶原纤维交织成网;弹性纤维增多，纤维细长，弯曲，分布于胶原纤维之间。

　　与对照组比较，B组小鼠表皮细胞层数增加，xx层显著变厚，胶原纤维粗大，排列紧密，呈波浪状;弹性纤维总面积增加，弹性纤维细长，弯曲，交织成网。

　　2.2 观测结果分析 小鼠皮肤的组织学改变，经计算机图像数字化分析系统（德国KONTRON公司）分析，各项观测结果如表1所示。与对照组比较，A组、B组的表皮厚度、xx厚度和弹性纤维总面积均有改变。A组与对照组比较皮肤组织形态虽有改变，但差异无显著性（P>0.05）。B组的表皮厚度、xx厚度和弹性纤维总面积比较对照组改变较大，结果差异具有显著性（P<0.05），说明高剂量绞股蓝可以使胶原纤维合成增加，弹性纤维变性减少。

　　表1 不同组别表皮厚度、xx厚度、弹性纤维总面积观测结果（略）

　　注:1）与对照组比较，经方差分析和q检验，P<0.05

　　3 讨论

　　国内外学者从不同学科角度出发，对衰老机制进行了深入的探索，提出了很多学说，如交联学说、自由基学说、线粒体DNA损伤学说、衰老的端粒学说、基因学说等 ［3］ 。

　　皮肤衰老的交联学说认为皮肤的老化与xx组织中胶原的交联改变有关。由于年龄增加导致 成纤维细胞分泌胶原的能力下降，而且，老化时胶原的交联增加对成纤维细胞的功能产生抑制作用，这种相互作用，加速了胶原老化的进程，从而加快了皮肤老化的发生和发展，老年人因此出现皮肤松弛，皱纹、缺乏弹性等 ［4］ 。本实验结果显示，小鼠每日外涂高剂量绞股蓝霜剂皮肤xx层增厚，胶原纤维总量增加，排列紧密，弹性纤维增多，细长，交织成网，断裂减少。其原因可能与成纤维细胞功能的改善有关。

　　而另外一些研究表明，随着年龄的增加，表皮细胞表现出与年龄相关的集落形成能力降低，对分裂原的反应性下降和细胞不能释放促细胞生长因子的特点 ［5］ 。Anthony ［6］ 等通过实验也观察到表皮层的基底层细胞有明显的异形性改变。但本实验仅观察到皮肤表皮层增厚，基底层细胞无特异性变化。今后实验可选择使用更具有特异性的染色方法以及在电镜下观察细胞器的改变情况。

　　绞股蓝为葫芦科植物绞股蓝的全草。为绞股蓝属多年生草质藤本植物。绞股蓝的药性应属于平性偏温，归经:肺、脾、肾。其功能主要包括:xx健脾、xx温阳、延缓衰老、抗疲劳、养心xx、滋补强壮、xx等 ［7］ 。绞股蓝的主要药效成分为绞股蓝皂甙。其化学成分复杂，包括了80余种人参二醇型三萜皂苷、10余种三萜皂苷类成分 ［8］ 及多种氨基酸和微量元素。在本实验中究竟是何种成分发挥主要作用，其药理作用如何，尚需进一步研究。

【参考文献】
　　［1］张艺，杨恬.皮肤抗衰老研究进展［J］.中国老年学杂志，2001，21（4）:320-322.

　　［2］刘培辉.病理染色技术［M］.第2版，北京:人民卫生出版社，2000.56-61.

　　［3］王桔红，谢宗平，陈文.衰老机理及抗衰老研究进展［J］.河西学院学报，2003，19（2）:94-98.

　　［4］吴景东，李德新.绞股蓝延缓大鼠皮肤衰老作用的实验研究［J］.中医药学刊，2006，24（7）:1226-1227.

　　［5］关英杰，金锡鹏.皮肤衰老研究进展［J］.中国老年学杂志，2003，23（6）:396-397.

　　［6］ Anthony V，Benedetto DO.The environment and skin aging ［J］.Clin in Derm，1998，16（1）:129-139.

　　［7］李仪儒.绞股蓝的综合研究［J］，天津药学，1998，10（3）:8-10.

　　［8］刘欣，叶文才，萧文鸾，等.绞股蓝的化学成分研究［J］.中国药科大学学报，2003，34（1）:21-23.