(一) 血凝和血凝抑制试验
      某此病毒或病毒的血凝素，能选择性地使某种或某几种动物的红细胞发生凝集，这种凝集红细胞的现象称为血凝(hemagglutination，HA)，也称直接血凝反应，当病毒的悬液中先加入特异性抗体，且这种抗体的量足以抑制病毒颗粒或其血凝素，则红细胞表面的受体就不能与病毒颗粒或其血凝素直接接触。这时红细胞的凝集现象就被抑制，称为红细胞凝集抑制(hemagglutination inhibiion，HI)反应，也称血凝抑制反应。
1.原理　血凝的原理因不同的病毒而有所不同，如痘病毒对鸡的红细胞发生凝集并非是病毒本身，而是痘病毒的产物类脂蛋白的作用。而流感病毒的血凝作用是病毒囊膜上的血凝素与红细胞表面的受体糖蛋白相互吸附而发生的。  
病毒的血凝现象大致可以分为3种类型。
(1) 可逆转型　血凝素与病毒颗粒易分开，经超速离心后，病毒颗粒沉淀于管底，血凝素则游离于上清液内。这种血凝素凝集红细胞的现象是可逆的，即被凝集的红细胞释放了吸附于表面的血凝素后，可再与该血凝素发生凝集，如天花、鼠疫等病毒。
(2) 不可逆转型　血凝素与病毒颗粒结合得比较紧密，不经过特殊处理血凝素不能与病毒颗粒分开，这种病毒引起的红细胞凝集，是不可逆转的。在一定的温度 (37℃)下，病毒释放出一种能破坏红细胞表面受体糖苷键的N-乙酰神经氨酸酶，当病毒颗粒从红细胞表面游离出来后红细胞表面受体已被破坏而失去了再凝集病毒的能力，如流感病毒、鸡新城疫病毒等。
(3) 凝集条件严格型　有些病毒及其血凝素凝集红细胞的条件很严格，不仅对不同种动物的红细胞有严格的选择，即是对同种动物，由于性别和年龄的不同，对红细胞的凝集性能亦有差异。如流行性乙型脑炎对公鹅的红细胞凝集性能比对经产老龄母鹅的红细胞凝集性能好，除此之处，病毒颗粒或其血凝素凝血时对缓冲液的pH值、温度及盐浓度等的要求均很严格。
2. 材料的准备
(1) 生理盐水
(2) 红细胞保存液 (阿氏液) 的配制 (Acid-citrate-dextrose，简称“ACD”)
氯化钠　　　　　　　　4.2g
枸橼酸钠　　　　　　　8.0g
枸橼酸　　　　　　　　0.55g
葡萄糖　　　　　　　　20.5g
加去离子水至　　　　　1000ml
0.075MPa、15min高压后置4℃备用。
(3)
病毒抗原 (血凝素) 稀释液 ( 0.4%pH9.0BABS) 的配制　不同的病毒抗原 (血凝素) 需用不同的稀释液。如鸡新疫血凝素用生理盐水稀释。流行性乙型脑炎血凝素需用0.4% pH9.0BABS稀释液。 pH9.0BABS液的配制:
① 母液的配制

0.5mol/L硼酸溶液：　　　　　　硼酸30g
加去离子水至　　　　　　　　1 000ml
溶解后备用。
1.0mol/L氢氧化钠溶液：
NaOH　　　　　　　　　　　　40g
加入离子水至　　　　　　　　1 000ml
溶解置3天后使用。
1.5mol/L氯化钠溶液：
NaCl　　　　　　　　　　　　87.7g
加入离子水至　　　　　　　　1 000ml
0.075MPa、15min高压后置4℃备用。
② 硼酸氢氧化钠盐溶液 (pH9.0、BHS) 的配制
0.5mol/L硼酸溶液　　　　　　　100ml
1.0mol/L NaOH溶液　　　　　　 24ml
1.5mol/L NaCl溶液　　　　　　 80ml
加去离子水至　　　　　　　　　1 000ml
