中华人民共和国国家标准 
食品安全国家标准
婴幼儿食品和乳品中维生素犓１ 的测定
２０１００３２６发布２０１００６０１实施
中华人民共和国卫生部发布 

前　　言
本标准等同采用国际分析家学会（ＡＯＡＣ）ＡＯＡＣ９９９．１５ＶｉｔａｍｉｎＫｉｎＭｉｌｋａｎｄＩｎｆａｎｔＦｏｒｍｕｌａｓＬｉｑｕｉｄＣｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃＭｅｔｈｏｄ。
本标准代替ＧＢ／Ｔ５４１３．１０—１９９７《婴幼儿配方食品和乳粉　维生素Ｋ１的测定》。
本标准与ＧＢ／Ｔ５４１３．１０—１９９７相比，主要变化如下：
———标准名称改为《婴幼儿食品和乳品中维生素Ｋ１的测定》；
———试样处理改为试样经酶水解后，用ＮａＯＨ皂化，用正己烷萃取；
———测定改为用高效液相色谱柱后还原荧光法定量测定维生素Ｋ１；
———仪器中将“高压液相色谱仪带紫外检测器”修改为“高效液相色谱仪，带荧光检测器”。
本标准的附录Ａ、附录Ｂ和附录Ｃ为资料性附录。
本标准所代替标准的历次版本发布情况为：
———ＧＢ５４１３—１９８５、ＧＢ／Ｔ５４１３．１０—１９９７。

食品安全国家标准
婴幼儿食品和乳品中维生素犓１的测定
１　范围
本标准规定了婴幼儿食品和乳品中维生素Ｋ１的测定方法。
本标准适用于婴幼儿食品和乳品中维生素Ｋ１的测定。
２　规范性引用文件
本标准中引用的文件对于本标准的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版

本适用于本标准。凡是不注日期的引用文件，其{zx1}版本（包括所有的修改单）适用于本标准。
３　原理
用脂肪酶降解试样中的脂肪和不饱和脂肪酸，对于含淀粉试样需先用淀粉酶降解试样中的淀粉，经
碱皂化后，用正己烷提取维生素Ｋ１。通过液相色谱法分离，柱后还原维生素Ｋ１，荧光检测器检测，外标法定量。
４　试剂和材料
除非另有规定，本方法所用试剂均为分析纯，水为ＧＢ／Ｔ６６８２规定的一级水。
４．１　氢氧化钠溶液（１０ｍｏｌ／Ｌ）：临用前配制。
４．２　９５％乙醇。
４．３　饱和氯化钠溶液。
４．４　正己烷：色谱纯。
４．５　无水硫酸钠。
４．６　甲醇：色谱纯。
４．７　二氯甲烷：色谱纯。
４．８　冰乙酸。
４．９　氯化锌。
４．１０　无水乙酸钠。
４．１１　流动相：甲醇（４．６）９００ｍＬ，二氯甲烷（４．７）１００ｍＬ，冰乙酸（４．８）０．３ｍＬ，氯化锌（４．９）１．５ｇ，无
水乙酸钠（４．１０）０．５ｇ，溶解后用０．４５μｍ滤膜过滤。
４．１２　淀粉酶：酶活力≥１．５Ｕ／ｍｇ。
４．１３　脂肪酶：酶活力≥７００Ｕ／ｍｇ。
４．１４　锌粉：粒度５０μｍ～７０μｍ。
４．１５　维生素Ｋ１标准溶液：标准溶液浓度校正方法参见附录Ａ。
４．１５．１　维生素Ｋ１标准贮备液（２ｍｇ／ｍＬ）：称取０．０５ｇ维生素Ｋ１标准品（xx到０．１ｍｇ），于２５ｍＬ
容量瓶中，用正己烷溶解定容。
４．１５．２　维生素Ｋ１标准中间液（２０μｇ／ｍＬ）：取标准贮备液（４．１５．１）１ｍＬ加正己烷定容至１００ｍＬ。
５　仪器和设备
５．１　高效液相色谱仪，带有荧光检测器。
１

