岛津LC-10A型液相色谱仪操作规程

1、流动相准备

HPLC所用流动相必须进行抽滤，目的为除掉其中杂质及初步的脱气作用。此外，流动相还必须进行脱气处理，方法除抽滤外，还可采用煮沸或超声波处理，其中后者常用。

抽滤时注意选择合适的滤膜，超声处理至少20min。

2、样品准备

所有样品必须进行过滤，过滤方法采用针头过滤器，利用一次性注射器完成。注意选择合适的滤头。

3、根据待检样品的需要更换合适的洗脱柱（注意方向）和定量环。

4、检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。

5、开机：接通电源，依次开启不间断电源、B泵、A泵、检测器，待泵和检测器自检结束后，打开打印机、电脑显示器、主机，{zh1}打开色谱工作站。
6、参数设定
6.4.1 波长设定：在检测器显示初始屏幕时，按[func]键，用数字键输入所需波长值，按[Enter]键确认。按[CE]键退出到初始屏幕。
6.4.2 流速设定：在A泵显示初始屏幕时，按[func]键，用数字键输入所需的流速（柱在线时流速一般不超过1ml/min），按[Enter]键确认。按[CE]键退出。
6.4.3 流动相比例设定：在A泵显示初始屏幕时，按[conc]键，用数字键输入流动相B的浓度百分数，按[Enter]键确认。按[CE]键退出。
6.4.4 梯度设定
6.4.4.1 在A泵显示初始屏幕时，按[edit]键，[Enter]键进入查看，先DEL原来的设置；
6.4.4.2 【Enter】键，出现TIME，用数字键输入要设定的时间，按[Enter]键，重复按[func]键选择所需功能（FLOW设定流速，BCNC设定流动相B的浓度），按[Enter]键，用数字键输入设定值，按[Enter]键；
6.4.4.3 重复上一步设定其它时间点的流速、流动相比例等参数；
6.4.4.4 按[Enter]键，在{zh1}一个时间点，用数字键输入停止时间，重复按[func]键直至屏幕显示STOP，按[Enter]键。按[CE]键退出。
6.5 更换流动相并排气泡
6.5.1 将A/B管路的吸滤器放入装有准备好的流动相的储液瓶中；
6.5.2 逆时针转动A/B泵的排液阀180°，打开排液阀；
6.5.3 按A/B泵的[purge]键，pump指示灯亮，泵大约以9.9ml/min的流速冲洗，3min（可设定）后自动停止；
6.5.4 将排液阀顺时针旋转到底，关闭排液阀。
6.5.5 如管路中仍有气泡，则重复以上操作直至气泡排尽。
6.5.6 如按以上方法不能排尽气泡，从柱入口处拆下连接管，放入废液瓶中，设流速为5ml/min，按[pump]键，冲洗3min后再按[pump]键停泵，重新接上柱并将流速重设为规定值。
6.6 平衡系统
6.6.1 按《N2000色谱数据工作站操作规程》打开“在线色谱工作站”软件，输入实验信息并设定各项方法参数后，按下“数据收集”页的 [查看基线] 按钮。
6.6.2 等度洗脱方式
6.6.2.1 按A泵的[pump]键，A、B泵将同时启动，pump指示灯亮。用检验方法规定的流动相冲洗系统，一般最少需6倍柱体积的流动相。
6.6.2.2 检查各管路连接处是否漏液，如漏液应予以排除。
6.6.2.3 观察泵控制屏幕上的压力值，压力波动应不超过1MPa。如超过则可初步判断为柱前管路仍有气泡，按4.5.6操作。
6.6.2.4 观察基线变化。如果冲洗至基线漂移<0.01mV/min，噪声为<0.001mV时，可认为系统已达到平衡状态，可以进样。
6.6.3 梯度洗脱方式
6.6.3.1 以检验方法规定的梯度初始条件，按4.6.2项下方法平衡系统。
6.6.3.2 在进样前运行1~2次空白梯度。方法：按A泵的[run]键，prog.run指示灯亮，梯度程序运行；程序停止时，prog.run指示灯灭。
6.7 进样
6.7.1 进样前按检测器[zero]键调零，按软件中 [零点校正] 按钮校正基线零点，再按一下 [查看基线] 按钮使其弹起。
6.7.2 用试样溶液清洗注射器，并排除气泡后抽取适量。

1.仪器组成及开机

1.1仪器组成: 岛津LC-10AT泵 (两台)

CTO-10AS柱温箱

RID-10A检测器 (SPD-10A检测器)

电脑一台(装有威玛龙色谱工作站)

1.2 开机:插入电源,依次打开泵、柱温箱、检测器、电脑（并进入色谱工作站）。

2. LC-10AT泵参数设定

2.1 开始运行前务必确保储液瓶中装有流动相，并且吸滤器已经放

入储液瓶中。排液管的另一端已经放入废液瓶中。

2.2待仪器自检完毕后, 将排液阀逆时针旋转1800,若显示屏左下角显示的压力值不在-0.3-0.3Mpa范围内,使用ZERO ADJ功能对压力传感器进行调零(反复按 func 键,直至显示屏上有ZERO ADJ字样出现,按Enter键,然后再按CE键返回初始屏幕)。

2.3然后按 purge ,进行吸入过滤器至泵的冲洗操作,也可用注射器在排液阀的管道处抽吸清洗。冲洗完成后关闭排液阀。(注意:如果排液阀旋转大于1800,空气将进入排液管,最终导致空气进入流动相。)

2.4 按一次func键后,设定所需流速(例如:设定1ml/min,按1键,

然后按Enter键确定)。逐次按func跳到相应Pmax,Pmin项下，

输入{zg}和{zd1}保护压力后，按Enter键确定，再按CE键恢

复初始状态。

2.5 如果要使用两台泵,则按conc键进入设定状态，输入B泵（从动泵）的百分率，然后按Enter 确定，再按CE键返回初始界面。

2.6 按pump 启动泵,对色谱柱进行平衡,待压力显示稳定,可开始测试操作。

3. CTO-10AS柱温箱参数设定

3.1 在初始屏幕下,按func 键进入操作温度设定状态,以数字键输入设定温度,然后按enter 确定。

3.2 再按一次func键设定上限温度,按enter 确定,按CE返回初始屏幕即可。

3.3 按oven 键启动加温程序,仪器会自动控温于所设温度。

4. RID-10A检测器参数设定

按shift + R flow键,让流动相依次流过流通池、参比池，

待参比池内液体置换完毕，再按一次 shift + R flow键让流动相只通过流通池，直至基线跑平。

5. 测定操作

5.1 色谱工作站的参数设定

5.1.1 单击色谱工作站集成环境界面上的“数据记录参数”图标,进入设定状态，设定一个地址用来保存即将测定的图谱以及设定其它相关参数。按“确定”键即可。

5.1.2 再单击“样品信息”图标，将即将进行分析的样品的相关信息填入相应项目中，即可进行进样分析。

5.2 进样操作

5.2.1 按检测器ZERO置零,进样阀手柄置LOAD位置,将分析样注入进样阀的定量环中。

5.2.2 将进样阀手柄转到INJECT 位置,进样。

5.2.3 大约30秒后,将手柄再快速转到LOAD 位置,然后抽出注样器。

6. 关机操作

6.1 全部测定完毕后,按规定用适当溶剂（一般用甲醇）冲洗泵、进样器、柱和检测器。

6.2 关电、登记。