生物体内物质的提取、分离和鉴定技术
　　　　　　　　　　　　　生物组织中还原性糖和蛋白质的鉴定
生物组织中还原性糖的鉴定
　　⑴ 实验原理：
　　糖类中的还原性糖（如葡萄糖、麦芽糖等）能与本尼迪特试剂(或斐林试剂)发生作用，生成砖红色沉淀
　　⑵ 实验材料的选择：
　　白色或近乎白色的含还原性糖高的实验材料（如苹果、梨等），避免实验材料本身的颜色影响实验结果的观察
　　⑶ 实验步骤：
　　　
　　⑷ 练习巩固
　　1．使用本尼迪特（斐林）试剂鉴定可溶性还原糖时, 必须将试剂的甲液和乙液
　　A．分别加入样液中 　　　　　　B．混匀后再加入样液
　　C．加热后再加入样液 　　　　　D．同时加入样液中

　　2．某些糖遇本尼迪特（斐林）试剂能发生如下反应：
　　　　　　
　　　 这表明反应过程中糖被
　　A．氧化 　　　B．还原 　　　C．染色 　　　D．分解为Cu₂O和H₂O

　　3．将面团包在纱布中在清水中搓洗，鉴定粘留在纱布上的粘稠物质和洗出的白浆分别用的试剂是
　　A．碘液、苏丹Ⅲ溶液　　　　　　　 B．双缩脲试剂、碘液
　　C．双缩脲试剂、苏丹Ⅲ溶液　　　　 D．碘液、本尼迪特（斐林）试剂

　　参考答案：1B 2A 3B（留在纱布上的粘稠物是蛋白质，而洗出的白浆是淀粉）

生物组织中蛋白质的鉴定
　　⑴ 实验原理：
　　蛋白质能与双缩脲试剂发生作用，产生紫色反应
　　⑵ 实验材料的选择：
　　蛋白质含量高的白色、浅色的实验材料（如牛奶、豆浆、蛋清等），避免实验材料本身的颜色影响实验结果的观察
　　⑶ 实验步骤：
　　
　　⑷ 练习巩固
　　1．现有下列生物材料：
　　①苹果②豆浆③梨④花生种子⑤蛋清⑥马铃薯块茎⑦西红柿
　　⑴适于用来鉴定还原性糖的{zh0}材料有________________，原因是____________________。使用的试剂
　　　是________________，该试剂与待测样品均匀混合后颜色为_____________________，沸水浴后现象
　　　为________________。
　　⑵适合用于鉴定蛋白质的材料有________________，鉴定蛋白质使用的试剂为________________，使用
　　　该试剂时应先将________________与待测样品混合均匀，再加入________________。
　　⑶适合用于鉴定淀粉的材料有________________，适合用于鉴定脂肪的材料有________________，使用
　　　苏丹Ⅲ(或苏丹Ⅳ)染色时，试剂将细胞内的脂肪染色而油珠外部的细胞质却未着色，这说明染色剂具
　　　有________________特性。使用苏丹Ⅳ染色时实验现象是________________。

　　参考答案：
　　⑴①③；含糖量高而且颜色为白色（浅色），不会干扰试验结果；斐林试剂或本尼迪特试剂；蓝色；
　　　产生砖红色沉淀
　　⑵②⑤；双缩脲试剂；试剂A；试剂B
　　⑶⑥；④；脂溶性，脂肪滴被染成红色

叶绿体中色素的提取和分离
　　⑴ 实验原理：
　　提取色素的原理：
　　叶绿体中的色素是有机物，可以溶解在酒精、丙酮等有机溶剂中，所以可以用无水乙醇、丙酮等提取叶绿体色素
　　分离色素的原理：
　　叶绿体中的4中色素在层析液中的溶解度不同，溶解度高的色素随着层析液在滤纸上扩散的速度快，反之则慢，所以据此原理4种色素就会随着层析液在滤纸上的扩散而分离开。
　　⑵ 实验步骤：
　　
　　⑶ 练习巩固
　　1．本实验中，效果{zj0}的叶片是
　　A．新鲜、柔嫩、色浓绿 　　　　B．角质层发达的革质叶片
　　C．肥厚．多汁　　　　　　　　 D．新生的嫩叶

　　2．滤纸上的色素细线一定不能没过层析液，否则
　　A．色素扩散会不均匀 　　　　B．色素会溶解到层析液中
　　C．色素扩散速度变慢 　　　　D．色素带彼此重叠

　　3．下图表示的是叶绿体色素分离的装置，正确的是
　　
　　　　A．　　　　　B．　　　　C．　　　　D．

　　4．分别在A、B、C三个研钵中加2克剪碎的新鲜菠菜绿叶，并按下表所示添加试剂，经研磨、过滤得到
　　　 三种不同颜色的溶液，即：深绿色、黄绿色（或褐色）、几乎无色。
　　注：“+”表示加；“－”表示不加。
　　⑴A处理得到的溶液颜色是________________，原因是_____________________________。
　　⑵B处理得到的溶液颜色是________________，原因是_____________________________。
　　⑶C处理得到的溶液颜色是________________，原因是_____________________________。

　　参考答案：
　　1A 2B 3B
　　4．⑴A 黄绿色，部分叶绿素受到破坏。
　　　 ⑵B 几乎无色，叶绿素不溶于水。
　　　 ⑶C 深绿色，大量叶绿素溶于乙醇中