５．２　天平：感量为０．１ｍｇ。
５．３　分液漏斗：２５０ｍＬ。
５．４　旋转蒸发器。
５．５　恒温空气浴振荡器。
５．６　离心机：转速≥３０００转／分钟。
５．７　氮吹仪。
６　分析步骤
６．１　试样处理
６．１．１　含淀粉的试样
称取混合均匀的固体试样约２．５ｇ或液体试样约１０ｇ（xx到０．１ｍｇ）于三角瓶中，加入０．５ｇ淀
粉酶（４．１２），用３０ｍＬ温水溶解。
６．１．２　不含淀粉的试样
称取混合均匀的固体试样约２．５ｇ或液体试样约１０ｇ（xx到０．１ｍｇ）于三角瓶中，用３０ｍＬ温水
溶解。
６．２　测定液的制备
向上述处理过的试样溶液中加入１ｇ脂肪酶（４．１３），于３７℃±５℃恒温空气浴振荡器中振荡过夜，
使其充分酶解。取出酶解好的试样，加入２ｍＬ氢氧化钠溶液（４．１），用５０ｍＬ乙醇（４．２）将溶液转入
２５０ｍＬ的分液漏斗中，充分混匀［必要时加少量饱和氯化钠溶液（４．３）］。加入５０ｍＬ正己烷（４．４）。
充分振摇２ｍｉｎ，静置分层。放出下层水相于另一个２５０ｍＬ分液漏斗中，留下有机相。向水相中再次
加入５０ｍＬ正己烷再次萃取。合并有机相。用适量蒸馏水洗有机相两次。将有机相通过无水硫酸钠
（４．５）脱水过滤到一个５００ｍＬ的烧瓶中，在旋转蒸发器上于４０℃±２℃下蒸发至近干。用正己烷
（４．４）转移残留物到一个１０ｍＬ试管中，置氮吹仪上于４０℃±２℃下吹干，准确加入１ｍＬ正己烷
（４．４），充分振荡溶解残留物。将试管放入冰箱中在０℃以下冷冻１ｈ备用。
６．３　测定
６．３．１　色谱参考条件
色谱柱：Ｃ１８色谱柱，１５０ｍｍ×４．６ｍｍ，５μｍ，或具同等性能的色谱柱；
锌还原柱：４．６ｍｍ×５０ｍｍ（参见附录Ｂ）；
检测波长：激发波长为２４３ｎｍ，发射波长为４３０ｎｍ；
流动相：甲醇（４．６）９００ｍＬ，二氯甲烷（４．７）１００ｍＬ，冰乙酸（４．８）０．３ｍＬ，氯化锌（４．９）１．５ｇ，无水
乙酸钠（４．１０）０．５ｇ，溶解后用０．４５μｍ滤膜过滤；
流速：１ｍＬ／ｍｉｎ；
进样量：１０μＬ。
６．３．２　维生素犓１标准曲线绘制
分别准确吸取标准中间液（４．１５．２）０．０ｍＬ，０．５ｍＬ，１．０ｍＬ，１．５ｍＬ，２．０ｍＬ，２．５ｍＬ，加正己烷
定容至２５ｍＬ，此标准系列工作液维生素Ｋ１浓度分别为０．００μｇ／ｍＬ，０．４０μｇ／ｍＬ，０．８０μｇ／ｍＬ，
１．２０μｇ／ｍＬ，１．６０μｇ／ｍＬ，２．００μｇ／ｍＬ。
将系列标准维生素Ｋ１工作液分别注入高效液相色谱仪中，测定相应的峰面积或峰高，以峰面积或
峰高为纵坐标，以标准测定液浓度为横坐标绘制标准曲线。
６．３．３　测定液的测定
将制备好的测定液（６．２）在暗处放至室温，于离心机中在３０００转／分钟下离心５ｍｉｎ，吸取上清液
注入高效液相色谱仪中，测定相应的峰面积或峰高（标准色谱图参见附录Ｃ）。从标准曲线上查得试样
溶液中维生素Ｋ１的浓度或通过回归方程计算出试样溶液中维生素Ｋ１的浓度（μｇ／ｍＬ）。
２

７　分析结果的表述
试样中维生素Ｋ１的含量按式（１）计算：
犡＝
犮犻×犞犻×狀
犿犻
×１００…………………………（１）
　　式中：
犡———维生素Ｋ１的含量，单位为微克每百克（μｇ／１００ｇ）；
犮犻———试样溶液的浓度，单位为微克每毫升（μｇ／ｍＬ）；
犞犻———试样溶液的体积，单位为毫升（ｍＬ）；
犿犻———试样的质量，单位为克（ｇ）；
狀———样液稀释倍数。
以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留到小数点后一位。
８　精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的{jd1}差值不得超过算术平均值的１０％。
９　其他
９．１　由于维生素Ｋ１遇光易分解，整个操作应避光。
９．２　本标准检出限为１μｇ／１００ｇ。
３

附　录　犃
（资料性附录）
标准溶液浓度校正方法
　　标准溶液配制后需要对所配制的标准溶液进行校正，具体操作如下：
维生素Ｋ１标准浓度的标定：取维生素Ｋ１标准工作溶液，按给定波长测定各维生素的吸光值，用比
吸光系数计算出该维生素Ｋ１的浓度。测定条件见表Ａ．１。
表犃．１　维生素犓１吸光值的测定条件
标准品比吸光系数　犈１％
ｃｍ波长λ（ｎｍ）
维生素Ｋ１４２２２４８
　　浓度按式（２）计算：
犮１＝
犃
犈
×１１００…………………………（２）
　　式中：
犮１———维生素Ｋ１的浓度，单位为克每毫升（ｇ／ｍＬ）；
犃———维生素Ｋ１的平均紫外吸光值；
犈———维生素Ｋ１１％比色光系数。
４

附　录　犅
（资料性附录）
锌还原柱填装方法
　　将锌粉（４．１４）密集装入还原柱（４．６ｍｍ×５０ｍｍ，不锈钢材质）中。装柱时，应连续少量多次将锌
粉装入柱中，边装边轻轻拍打，以使装入的锌粉紧密。
５

附　录　犆
（资料性附录）
维生素犓１液相色谱图
犆．１　维生素犓１液相色谱图
维生素Ｋ１液相色谱图见图Ｃ．１。
图犆．１　维生素犓１液相色谱图

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