充分混匀后调pH值为9.0
③ 使用液（0.4%pH9.0BABS）的配制（现配现用）
pH9.0 BHS液　　　　　　　　　100ml
牛血清白蛋白　　　　　　　　　0.4g
充分溶解后使用，现配现用。
(4)
白陶土
(5)
不同pH值的红细胞稀液的配制　虫媒病毒对缓冲pH值的要求都很严格，流行性乙型脑炎病毒要求红细胞在pH5.8-6.6的PBS稀释液内才能凝集。因此，每次试验之前必须用pH 5.8-6.6的PBS的红细胞悬液来试测其最适pH值。
① 母液的配制
甲液：
Na2HPO4?12H2O　　　　　　　35.8g
NaCl　　　　　　　　　　　　4.4g
加去离子水至　　　　　　　　500ml
0.075MPa、15min高压后4℃保存备用。
乙液：
Na2HPO4?2H2O　　　　　　　　15.6g
NaCl　　　　　　　　　　 　　4.4g
加去离子水　　　　　　　　　 500ml
0.075MPa、15min高压后4℃ 保存备用。
② 不同pH值的PBS使用液的配制:
(6) 红细胞悬液的配制　用5ml一次性无菌注射器，先吸取2ml阿氏液，而后无菌采取所需动物的静 脉血2ml，随即注入盛有10ml左右阿氏液的三角烧瓶 内，迅速摇匀，置4℃过液，次日将血液经无菌纱布过滤至离心管内，经200r／min离心10min，弃上清液，加5-10倍的生理盐水水洗3次，每次2000r／min离心5min，{zh1}一次2000r／min离心10min，弃上清液，沉淀即为可供配制红细胞悬液的血球泥。用最适pH值的PBS液配成0.33%的红细胞悬液。
(7)
血凝素（病毒抗原）　除了痘类病毒的血凝素是与病毒颗粒分开之外，绝大多数的血凝素是与病毒颗粒相关联的。
(8)
25μl的连续加液器和25μl的自动稀释器或不锈钢稀释棒。
(9)
96孔U型微量血凝板及种种规格的吸管、移液器及吸头等实验室常规用具。
3.方法（流行性乙型脑炎）　血凝和血凝抑制试验有常量和微量法，它们除了用量和用具有所不同之外，其他如试验方法、程序、参与要素及其浓度、pH值、作用时间、温度和判定等都一样。常量法各要素用量为0.25ml，在5×10孔的血凝板上进行。微量法各要素用量为25μl，在96孔U型微量血凝板上进行，微量法省时、省料、高效。目前世界各国广泛使用。
微量血凝试验操作：
(1)
血凝素最适pH值的测定
① 取洁净的96孔U型微量血板，在{dy}排（横）各孔的上测边标上血凝素的不同稀释液，在{dy}行（纵）各孔的外测边标上红细胞悬液的不同pH值 (5.6、5.8、6.0、6.2、6.4、6.6、6.8)。
② 用25μl的连续加液器，每孔滴入0.4%PH9.0的PBS液25μl。
③ 用移液器在{dy}行各孔加入血凝素25μl，用自动稀释器或不锈钢稀释棒插入{dy}行各孔，经充分稀释后，蘸取25μl到第二行各孔，再经充分稀释后蘸取25μl到第三行各孔依次作等量倍比稀释至倒数第二行，并从这一行各孔中弃掉25μl，{zh1}一行各孔不加血凝素、作血球对照。
④ 各孔补加0.4%pH9.0的BABS液25μl，于微型振荡器上振匀20s，置室温 (25℃左右 )或37℃30min。
⑤ 每行各孔分别加入相应pH值的红细胞悬液25μl。每孔总量为75μl，置微型振荡器上振匀20s，置室温(25℃左右 )或37℃30min后观察判断。由表2-20可见，pH6.4是该血凝素所最适pH值。