DNA的粗提取和鉴定实验
　　⑴ 实验原理：
　　DNA粗提取的原理：DNA或蛋白质等其他成分在不同浓度的NaCl溶液中的溶解度不同，利用这一特点，选择适当的盐浓度就能使DNA充分溶解 ，而使杂质沉淀，或者相反以达到粗提取的目的。
　　进一步提纯DNA的原理：DNA不溶于酒精溶液，但是细胞内的某些蛋白质则溶于酒精。利用这一原理，可以将DNA与蛋白质进一步分离。
　　DNA鉴定的原理：在沸水浴的条件下，DNA遇二苯胺会被染成蓝色，因此二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。
　　⑵ 实验材料的选择：
　　DNA含量相对较高的生物组织
　　⑶ 实验步骤：
　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　DNA的鉴定示意图
　　　　　　　　
　　⑷ 练习巩固
　　1．在真核细胞结构中DNA主要分布在
　　A．细胞核　　　 B．线粒体 　　　C．细胞膜 　　　D．细胞质

　　2．若用100mL样品提取DNA，下列含DNA最多的样品是
　　A．鸡的血液　　　　　 B．兔的血液
　　C．鸡的血细胞 　　　　D．兔的血细胞

　　3．能够促使血细胞更快破裂释放出核物质的操作是
　　A．向细胞加适量的蒸馏水，小心静置
　　B．向细胞加适量的生理盐水，小心静置
　　C．向细胞加适量的蒸馏水，同时用玻棒搅动
　　D．向细胞加适量的生理盐水，同时用玻棒搅动

　　4．用过滤的方法得到含有DNA的氯化钠溶液后，还要用冷酒精处理，可以得到较纯净的DNA，这是因为
　　A．DNA易溶于酒精，而滤液中某些杂质不易溶于酒精
　　B．DNA不易溶于酒精，而滤液中某些杂质易溶于酒精
　　C．DNA和滤液中其他成分更易溶于酒精
　　D．DNA和滤液中其他成分都不溶于酒精

　　5．做DNA粗提取和鉴定实验时，实验材料用鸡血而不用猪血的原因是
　　A．鸡血的价格比猪血的价格低
　　B．猪的红细胞没有细胞核，不易提取到DNA
　　C．鸡血不凝固，猪血会凝固
　　D．用鸡血提取DNA比用猪血提取操作简便

　　参考答案:1A 2C 3C 4B 5B
　　归纳总结：
　　物质的提取方法：
　　总的思路——需要将细胞或细胞器破碎，将物质释放出来。
　　常用方法——研磨，破碎细胞；
　　　　　　　　榨汁，破碎细胞；
　　　　　　　　利用渗透吸水原理将细胞破碎
　　物质的分离方法：
　　利用要提取的物质和混合物中杂质在某溶液中的溶解度不同进行分离；
　　利用要提取的物质和混合物中杂质物理、化学性质不同，将杂质分解或沉淀
　　物质的鉴定：利用要提取的物质和某化学试剂产生特殊的颜色反应
　　例题：萝卜贮藏根组织细胞中是否存在蛋白质和DNA？某生物小组对此进行研究，他们从网上查阅资料得知：①蛋白质在10%NaCl溶液中可沉淀析出；②在蛋白质溶液中，加入双缩脲试剂，溶液呈现特有的颜色；③DNA溶于10%NaCl溶液但在95%酒精中呈白色絮状沉淀，析出；④DNA与甲基绿染液结合，在光镜下可见蓝绿色丝状物。
　　实验材料：白萝卜。
　　实验用具：粉碎机、烧杯、漏斗、试管、滤纸、玻棒、镊子、载玻片、天平、纱布。
　　药品及试剂：蒸馏水、NaCl、95%酒精、甲基绿染液、双缩脲试剂、蛋白质标准样品。
　　请你根据所提供的条件参与实验设计并完成实验。
　　一、材料处理：
　　二、提取：
　　三、鉴定及结果：
　　【解析】分析题干知道本实验的实验目的是“探究萝卜贮藏根组织细胞中是否存在蛋白质和DNA”。题干交代的某生物小组从网上查阅的资料是实验原理：①蛋白质在10%NaCl溶液中可沉淀析出是提取蛋白质的原理；②在蛋白质溶液中，加入双缩脲试剂，溶液呈现特有的颜色是鉴定蛋白质的原理；③DNA溶于10%NaCl溶液但在95%酒精中呈白色絮状沉淀，析出是提取DNA的原理；④DNA与甲基绿染液结合，在光镜下可见蓝绿色丝状物是鉴定DNA的原理。
　　分析提供的实验用具可知本实验的{dy}步要用粉碎机将白萝卜榨汁，过滤后依据上述原理分别提取、鉴定。

　　参考答案：
　　一、材料处理：称取50g萝卜冼净切块，加水30ml，粉碎机粉碎，将匀浆经纱布过滤。
　　二、提取：
　　1．向经纱布过滤得到的滤液中加入10%NaCl，直至沉淀析出。经滤纸过滤，将滤纸上的沉淀物放入试管
　　　 中，加入1ml蒸馏水，振荡，用于蛋白质鉴定。
　　2．除去蛋白质的滤液中，加入95%酒精，用玻棒轻轻搅拌，见有白色絮状沉淀产生，经滤纸过滤，用
　　　 镊子将滤纸上的絮状沉淀置于载玻片，用于DNA鉴定。
　　三、鉴定及结果
　　1．在用于蛋白质鉴定的试验试管中，加入双缩脲试剂，产生颜色（紫色）反应，同时将蛋白质标准样
　　　 品和1ml蒸馏水放入另一试管，加入双缩脲试剂产生颜色（紫色）反应。观察到两试管中颜色基本一
　　　 致，说明试验试管中有蛋白质存在。
　　2．在用于DNA鉴定的载玻片上，滴加甲基绿染液，DNA呈现蓝绿色，说明该白色絮状沉淀为DNA。
　　3．通过对白萝卜贮藏根匀浆液的检测，说明有蛋白质和DNA的存在。